申请/专利权人：南通大学

申请日：2020-12-23

公开（公告）日：2021-03-12

公开（公告）号：CN112481272A

主分类号：C12N15/12(20060101)

分类号：C12N15/12(20060101);C12N15/86(20060101);C12N5/10(20060101);A01K67/027(20060101)

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2021.03.30#实质审查的生效;2021.03.12#公开

摘要：本发明提供一种NOVA1促SMN2外显子7列入的验证方法及其应用，验证方法包括如下步骤：（1）RT‑PCR及酶切电泳分析SMN2全长基因在不同组织中的表达；（2）寻找SMN2全长基因在中枢系统中高表达的机制；（3）验证NOVA1是促进SMN2全长基因表达重要的剪接因子；（4）通过体外细胞实验证明敲降和过表达NOVA1显著抑制和促进SMN2外显子7列入；（5）证实NOVA1是通过结合外显子7靶向序列促进SMN2外显子7列入；（6）构建小鼠模型，证实NOVA1治疗脊髓、脑、肌肉SMN2列入比例均明显上升，其中大脑中SMN2外显子7列入上调具有显著差异。本发明证实NOVA1是通过结合外显子7靶向序列促进SMN2外显子7列入，并显著提升SMN蛋白的表达，而且该重组质粒可以在细胞内持续性表达，不用持续性给药。

主权项：1.一种NOVA1促SMN2外显子7列入的验证方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）通过RT-PCR及酶切电泳分析SMN2全长基因在不同组织中的表达；（2）寻找SMN2全长基因在中枢系统中高表达的机制；（3）验证NOVA1是促进SMN2全长基因表达重要的剪接因子；（4）通过体外细胞实验证明敲降和过表达NOVA1显著抑制和促进SMN2外显子7列入；（5）构建SMN2外显子7中NOVA1靶向结合位点突变以及RNApulldown实验，证实NOVA1是通过结合外显子7靶向序列促进SMN2外显子7列入，并显著提升SMN蛋白的表达；（6）构建小鼠模型：构建lenti-virusNOVA1过表达病毒，皮下注射SMA刚出生小鼠，与FastGreen组进行比较，结果显示：NOVA1治疗脊髓、脑、肌肉SMN2列入比例均明显上升，其中大脑中SMN2外显子7列入上调具有显著差异。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南通大学 NOVA1促SMN2外显子7列入的验证方法及其应用

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