申请/专利权人：山东省食品药品检验研究院

申请日：2023-10-20

公开（公告）日：2024-01-02

公开（公告）号：CN117106031B

主分类号：C07K7/08

分类号：C07K7/08;G01N33/68;G01N30/02;G01N30/72

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.02#授权;2023.12.12#实质审查的生效;2023.11.24#公开

摘要：本发明公开了一种驯鹿角、驼鹿角和狍鹿角共有特征肽段及其应用，属于多肽及检测技术领域。所述的驯鹿角、驼鹿角和狍鹿角共有特征肽段氨基酸序列为TGETGASGPP+15.99GFAGEK；P+15.99为脯氨酸P被羟基化修饰为羟脯氨酸，分子量比脯氨酸增加15.99。应用驯鹿角、驼鹿角和狍鹿角共有特征肽段鉴别鹿角真伪的方法操作简单，灵敏度高，能准确判别鹿角样品是否为驯鹿角、驼鹿角或狍鹿角三种伪品鹿角，检测效率高，为保证鹿角及含鹿角的制剂的质量提供科学方法，对保证鹿角及含有鹿角药品的质量具有重要的意义。

主权项：1.一种驯鹿角、驼鹿角和狍鹿角共有特征肽段在鉴别鹿角中的驯鹿角、驼鹿角和狍鹿角的应用，其特征在于，鉴别鹿角真伪的方法为，将待检测样品溶液注入液相色谱-高分辨质谱联用仪，获得总离子图，提取待检测样品的一级质谱和二级质谱，以驯鹿角、驼鹿角和狍鹿角共有特征肽段为对照，判断待检测样品溶液中是否含有驯鹿角、驼鹿角或狍鹿角成分；采用电喷雾正离子模式检测，获得350～1550Th范围内的高分辨质谱总离子流图，选择以mz=739.844±0.005双电荷为检测离子，如果检测出上述离子，且二级质谱中主要碎片离子为721.351±0.005、818.404±0.005、404.214±0.005，则判断待检测鹿角样品中含有驯鹿角、驼鹿角或狍鹿角成分；所述的驯鹿角、驼鹿角和狍鹿角共有特征肽段氨基酸序列为TGETGASGPP+15.99GFAGEK；所述的待检测样品溶液的制备方法为：向20mg待检测样品中加入1mL变性缓冲液，然后加入50μL的0.5molLDTT溶液，置于90℃保温处理4h，取出，放冷至室温，加入120μL的0.55molLIAA溶液，摇匀，避光反应60min，离心，取上清液200μL置于10k超滤管中，离心，截留物加200μL的1%碳酸氢铵溶液和5μL胰蛋白酶溶液，涡旋2min，置于37℃恒温培养箱中酶解30min，0.22μm滤膜过滤，得待检测样品溶液；液相色谱条件为：ThermoHypersilGOLDC18色谱柱，100mm×2.1mm，3μm；柱温40℃；流动相A为0.1%甲酸，流动相B为含有0.1%甲酸乙腈，梯度洗脱，进样量为5μL，流速0.3mLmin；高分辨质谱条件为：ThermoFusion-Orbitrap高分辨质谱仪，ESI离子源，正离子模式，喷雾电压为2.1kV，离子传输管温度为320℃，S-Lens传输效率设置为60%；一级质谱采用Orbitrap作为质量分析器，采集范围为350～1550Th，二级质谱采用离子阱作为质量分析器，采用HCD碎裂模式，碎裂能量NCE设置为40%；选择mz=739.844±0.005双电荷作为检测离子。

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