申请/专利权人：上海交通大学

申请日：2021-10-21

公开（公告）日：2023-12-26

公开（公告）号：CN114277109B

主分类号：C12Q1/686

分类号：C12Q1/686;C12N15/11;C12N15/53

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.26#授权;2022.04.22#实质审查的生效;2022.04.05#公开

摘要：本发明提供了一种基于常温原核Argonaute蛋白的核酸检测方法及其应用。具体地，本发明提供了一种用于检测靶标核酸分子的检测体系，该体系包含a向导ssDNA对；b常温Argonaute蛋白Ago酶，所述常温Argonaute蛋白Ago酶为以DNA为向导指导剪切靶标DNA的常温Argonaute蛋白Ago酶；c荧光报告核酸，所述荧光报告核酸带有荧光基团和淬灭基团；其中，所述的靶标核酸分子为目标RNA。本发明的方法简便、兼容性好，可以广泛应用于感染性疾病如重大传染性和病原体感染性疾病病毒、病原菌检测领域等领域。

主权项：1.一种用于一步法检测靶标核酸分子的检测体系，其特征在于，该体系包含：a向导ssDNA对，所述的向导ssDNA对包括初级向导ssDNA和次级向导ssDNA，所述的向导ssDNA为5’-磷酸化的单链DNA分子，所述的向导ssDNA的长度为14-60nt；b常温Ago酶，所述常温Ago酶为以DNA为向导指导剪切靶标DNA的常温Ago酶；c荧光报告核酸，所述荧光报告核酸带有荧光基团和淬灭基团；其中，所述的靶标核酸分子为目标RNA；所述常温Ago酶为PbAgo或KmAgo，所述的检测体系还含有镁离子溶液，所述检测体系中，镁离子的浓度为0.5-5mM，所述Ago酶的工作温度为37-42℃；所述的检测体系还含有d进行反转录所需的试剂，所述进行反转录所需的试剂包括反转录酶和RNase抑制剂；所述目标RNA经过反转录形成靶标DNA，被所述常温Ago酶识别剪切，产生次级向导ssDNA，所述的初级向导ssDNA与靶标DNA互补配对，所述的次级向导ssDNA与所述的荧光报告核酸的序列是互补的，所述的次级向导ssDNA与所述的荧光报告核酸的序列互补结合后，引导所述Ago酶对所述荧光报告核酸进行切割，从而产生可检测的信号，并且所述一步法指将反转录反应和检测反应放在一个反应管中进行等温检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海交通大学 基于常温原核Argonaute蛋白的核酸检测方法及其应用

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