申请/专利权人：重庆医科大学国际体外诊断研究院

申请日：2022-03-08

公开（公告）日：2023-09-19

公开（公告）号：CN114624304B

主分类号：G01N27/327

分类号：G01N27/327;G01N27/416;B22F1/054;B22F9/24;B22F1/16

优先权：["20211209 CN 2021114952062"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.09.19#授权;2022.07.15#实质审查的生效;2022.06.14#公开

摘要：在本专利中，我们提出了一种基于铈银纳米花和分支DNAzyme步行器的miRNA电化学生物传感器。铈银纳米花采用自主创新方法首次制备。独特的三维层状结构提供了大的表面积，其优异的过氧化物酶活性可以放大电化学信号。根据不断分支的催化发夹组装原理，新型分支DNAzyme步行器被合理设计，可切割释放大量邻接子，以便捕获更多的铈银纳米花探针。得益于铈银纳米花和分支DNAzyme步行器的双重放大，所建立的传感器表现出1fM‑1nM的良好线性关系，检测限低至0.89fM。因此，所提出的生物传感器在miRNA相关的基础研究和临床诊断中具有广阔的应用前景。

主权项：1.一种基于铈银纳米花和分支DNAzyme步行器的miRNA电化学传感器，其制备方法包括以下步骤：1、铈银纳米花的合成将90mgBSA分散在20mL超纯水中，然后在室温条件下缓慢加入10mL10mMAgNO3，持续搅拌10分钟；充分混合后，逐滴加入1mL50mg·mL-1AA，溶液颜色逐渐变为浅灰色时提示反应完成；将上述所得产物用超纯水洗涤一次，随后重悬于1mL超纯水中；接下来，将1mL所得产物加入到19mL超纯水中；混合均匀后，加入5mL2.8mMCeNO33并在室温下搅拌10分钟；随后，逐滴加入5mL40mMNaOH，继续反应3-5分钟；上述反应得到的铈银纳米花用超纯水洗涤3次；最后，将其重悬在1mL超纯水中，储存于4℃备用；2、信号探针的制备将1mL所得铈银纳米花溶液与1％的PEI混合，随后在室温下搅拌4小时，使得PEI能充分包裹在纳米材料上；所得产物通过离心富集，然后用超纯水洗涤以去除未结合的PEI；然后，将20μL20μMSP与10mMNHS、40mMEDC混合静置30分钟，以激活SP链上修饰的羧基基团；之后，将100μL包裹PEI的纳米材料与1μM激活SP混合并在4℃下持续搅拌12小时；最后，所得产物用超纯水洗涤3次，分散在1×TE缓冲液中，缓冲液pH为7.4；3、分支DNAzyme步行器的构建为确保发夹二级结构的稳定，在反应之前将每种探针在95℃加热5分钟，然后以0.1℃s的速度缓慢冷却至12℃；退火过程后，100nMHP1、100nMHP2、200nMHP3和修饰底物链的磁珠在反应缓冲液中与不同浓度的靶标混合，该反应缓冲液成分为20mMTris-HCl、10mMMgCl2、10mMKCl、100mMNaCl，pH为7.4，随后在25℃下孵育90分钟以获得稳定的分支DNAzyme步行器；4、miRNA的检测将10μL分支DNAzyme步行器产物和10μL构建好的信号探针先后滴加在电极上，分别在37℃下孵育30分钟；孵育完成后，利用三电极系统在25mL20mMH2O2的磷酸盐缓冲液中进行测量，电压范围为-0.2至0.6V；电压幅度为0.05V。

全文数据：

权利要求：

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