申请/专利权人：东南大学

申请日：2021-08-16

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN113789364B

主分类号：C12Q1/6806

分类号：C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.15#授权;2021.12.31#实质审查的生效;2021.12.14#公开

摘要：本发明公开超微量的全长总RNA测序文库的构建方法，包括以下步骤：1）对获得细胞或者亚细胞样本中的超微量的总RNA，进行cDNA文库的构建，获得包含rRNA序列信息的cDNA文库；2）对获得的cDNA文库进行无偏性扩增；3）根据相应物种的rRNA序列，设计sgRNA序列组合；4）将sgRNA序列组合配置的溶液与步骤扩增产生的cDNA文库进行混合，获得不包含rRNA信息的cDNA文库。本发明能够实现超微量的总RNA及全长建库，同时又能够在cDNA合成之后使用CRISPRCas9高效切割PCR扩增产生的含有rRNA的cDNA文库，从而避免RNA的降解；适用于超低起始量的转录组建库，且花费较低。

主权项：1.一种超微量全长RNA测序文库的构建方法，其特征在于，所述构建方法主要包括以下步骤：1）获得小鼠细胞或者小鼠亚细胞样本中的超微量的总RNA，构建包含rRNA序列信息的cDNA文库；2）对步骤1）中获得的cDNA文库进行扩增；3）根据细胞或者亚细胞相应物种的rRNA序列，设计特异性的sgRNA序列组合，所述的sgRNA序列组合包括SEQIDNo.1-SEQIDNo.58；4）将sgRNA序列组合配置的溶液与步骤2）扩增的cDNA文库进行混合，利用CRISPRCas9系统在Cas9蛋白作用下进行特异性的切割，获得不包含rRNA信息的cDNA文库。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东南大学 一种超微量全长RNA测序文库的构建方法

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