申请/专利权人:夏同生物科技(苏州)有限公司
申请日:2023-11-20
公开(公告)日:2024-02-02
公开(公告)号:CN117264892B
主分类号:C12N5/0793
分类号:C12N5/0793
优先权:
专利状态码:有效-授权
法律状态:2024.02.02#授权;2024.01.09#实质审查的生效;2023.12.22#公开
摘要:本发明提供了一种内侧神经节隆起祖细胞MGE和GABA中间神经元的体外制备方法,包括如下步骤:提供人诱导神经前体细胞,将HiNPC接种在聚‑L‑鸟氨酸氢溴酸盐与层粘连蛋白包被的培养板上,采用MGE分化培养基进行分化培养,直至形成细胞簇;将细胞簇转移并接种于MGE分化培养基中,去除细胞球表面的死细胞,倾斜培养装置,吸出部分培养基,再次添加MGE分化培养基,培养14~15天,即得内侧神经节隆起祖细胞。收集内侧神经节隆起祖细胞球体再次进行分化培养,得GABA中间神经元。该方法从源头开始不经历诱导性多能干细胞阶段,一开始就限制在了神经外胚层,分化方向更精确且可以在相对较短时间内获得内侧神经节隆起祖细胞。
主权项:1.一种内侧神经节隆起祖细胞的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:提供人诱导神经前体细胞;将人诱导神经前体细胞接种于聚-L-鸟氨酸氢溴酸盐与层粘连蛋白包被的培养板上,采用MGE分化培养基进行分化培养,所述MGE分化培养基的组成包括:DMEMF12,体积比1%的N2添加剂,体积比1%的NEAA,1~2μM嘌吗啡胺,所述分化培养的过程包括:隔天更换新鲜MGE分化培养基,直至形成细胞簇;将细胞簇转移并接种于新鲜MGE分化培养基中,去除细胞球表面的死细胞,倾斜培养装置,吸出部分培养基,再次添加新鲜MGE分化培养基,培养14~15天,即得内侧神经节隆起祖细胞MGE。
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