申请/专利权人：河南科技大学

申请日：2022-01-20

公开（公告）日：2024-03-12

公开（公告）号：CN114524911B

主分类号：C08F292/00

分类号：C08F292/00;C08F220/34;C08F222/38;C08F230/06;C08F226/06;C08J9/26;B01J31/06

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.12#授权;2022.06.10#实质审查的生效;2022.05.24#公开

摘要：本发明涉及一种葡聚糖内切印迹模拟酶、制备方法及其应用，属于新材料技术领域，本发明采用分子印迹技术，借鉴生物酶的催化过程和机理，基于生物源交联功能单体和可聚合离子液体，应用表面接枝共聚合法，在芳香硼酸化纳米硅胶微球表面仿生设计和构建高活性印迹模拟酶，通过高通量筛选，研制葡聚糖内切印迹酶。本发明的成果具有重要的理论价值和广阔的应用前景，所得仿生模拟酶可用于纤维素类物质的高效降解与回收利用，将产生显著的经济和生态效益，并为贯彻循环经济理念，推进资源节约型和环境友好型社会建设提供技术支撑。

主权项：1.一种葡聚糖内切印迹模拟酶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）生物源性交联功能单体的制备：所述生物源性交联功能单体为甲基丙烯酸基氨基酸甲酯；所述甲基丙烯酸基氨基酸甲酯的制备：在四口瓶中加入氨基醇、二氯甲烷和三乙胺，0℃下缓慢滴加甲基丙烯酰氯，搅拌后升温至25℃，采用薄层色谱法监测至反应完全，产物用乙酸乙酯、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠水溶液萃取，所得有机相加入无水硫酸钠脱水干燥12h，产物真空抽滤后，经旋转蒸发仪浓缩，置真空干燥箱40℃干燥至恒重，采用柱层析方法进行产物的分离和纯化；（2）芳香硼酸化纳米硅胶微球的制备：将10g-20g纳米级二氧化硅微球用50mL-100mL浓度为20%的盐酸溶液回流反应6h，8000rpm离心分离，倾去上清，固体用去离子水洗涤至中性，150℃真空干燥至恒重，制备活化二氧化硅纳米微球；将所述活化二氧化硅微球1g、3-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷750µL、氨基苯硼酸0.5g和三乙胺250µL加入25mL的无水乙醇中，90℃搅拌反应4h，产物依次经1molL碳酸氢钠和1molL盐酸水溶液离心洗脱，最后用去离子水洗脱至上清液pH为中性，再用乙醇洗脱3次，将产物置真空干燥箱60oC干燥至恒重，最后获得芳香硼酸化纳米硅胶微球；（3）MIC微球的高通量制备：在96孔板上进行MIC的高通量制备，将1mmol的模板分子和交联功能单体、可聚合离子液体和N，N-亚甲基双丙烯酰胺溶于20mL-100mLpH7的磷酸盐缓冲液中，超声混匀，与步骤（2）所得芳香硼酸化纳米硅胶微球的乙醇溶液混合，震荡混匀，在氮气的保护下加入10%过硫酸铵溶液和5%N，N，N'，N'-四甲基乙二胺溶液，将混合溶液取150µL-200µL置于96孔板的微孔中，密封后，25oC下引发聚合24h，制得MIC微球；所述模板分子为麦芽糖、纤维二糖、纤维三糖、纤维四糖和纤维五糖中的任意一种，所述交联功能单体的加入量为模板分子摩尔量的2-5倍，离子液体的加入量为模板分子摩尔量的2-5倍，N，N-亚甲基双丙烯酰胺的添加量为模板分子摩尔量的8-20倍；10%过硫酸铵溶液和5%N，N，N'，N'-四甲基乙二胺溶液的加入量分别为200µL-300µL和200µL-500µL；芳香硼酸化纳米硅胶微球的添加量为溶液总质量的5%-15%；（4）MIC微球的洗脱：将步骤（3）所得MIC微球经去离子水离心洗脱后除去未反应的组分，再用0.5molL-1的氯化钠溶液反复洗脱，除去模板分子，直至洗脱液中无模板分子出现为止，制得葡聚糖内切印迹模拟酶。

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百度查询： 河南科技大学 一种葡聚糖内切印迹模拟酶、制备方法及其应用

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