申请/专利权人：中国海洋大学三亚海洋研究院;中国海洋大学

申请日：2023-10-24

公开（公告）日：2024-01-26

公开（公告）号：CN117106698B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;G01N1/28

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.26#授权;2023.12.12#实质审查的生效;2023.11.24#公开

摘要：本发明涉及海洋鱼类肝、鳃组织细胞核的提取方法，属于细胞核提取技术领域。本发明解决的技术问题是提供一种海洋鱼类肝、鳃组织细胞核的提取方法。该方法包括以下步骤：S1、组织裂解：取海洋鱼类的组织，加入NE1裂解液中破碎并裂解，得到浑浊液；S2、细胞核释放：用细胞筛将S1步骤得到的浑浊液过滤，滤液离心，得到沉淀；S3、细胞核洗涤：用洗涤缓冲液洗涤S2步骤得到的沉淀，得到海洋鱼类组织细胞核。本发明方法，能够在较短时间内从海洋鱼类肝组织或鳃组织中成功分离提取大量较为纯净的完整的细胞核，且操作过程简单，无需特殊仪器设备，利用离心机及显微镜等常见实验室仪器即可完成细胞核提取过程，整个过程用时短，具有较强的实用性。

主权项：1.海洋鱼类肝、鳃组织细胞核的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、组织裂解：取海洋鱼类的组织，加入NE1裂解液中破碎并裂解，得到浑浊液；S2、细胞核释放：用细胞筛将S1步骤得到的浑浊液过滤，滤液离心，得到沉淀；S3、细胞核洗涤：用洗涤缓冲液洗涤S2步骤得到的沉淀，得到海洋鱼类组织细胞核；控制S1、S2和S3步骤的温度在0～4℃；NE1裂解液成分及配比为：以50mLNE1裂解液计，由以下组分组成：1mL1MHEPES-KOH缓冲液pH7.9，500µL1MKCl溶液，500µL10%聚乙二醇辛基苯基醚溶液，10mL甘油，用dH2O定容至50mL；洗涤缓冲液成分及配比为：以50mL洗涤缓冲液计，由以下组分组成：1mL1MHEPES溶液pH7.5，1.5mL5MNaCl溶液，用dH2O定容至50mL；所述组织为肝组织或鳃组织，且当组织为肝组织时，从S1步骤加入NE1裂解液到S2步骤过滤完成的时间为3～4min；当组织为鳃组织时，从S1步骤加入NE1裂解液到S2步骤过滤完成的时间为9～10min；所述海洋鱼类为驼背鲈或豹纹鳃棘鲈；S1步骤中，肝组织与NE1裂解液的配比为：20～30mg肝组织:1700μLNE1裂解液；鳃组织与NE1裂解液的配比为：20～25mg鳃组织:1700µLNE1裂解液；S1步骤中，当组织为肝组织时，所述破碎为先用剪刀剪碎，然后用杵捣碎至无肉眼可见组织块；当组织为鳃组织时，所述破碎为用剪刀剪碎至组织颗粒最大粒径小于1mm；S2步骤中，细胞筛孔径为40μm；S2步骤中，离心条件为：800xg，4℃，2～3min。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国海洋大学三亚海洋研究院;中国海洋大学 海洋鱼类肝、鳃组织细胞核的提取方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD