申请/专利权人：安康市农业科学研究院

申请日：2021-04-27

公开（公告）日：2022-12-06

公开（公告）号：CN113100062B

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：失效-未缴年费专利权终止

法律状态：2024.05.07#未缴年费专利权终止;2022.12.06#授权;2021.07.30#实质审查的生效;2021.07.13#公开

摘要：本发明公开了一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法，其特征在于，S1：从花魔芋植株上获取未授粉的魔芋雌花段；S2：将花魔芋雌花段进行低温预处理以及外植体消毒；S3：从消毒后的雌花段花梗上剥离出子房，进行预培养；S4：待子房膨大，子房壁裂开，部分出现愈伤组织后，在无菌条件下解剖子房，取出胚珠，进行胚珠愈伤组织诱导培养；S5：待愈伤组织膨大到直径为2cm以上时，将诱导的愈伤组织接种于分化培养基中，进行胚珠愈伤组织分化培养；S6：将胚珠愈伤组织分化得到的芽进行生根培养，获得完整的单倍体植株。本发明利用花魔芋未授粉子房胚珠培养获得单倍体，建立了一套花魔芋胚珠培养再生体系，为花魔芋单倍体育种提供新的技术平台。

主权项：1.一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法，其特征在于，包括以下步骤，S1：从花魔芋植株上获取未授粉的魔芋雌花段；S2：将花魔芋雌花段进行低温预处理以及外植体消毒；S3：从消毒后的雌花段花梗上剥离出子房，进行预培养；S4：待子房膨大，子房壁裂开，部分出现愈伤组织后，在无菌条件下解剖子房，取出胚珠，进行胚珠愈伤组织诱导培养；S5：待愈伤组织膨大到直径为2cm以上时，将诱导的愈伤组织接种于分化培养基中，进行胚珠愈伤组织分化培养；S6：将胚珠愈伤组织分化得到的芽转入12MS基础培养基、浓度为0.5mg•L-1的NAA、30g•L-1蔗糖，5g•L-1琼脂，2g•L-1活性炭的培养基中，进行不定芽生根培养，获得完整的单倍体植株，所述MS基础培养基的pH为5.8；步骤S2的具体操作包括以下步骤，S201：将花魔芋的雌花段置于4°C冰箱预处理2天；S202：将整个的雌花段在自来水下冲洗10-20min，再用75%酒精浸泡30-50s；所述雌花段包括花梗和子房；S203：将酒精浸泡后的雌花段再用次氯酸钠浸泡8-10min；S204：将次氯酸钠浸泡消毒后的雌花段使用无菌水冲洗3-5次后，无菌滤纸吸干备用；步骤S3的具体操作包括以下步骤，S301：从消毒后的雌花段花梗上剥离出子房；S302：切弃子房上的柱头部分，将剩余部分接种于无激素添加的MS基础培养基中培养10-15天；所述MS基础培养基中有蔗糖35gL，琼脂5gL；培养条件为：光照强度2000-30001ux，光照时间16hd，温度28±1℃；步骤S4的具体操作包括以下步骤，S401：待子房膨大，子房壁由浅绿色变为深绿色，子房壁裂开，部分出现愈伤组织后，在无菌条件下解剖子房，去掉子房壁，取出胚珠；S402：将胚珠接种于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养；所述愈伤组织诱导培养基为MS基础培养基、1.0mg•L-1的NAA、1.0mg•L-1的6-BA、35g•L-1的蔗糖和5g•L-1的琼脂，且所述愈伤组织诱导培养基的pH为5.8；培养条件为先暗培10-15d后，再光照培养，光照强度2000-30001ux，光照时间14hd，温度26±1℃；步骤S5中所述的分化培养基为MS基础培养基、浓度为0.5mg•L-1的NAA、浓度为2.0mg•L-1的6-BA、30g•L-1的蔗糖和7g•L-1的琼脂；且所述分化培养基的pH为5.8；胚珠愈伤组织分化培养的培养条件为：光照强度4000-50001ux，光照16hd，温度26±1℃，培养时间30~40d。

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权利要求：

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