申请/专利权人：泛肽生物科技(浙江)有限公司

申请日：2023-07-12

公开（公告）日：2024-03-12

公开（公告）号：CN117683860A

主分类号：C12Q1/6858

分类号：C12Q1/6858;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.29#实质审查的生效;2024.03.12#公开

摘要：本发明提供了一种血浆游离DNA甲基化特异性位点及DMR区段的检测方法，包括：S10：提取血浆样品的cfDNA，并将cfDNA变成DNA单链；S20：将连有5‑甲基胞嘧啶抗体的磁珠与DNA单链进行混合、孵育，得到磁珠‑甲基化DNA单链；S30：收集磁珠‑甲基化DNA单链中的磁珠，经洗脱，得到甲基化DNA单链；S40：将连有特异性发卡探针H1的流式编码微球、荧光素修饰探针H2与甲基化DNA单链进行混合、孵育；S50：使用流式细胞仪对流式编码微球逐颗进行分析，同时检测流式编码微球荧光信号和探针荧光信号。本发明解决了现有的用于痕量游离DNA甲基化检测操作复杂的技术问题，实现了操作简便，提高检测特异度和灵敏度的技术效果。

主权项：1.一种血浆游离DNA甲基化特异性位点及DMR区段的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S10：提取血浆样品的cfDNA，并将所述cfDNA变成DNA单链；S20：将连有5-甲基胞嘧啶抗体的磁珠与所述DNA单链进行混合、孵育，所述5-甲基胞嘧啶抗体与所述DNA单链上的甲基化位点特异性结合，得到磁珠-甲基化DNA单链；S30：收集所述磁珠-甲基化DNA单链中的磁珠，洗脱得到甲基化DNA单链；S40：将连有特异性发卡探针H1的流式编码微球、荧光素标记的发卡探针H2与所述甲基化DNA单链进行混合、孵育，所述特异性发卡探针H1为连有一段甲基化位点特异性序列的toehold引物的茎环结构；S50：使用流式细胞仪对所述流式编码微球逐颗进行分析，同时检测流式编码微球的荧光信号和所述发卡探针H2的荧光信号，并将所述流式编码微球的荧光信号和所述发卡探针H2的荧光信号转化为定量检测结果，计算位点甲基化信息与所述DMR区段的甲基化率。

全文数据：

权利要求：

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