申请/专利权人：江苏省农业科学院;扬州大学

申请日：2021-09-17

公开（公告）日：2024-02-06

公开（公告）号：CN113736799B

主分类号：C12N15/45

分类号：C12N15/45;C12N15/85;C12N7/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.06#授权;2021.12.21#实质审查的生效;2021.12.03#公开

摘要：本发明提供山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆构建方法及其应用，属于生物技术领域。该构建方法包括：以山羊副流感病毒3型的总RNA反转录产物为模板，扩增A、B、C和D片段；将片段A和B、片段C和D分别插入pCI‑neo‑1载体中，得到重组载体pCI‑A‑B、pCI‑C‑D；以pCI‑A‑B为模板，扩增片段A‑B；以pCI‑C‑D为模板，扩增C‑D片段；将线性化pYES1L载体、A‑B和C‑D片段混和，导入酵母内进行同源重组，得到山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆质粒。本发明构建方法效率高，得到的感染性cDNA克隆拯救的病毒感染细胞后能够快速产生细胞病变，病毒滴度高，且保持稳定。

主权项：1.山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将SEQIDNO:1所示序列插入pCI-neo质粒，得到重组质粒pCI-neo-1；（2）以山羊副流感病毒3型毒株JS14-2株的总RNA的反转录产物为模板，用引物AF1、AF2和AR扩增A片段，用引物BF和BR扩增B片段，用引物CF和CR扩增C片段，用引物DF、DR1和DR2扩增D片段；将扩增得到的片段A和B插入步骤（1）所述pCI-neo-1中，得到重组载体pCI-A-B；将扩增得到的片段C和D插入步骤（1）所述pCI-neo-1中，得到重组载体pCI-C-D；（3）以步骤（2）所述pCI-A-B为模板，用引物AB-F和AB-R扩增片段A-B；以步骤（2）所述pCI-C-D为模板，用引物CD-F和CD-R，扩增C-D片段；以pYESlL质粒为模板，用引物Vector-F和Vector-R扩增，获得线性化的pYES1L载体；（4）将步骤（3）所述线性化的pYES1L载体、A-B和C-D片段混和，导入酵母内进行同源重组，得到山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆质粒pYES1L-CPIV3；所述引物AF1、AF2、AR、BF、BR、CF、CR、DF、DR1、DR2、AB-F、AB-R、CD-F、CD-R、Vector-F和Vector-R的序列分别如SEQIDNO:2-17所示；所述山羊副流感病毒3型毒株JS14-2株的保藏号为CCTCCNO:V201832。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏省农业科学院;扬州大学 山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆构建方法及其应用

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