申请/专利权人：北京豪思生物科技股份有限公司;江苏豪思睦可生物科技有限公司

申请日：2022-05-31

公开（公告）日：2023-12-05

公开（公告）号：CN115144520B

主分类号：G01N30/88

分类号：G01N30/88

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.05#授权;2022.10.25#实质审查的生效;2022.10.04#公开

摘要：本发明提供了一种母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，涉及理化检测技术领域。上述母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，首先将待测母乳样品经固相萃取预处理；随后利用LC‑MS质液联用色谱对预处理后的待测母乳样品进行检测，通过与叶酸和五甲基四氢叶酸的对照品溶液比较进行定量、定性分析。本申请母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法具有选择性好、特异性佳、灵敏度高等特点，在对叶酸和五甲基四氢叶酸分型定量上具有明显的优势，能够有效缓解现有微生物法、化学发光法、液相色谱法等母乳中叶酸的检测方法没有对叶酸和五甲基四氢叶酸进行分型定量的局限性。

主权项：1.一种母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：将待测母乳样品进行预处理；随后利用LC-MS质液联用色谱对预处理后的待测母乳样品进行检测，通过与叶酸和五甲基四氢叶酸的对照品溶液比较进行定量、定性分析；所述预处理包括对待测母乳样品依次进行水解孵育、弱碱皂化和固相萃取的步骤；所述水解孵育为向待测样本中添加内标、保护剂和大鼠血清，然后孵育；或，所述水解孵育为向待测样本中添加内标、保护剂、大鼠血清和氨水，然后孵育；所述水解孵育的保护剂为1%抗坏血酸和0.5%巯基乙醇的水溶液；所述弱碱皂化为：在水解孵育后的待测母乳样品中加入氨水，随后60~90℃金属浴5~30min；所述固相萃取的萃取板为WatersOasisMAX96-wellμElutionPlate；固相萃取的洗脱液为含有90%甲醇，8%稀释液和2%甲酸；所述稀释液为纯甲醇，内含0.1％抗坏血酸钠和0.05％巯基乙醇；所述LC-MS质液联用色谱的色谱条件包括：液相分析色谱柱：规格为50mm*2.1mm,1.8μm的AcquityUPLCHSST3色谱柱；A相为0.1%甲酸水，B相为乙腈；梯度洗脱程序为： 。

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权利要求：

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