申请/专利权人：泛肽生物科技(浙江)有限公司

申请日：2023-07-11

公开（公告）日：2023-11-24

公开（公告）号：CN117106864A

主分类号：C12Q1/6858

分类号：C12Q1/6858;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.12.12#实质审查的生效;2023.11.24#公开

摘要：本发明提供了一种血浆游离DNA甲基化特异性位点及DMR区段的检测方法，包括：S10：提取血浆样品的cfDNA，采用核酸内切酶MspJI家族成员对cfDNA进行酶切，得到酶切产物；S20：将包被有特异性接头序列的磁珠与酶切产物混合，经连接酶得到磁珠‑酶切产物；S30：收集磁珠‑酶切产物中的磁珠；S40：将连接有特异性探针的流式编码微球与S30得到的磁珠进行混合，混合后进行PCR扩增，得到PCR产物；S50：使用染料对PCR产物进行染色，染色后，对流式编码微球逐颗进行分析，并检测流式编码微球荧光信号和染料荧光信号。本发明解决了现有痕量游离DNA甲基化检测操作复杂的技术问题，实现了提高检测特异度和灵敏度，操作简便的技术效果。

主权项：1.一种血浆游离DNA甲基化特异性位点及DMR区段的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S10：提取血浆样品的cfDNA，采用甲基化修饰依赖型核酸内切酶对cfDNA进行酶切，得到酶切产物；S20：将包被有特异性接头序列的磁珠与所述酶切产物混合，所述磁珠包被的所述特异性接头序列在连接酶的催化下与所述酶切产物的酶切片段粘性末端3'端进行特异性连接，得到磁珠-酶切产物；S30：收集所述磁珠-酶切产物中的磁珠；S40：将连接有特异性探针的流式编码微球及反向引物与所述S30得到的磁珠进行混合，混合后进行PCR扩增，得到PCR产物；S50：使用核酸双链染料对所述PCR产物进行染色，染色后，使用流式细胞仪对所述流式编码微球逐颗进行分析，并检测流式编码微球荧光信号和核酸双链染料荧光信号，将所述流式编码微球荧光信号和所述核酸双链染料荧光信号转化为定量检测结果，计算位点甲基化信息与所述DMR区段的甲基化率。

全文数据：

权利要求：

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