申请/专利权人：上海市东方医院(同济大学附属东方医院)

申请日：2023-08-25

公开（公告）日：2023-11-10

公开（公告）号：CN117025513A

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12N5/09

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.11.28#实质审查的生效;2023.11.10#公开

摘要：一种食管类器官癌变组织的制备方法，包括从患者正常食管上皮提取活检组织、或者从小鼠的食管黏膜层提取小鼠食管黏膜；将活检组织或小鼠食管黏膜转移到青‑链霉素的PBS中并清洗；将活检组织或小鼠食管黏膜切碎，加入胰蛋白酶‑EDTA溶液孵育，再加入DMEM培养基，释放单个细胞；待沉淀后，转移上清液；重复，直到共收集10ml含细胞的培养基；然后离心，弃上清液；使用食管类器官培养基重悬细胞并行细胞计数，然后离心、吸净上清液；根据计数结果再次加入食管类器官培养基并重悬细胞；将混合物播种于孔板，再次加入食管类器官培养基培养，第4天去除食管类器官培养基，加入食管类器官癌变诱导培养基培养。培养10天以上，得到食管类器官癌变组织。

主权项：1.一种食管类器官癌变组织的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1从人食管类器官使用患者正常食管上皮提取活检组织、或者从C57BL6小鼠的食管黏膜层提取小鼠食管黏膜；2将活检组织或小鼠食管黏膜转移到4℃预冷的含有100μgml青-链霉素的PBS溶液中并充分清洗；3将步骤2的活检组织或小鼠食管黏膜切成粒径小于0.5厘米的碎片，转移至1.5ml试管并加入含有质量百分比浓度为0.25％胰蛋白酶和质量百分比浓度为0.2％EDTA的D-Hank's平衡盐溶液0.5ml，37℃孵育0.5-1小时，期间每5-10分钟震荡一次；4然后加入1ml含质量百分比浓度为10％FBS、100μgml的青-链霉素的DMEM培养基，并使用移液枪破坏组织结构，释放单个细胞；5静置片刻，待大块组织沉淀后，转移上清液至15ml试管；6重复第4-5步，直到共收集10ml含细胞的培养基；7以300×g、4℃离心步骤5的15ml试管，弃上清液；8使用5ml食管类器官培养基重悬步骤7的细胞并行细胞计数，然后以300×g、4℃离心，吸净上清液；9根据计数结果再次加入食管类器官培养基，每50-100个细胞加1μl培养基，并重悬细胞。10加入与培养基等体积的ECM基质胶并充分混匀，将混合物播种于24孔板或48孔板，再次加入食管类器官培养基培养，隔天更换培养基；11第4天去除食管类器官培养基，加入食管类器官癌变诱导培养基培养；隔天更换癌变诱导培养基，培养10天以上，得到食管类器官癌变组织。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海市东方医院(同济大学附属东方医院) 一种食管类器官癌变组织的制备方法

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