申请/专利权人：五邑大学

申请日：2023-10-07

公开（公告）日：2024-02-09

公开（公告）号：CN117538296A

主分类号：G01N21/552

分类号：G01N21/552;G01N33/68

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.01#实质审查的生效;2024.02.09#公开

摘要：本发明公开了棘突蛋白受体结合域对hACE2受体分子的亲和力分析方法及其应用，涉及生物技术领域。通过该亲和力分析方法能够避免研究单一位点突变及影响不能反映出局部区域中其它突变位点的交互影响或者协同作用的局限性，通过进行合理的亚结构域划分，以及独特的实验设计和系统技术详实地检测新冠病毒各亚结构域突变对RBD亲和力的影响，并对比单一位点突变的影响验证RBD与ACE2高亲和作用的关键位点和重点亚结构域。

主权项：1.一种棘突蛋白受体结合域对ACE2受体分子的亲和力分析方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、通过对原型株新冠病毒和其它密切相关病毒棘突蛋白RBD和ACE2形成的复合体结构的比较，将棘突蛋白RBD与ACE2作用接触面以凸起两端和中间凹陷区域划分为不同的亚结构域；S2、以新型冠状病毒原型株棘突蛋白为模板，将至少一个所述亚结构域替换为其它密切相关病毒棘突蛋白RBD的对应亚结构域，形成结构域替换嵌合体蛋白；S3、以新型冠状病毒原型株棘突蛋白RBD蛋白DNA分子为骨架，通过分子生物学方法构建所述结构域替换嵌合体蛋白的表达质粒；S4、表达、纯化得到所述结构域替换嵌合体蛋白，即得新冠病毒棘突蛋白嵌合突变子蛋白；S5、通过SPR技术测量所述新冠病毒棘突蛋白嵌合突变子蛋白的结合动力学参数，参考新型冠状病毒原型株棘突蛋白的结合动力学参数，从而解析每个亚结构域对棘突蛋白RBD和ACE2相互作用的影响；S6、综合步骤S5分析得到的不同新型冠状病毒棘突蛋白亚结构域对于RBDACE2相互作用的影响，确认新型冠状病毒棘突蛋白RBD作用于ACE2受体分子高亲和力作用的关键结构域；并对原型株新冠病毒棘突蛋白的所述关键结构域中的关键氨基酸残基进行单点突变，获得新冠病毒棘突蛋白RBD单点突变子蛋白；S7、通过SPR技术测量所述新冠病毒棘突蛋白RBD单点突变子蛋白的结合动力学参数，参考新型冠状病毒原型株棘突蛋白的结合动力学参数，从而解析亚结构域和单点突变对于分子间相互作用的影响；S8、综合步骤S1～S7的分析结果，结合棘突蛋白RBD与ACE2的分子作用机制，确认RBD与ACE2复合体接触面上高亲和力作用亚结构域。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 五邑大学 棘突蛋白受体结合域对hACE2受体分子的亲和力分析方法及其应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD