申请/专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司

申请日：2023-06-25

公开（公告）日：2023-10-10

公开（公告）号：CN116854798A

主分类号：C07K14/435

分类号：C07K14/435;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/36

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.10.27#实质审查的生效;2023.10.10#公开

摘要：本发明公开了一种巴斯德毕赤酵母发酵表达重组III型贻贝粘蛋白及其纯化方法，该法首次采用巴斯德毕赤酵母发酵诱导表达的重组III型贻贝粘蛋白发酵液作为原料，采用固液分离、澄清过滤、超滤浓缩、酶促反应、疏水层析、冷冻干燥的方法，提供一种每升发酵液经纯化后获取冻干粉纯品量大于0.85gL、纯度大于95%、L‑3,4二羟基苯丙氨酸含量大于0.9%、内毒素含量小于1EUmg的重组III型贻贝粘蛋白纯化方法，纯化工艺过程简单，极大地降低工业化生产成本，更适于工业化生产。

主权项：1.一种巴斯德毕赤酵母发酵表达重组III型贻贝粘蛋白纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）发酵结束后，将巴斯德毕赤酵母工程菌发酵表达的重组III型贻贝粘蛋白发酵液经高速离心机固液分离，去除沉淀收集上清液；（2）将步骤（1）处理后获取的上清液经膜系统过滤澄清，收集滤出液；（3）将步骤（2）处理后获取的滤出液经超滤浓缩，收集截留液；（4）将步骤（3）处理后获取的截留液中加入硫酸铜和酪氨酸酶进行酶促反应；（5）将步骤（4）处理后的料液中加入氯化钠，并用酸溶液调节pH至3.5~4.0，经用流动相A平衡好的疏水层析柱层析纯化，流动相B洗脱重组III型贻贝粘蛋白，所述流动相A为含≥120gL氯化钠的水溶液，所述流动相B为含70~85gL氯化钠的水溶液，所述疏水层析填料为苯基疏水填料；（6）将步骤（5）处理后获取的重组III型贻贝粘蛋白洗脱液经超滤浓缩、冷冻干燥即可获得重组III型贻贝粘蛋白冻干粉。

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权利要求：

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