申请/专利权人：长春科技学院

申请日：2020-12-16

公开（公告）日：2024-02-02

公开（公告）号：CN112611873B

主分类号：G01N33/68

分类号：G01N33/68;G01N30/02;C12Q1/6851

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.02#授权;2021.04.23#实质审查的生效;2021.04.06#公开

摘要：本发明公开了一种鹿角盘治疗乳腺炎的有效组分的鉴定方法，包括以下步骤：S1设置梯度浓度的鹿角盘提取物；S2确定并筛选炎症细胞因子的变化水平；S3确定并筛选出效果峰值，收集效果峰值对应的处理液；S4单组分峰的验证，确验证效果峰值的处理液；S5确定有效组分的化学成分；本发明的有益效果是：选取鹿角盘，经过预处理、设置浓度梯度、免疫实验以及酶联免疫吸附剂测定、实时荧光定量PCR检测和免疫印迹分析、指纹图、灰色关联分析、单组分峰的验证以及液相色谱‑质谱联用仪非靶向代谢组学，得到详细组分，实现综合判定药效以及准确鉴定。

主权项：1.一种鹿角盘治疗乳腺炎的有效组分的鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：S1设置梯度浓度的鹿角盘提取物；S2将得到的梯度浓度的鹿角盘提取物进行小鼠动物的免疫实验，提取实验过程中不同阶段的小鼠的乳腺组织，并分离出其中的乳腺上皮细胞，对得到的乳腺上皮细胞进行酶联免疫-实时荧光检测，确定并筛选炎症细胞因子的变化水平；S3针对筛选出的炎症细胞因子的变化水平，利用指纹图谱，同时进行灰色关联分析，确定并筛选出效果峰值，收集效果峰值对应的处理液；S4将得到的效果峰值对应得到处理液分别进行单组分峰的验证，确定效果峰值的参与量以及相应炎症细胞因子的变化水平，得到验证后的效果峰值的处理液，即为所述的有效组分的效果峰值的处理液；S5针对验证后的效果峰值的处理液，利用液相色谱-质谱联用仪非靶向代谢组学，确定有效组分的化学成分，即为完成所述的有效组分的鉴定；所述的鹿角盘提取物通过以下步骤制备而成：Ⅰ选取不同产地以及生长不同时间的鹿角盘，将选取的鹿角盘经过预处理后，得到鹿角盘的提取物；Ⅱ将得到的鹿角盘的提取物分多份，经过不同量的去离子水稀释，得到梯度浓度的鹿角盘提取物；所述的预处理为，a.将选取的鹿角盘经过研磨粉碎后，得到鹿角盘粉末；b.将得到的鹿角盘粉末至于超纯水中，边搅拌边梯度加热至沸腾，沸腾2-6h后，趁热分梯度过滤，得到鹿角盘的初步水提物以及鹿角盘的沉淀物；c.将得到的沉淀物干燥后打散成粉后，置于超纯水中，多次循环步骤b，进一步得到鹿角盘的精制水提物以及多次循环过滤水提物，两者混合，即为鹿角盘的水提物，废弃最终循环后的残渣；d.将得到的精鹿角盘的精制水提物、多次循环过滤水提物以及鹿角盘的水提物混合均匀，即得到鹿角盘的提取物；所述的梯度加热为，将鹿角粉按照1gs的速度加入到超纯水中，边搅拌边按照2℃min的升温速率逐渐加热到40℃，同时维持40℃的温度5min，随后按照5℃min的升温速率逐渐加热到80℃，同时维持70℃的温度10min，最后按照3℃min的升温速率逐渐加热到110℃后，稳定5min；所述的分梯度过滤为，将沸腾后的混合液按照5mls的速率多次过滤，具体步骤为：先按照5℃min的降温速率降低到60℃后，维持温度进行第一次过滤；再按照3℃min的降温速率降低到30℃后，维持温度进行第二次过滤；最后在常温下进行第三次过滤。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 长春科技学院 一种鹿角盘治疗乳腺炎的有效组分的鉴定方法

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