申请/专利权人：中国人民解放军总医院第六医学中心

申请日：2023-02-16

公开（公告）日：2023-06-23

公开（公告）号：CN116287202A

主分类号：C12Q1/6883

分类号：C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12Q1/6806

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.07.11#实质审查的生效;2023.06.23#公开

摘要：本发明提供了一种RBP1作为生物标志物诊断房颤的检测方法，通过权重基因共表达网络分析WGCNA得到房颤患者与非房颤患者的差异基因，并采用RT‑qPCR在人外周血样本中进行验证。外周血白细胞提取：取静脉血3‑5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min；小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中；在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min；2500rpm离心10min，弃上清。这种RBP1检测方法，可以作为生物标志物辅助房颤的诊断。视黄醇结合蛋白1是由CRABP1基因编码的蛋白质，它与视黄醇和视黄素高亲和力结合，保护视黄素不被非特异性氧化，并将视黄素送到特定的酶中。RBP1基因表达的改变会影响上皮细胞的视黄酸生成、细胞增殖和微环境，血液生物标志物采样简单、价格低廉。

主权项：1.一种RBP1作为生物标志物诊断房颤的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1外周血白细胞提取，取静脉血3-5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min；2小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中；3在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min；42500rpm离心10min，弃上清；5加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min；63000rpm离心10min，弃上清；7倒置离心管，去掉残液；8得白细胞，-80℃冻存，避免反复冻融；9RNA提取，冻存的白细胞解冻后加入1ml无菌PBS重悬，4℃1000rpm离心1min；10弃掉上清后加入1mlTRIzol裂解细胞，枪头吹打混匀；11室温放置5min，将上清液转移到1.5mlEP管；1212000rpm离心5min，取上清，加入氯仿，振荡混匀后室温放置15min，使其自然分相；134℃12000rpm离心15min，样品分成三层，黄色的有机层，中间层和上层为无色的水相，RNA主要在水相中；13小心吸取上层水相至新的1.5mlEP管中，加入等体积冰冷的异丙醇，-20℃放置1h；144℃12000rpm离心10min；15弃上清，加入1ml75％乙醇，温和振荡EP管，悬浮沉淀；164℃8000rpm离心5min，弃上清，室温晾干5～10min；17用50μlDEPC水溶解RNA沉淀，分光光度计检测RNA浓度，-80℃保存备用；18cDNA合成反应，4.0μl5×PrimeScriptBuffer、1.0μgTotalRNA、20ulRNase-FreeddH2O轻柔混匀，37℃条件下充分反应15min，85℃下反应5s，逐渐降温至4℃；19RT-qPCR反应，10.0μlTBGreenPremixExTaqII、1.0μlForwardPrimer、1.0μlReversePrimer、2.0μlcDNA、20ulRNase-FreeddH2O充分混匀反应溶液，95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火30～34s，40个循环；20将内参基因GAPDH的Ct值标准化处理目标基因Ct值，用2-△△Ct法对样本基因进行表达差异相对定量分析，获得RBP1的表达量。

全文数据：

权利要求：

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