申请/专利权人：西北农林科技大学

申请日：2021-04-01

公开（公告）日：2024-01-23

公开（公告）号：CN112941107B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/55;C12N15/113

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.23#授权;2021.07.02#实质审查的生效;2021.06.11#公开

摘要：本发明公开了一种原核Argonaute蛋白的基因编辑应用，通过构建源于细菌的Argonaute蛋白的原核表达载体，以及在转化宿主细胞后对该Argonaute蛋白的表达载体和共转化载体的降解的检测以及基因组位点的检测，发现了其具有被特异性转录本激活并靶向特定DNA靶序列的能力，并且在真核细胞中转录的导向RNA的参与下，实现了对基因组靶序列进行inDel频率为3％的基因编辑。实验结果表明原核Argonaute蛋白可以用于细胞内基因编辑工具的开发。

主权项：1.一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：该基因编辑系统包括核酸酶表达载体，所述核酸酶表达载体包括通过启动子的调控实现表达的原核Argonaute蛋白基因序列，所述核酸酶表达载体表达的原核Argonaute蛋白具有被转录本激活并靶向该转录本对应DNA序列的核酸酶活性；所述原核Argonaute蛋白基因序列选自NgAgo蛋白基因序列、TtAgo蛋白基因序列或选自根据目标宿主细胞的密码子偏好优化后的NgAgo、TtAgo蛋白基因序列；所述基因编辑系统还包括RNA导引激活序列表达载体，RNA导引激活序列表达载体包括通过启动子的调控实现作为所述转录本的RNA导引激活序列的表达的模板；所述RNA导引激活序列选自目标宿主细胞基因组靶序列的同源序列；所述RNA导引激活序列的长度为20～50nt；所述核酸酶表达载体中，启动子为CMV启动子；所述RNA导引激活序列表达载体中，启动子选自U6类启动子；所述基因编辑系统还包括与RNA导引激活序列互补配对的单链DNA片段；所述目标宿主细胞选自真核细胞。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 西北农林科技大学 原核Argonaute蛋白的基因编辑应用

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