申请/专利权人：湖北大学

申请日：2023-12-14

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN117778377A

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10;C12N15/70;C12N15/66

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.16#实质审查的生效;2024.03.29#公开

摘要：本发明公开了基于新型可编程核酸酶Argonaute的大片段DNA高效合成与组装方法，具体为：构建抗性基因重构载体并利用Argonaute对其进行线性化处理，将目标DNA分成多个小片段DNA并合成，再将小片段DNA装载到抗性基因重构载体中，利用SLIC克隆和抗性基因重构实现目标DNA的组装。本发明方法综合了SLIC克隆和抗性基因重构策略，重构一次抗性基因可以组装5‑6个小片段，效率更高效，周期短，而且可以根据DNA的片段长度，灵活选择重构抗性基因的次数，本发明也不会引入由PCR带来的突变，重构后的大片段无需进行二次测序，节省时间和成本。本发明为大片段DNA的合成与组装技术提供了新的思路。

主权项：1.一种基于新型可编程核酸酶Argonaute的大片段DNA高效合成与组装方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、构建抗生素抗性基因重构载体pNEWAmpr质粒，所述pNEWAmpr质粒含有填充片段和抗性基因片段，且抗性基因片段之间有mbp的同源序列；S2、利用Argonaute和gDNA切除pNEWAmpr质粒中的填充片段，得到3’端突出mnt的线性载体；S3、将目标DNA分成n个450-500bp的小片段DNA，合成小片段DNA并引入mnt与线性载体同源互补的序列；S4、将S2得到的线性载体与S3合成的小片段DNA混合后转化大肠杆菌感受态细胞，得到重组质粒pNEWAmpr1,2,3,……,n；S5、基于Argonaute和抗性基因重构对重组质粒pNEWAmpr1,2,3,……,n进行组装。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 湖北大学 基于新型可编程核酸酶Argonaute的大片段DNA高效合成与组装方法

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