申请/专利权人：郑州微飒生物科技有限责任公司

申请日：2021-07-01

公开（公告）日：2023-12-26

公开（公告）号：CN113652448B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/66;C12N15/55;C12N15/12;A01K67/027

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.26#授权;2021.12.03#实质审查的生效;2021.11.16#公开

摘要：本发明提供构建Tp53基因敲除金黄叙利亚仓鼠模型的方法和应用，涉及疾病动物模型及其制备技术领域，所述方法包括：设计仓鼠Tp53基因特异性打靶序列、制备Tp53的打靶质粒载体pX330‑sgRNA、将pX330‑sgRNA显微注射至仓鼠受精卵的细胞核中、然后移植入受体母仓鼠内，F0代仓鼠出生，经鉴定该方法成功构建了Tp53基因敲除金黄叙利亚仓鼠模型。本发明阐述了第一个敲除Tp53基因的金黄叙利亚仓鼠的癌症表型，与Tp53突变的人类癌症类似，在Tp53‑‑仓鼠模型发现多种类型的肉瘤，包括血管肉瘤、骨肉瘤，及低频癌，组织包括肾、胰腺和肾上腺。采用本发明所述方法制备的仓鼠模型能够补充当前小鼠模型，有利于研究Tp53缺乏症导致的人类癌症是如何发生发展，并为新型疗法的研究提供有效动物模型。

主权项：1.构建Tp53基因敲除金黄叙利亚仓鼠模型的方法在制备癌症动物模型中的应用，其特征在于，所述癌症选自髓细胞白血病、浆细胞瘤、肾上腺皮质癌、肾细胞癌、胰腺癌、口腔鳞状细胞癌；所述方法利用CRISPRCas9技术建立Tp53基因敲除的金黄叙利亚仓鼠，所述Tp53基因序列如SEQIDNO:1所示；所述方法包括以下步骤：1设计仓鼠Tp53基因特异性打靶序列，选择第5外显子上序列作为CRISPR作用的靶点设计sgRNA，所述sgRNA序列如SEQIDNO:2所示；2利用pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9质粒获得Tp53的打靶质粒载体pX330-sgRNA；3将所述步骤2制备得到的pX330-sgRNA注射至仓鼠受精卵细胞核中，然后移植入受体母仓鼠内，F0代仓鼠出生，鉴定。

全文数据：

权利要求：

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