申请/专利权人：澳优乳业(中国)有限公司;江南大学

申请日：2022-05-20

公开（公告）日：2023-12-15

公开（公告）号：CN115201392B

主分类号：G01N30/86

分类号：G01N30/86;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/60;G01N30/34

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.15#授权;2022.11.04#实质审查的生效;2022.10.18#公开

摘要：本发明提供了一种基于分子网络的乳品中磷脂的检测方法，包括如下步骤：A对乳品采用溶剂提取，分离得到磷脂提取物；B将磷脂提取物采用UHPLC‑MS进行检测分析，得到色谱数据和质谱数据；C采用MS‑DIAL对色谱和质谱数据进行峰提取、解卷积、化合物识别和峰对齐处理，得到二级质谱图和特征量化表；D利用GNPS平台整合二级质谱图和特征量化表绘制分子网络，联合MS‑DIAL和分子网络方法进行定性分析；E根据所述定性分析结果，提取化合物对应的MS峰面积进行相对含量的计算。本发明提供的分析方法操作简单，分析的磷脂种类多，鉴定结果准确可靠，方便快捷。

主权项：1.一种基于分子网络的乳品中磷脂的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：A）对乳品采用溶剂提取，分离得到磷脂提取物；a）乳品采用氯仿-甲醇进行溶剂萃取，经涡旋、超声、离心，分离有机相，浓缩得到脂质粗提物；所述氯仿-甲醇溶剂中氯仿和甲醇的体积比为2:1；b）将脂质粗提物与丙酮混合，经涡旋、超声、离心，去除上清液，沉淀浓缩即得磷脂提取物；所述丙酮为-20℃下预冷的丙酮；B）对磷脂提取物采用UHPLC-MS进行检测，得到色谱数据和质谱数据；质谱参数为：一级质谱采集模式为全扫描，质量范围为50~1300mz，二级质谱采集模式为DDA和WindowsScanning，其中，DDA参数中：Top-n=10，质量范围为50~1300mz；离子源温度450℃；气帘气40psi；雾化气50psi；辅助气50psi；去簇电压90V；一级碰撞能量5eV，二级碰撞能量40±20eV；一级质谱累积时间0.2s，二级质谱累积时间0.05s；Cycletime0.75s；WindowsScanning参数中：正离子模式喷雾电压为5500V，负离子模式喷雾电压为-4500V，源温度500℃，碰撞能40±20eV，MS1采集范围为50~1300mz，MS1accumulationtime设置为150ms；根据DDA采集模式得到的总离子特征数目及其对应的质荷比、响应强度，设置windowsscanning窗口将MS1的采集范围进行划分；C）采用MS-DIAL对色谱数据和质谱数据进行峰提取、解卷积、化合物识别和峰对齐处理，得到二级质谱图和特征量化表；D）利用GNPS平台对所得二级质谱图和特征量化表进行整合绘制分子网络，联合MS-DIAL和分子网络方法进行定性分析；所述MS-DIAL的参数为：色谱峰的强度阈值为1000amplitude，Massslicewidth为0.1Da，Sigmawindowvalue为0.5，二级质谱背景噪音阈值为10amplitude，同位素离子范围为0.5Da；所述定性分析具体为：i）按照前体离子质量公差和碎片离子质量公差筛选碎片离子，利用余弦值大于0.7和最小匹配的碎片离子设为6建立分子网络；所述前体离子质量公差设置为0.02Da，碎片离子质量公差设置为0.02Da；ii）将GNPS分析结果导入Cytoscape3.8.2软件，绘制可视化网络图；iii）根据可视化网络图中各节点的相似性信息，推断出与已知化合物相似的化合物；对于MS-DIAL识别出的少数不是磷脂或不确定的特征化合物，再次核对其母离子和二级谱图，借助LIPIDMAPS数据库以确定其具体磷脂类别；E）根据所述定性分析结果，提取化合物对应的MS峰面积进行相对含量的计算。

全文数据：

权利要求：

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