申请/专利权人：北京市农林科学院

申请日：2024-02-08

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN117721157A

主分类号：C12N15/89

分类号：C12N15/89

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.05#实质审查的生效;2024.03.19#公开

摘要：本发明公开了一种异色瓢虫胚胎单针双次显微注射方法及所使用的显微注射石英微针，属于昆虫生理学和遗传工程学领域。所述方法包括下述步骤：制备显微注射石英微针；制备注射材料；瓢虫胚胎采集；单针双次显微注射；胚胎的孵化和培养。所使用的显微注射石英微针的尖端有30‑45度的倾斜角，显微注射石英微针是用P‑2000micropipettepuller高级显微注射针管拉制仪制备。本发明具有以下优点：利用注射针刺破卵壳释放卵内压力后，再次注射外源核苷酸等物质；与单针单次注射相比，释放卵内压力再次注射后，异色瓢虫胚胎孵化率可以达到50%以上。

主权项：1.一种异色瓢虫胚胎单针双次显微注射方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：（1）、制备显微注射石英微针：P-2000micropipettepuller高级显微注射针管拉制仪制作用于向异色瓢虫胚胎注射材料的极细石英微针，仪器参数设置为加热强度：700；加热丝：5；拉伸速度：35mms；延迟时间：145s；拉伸强度：250；然后用EG-401microgrinder磨针仪将石英微针的尖端打磨出30-45度的倾斜角；（2）、制备注射材料：根据实验目的，准备相关的注射物质，调整注射物质浓度至该注射物质能起作用的浓度，并放入-80℃冰箱储存备用或直接用移液器将注射物质转入步骤（1）制备的石英微针中；（3）、瓢虫胚胎采集：异色瓢虫产卵后，立即收集卵粒，用小毛笔将其整齐的排列在载玻片的胶条上，在异色瓢虫胚胎发育的单细胞阶段完成全部显微注射过程；（4）、单针双次显微注射：首先，用移液器将注射物质转入步骤（1）制备的石英微针中，将注射微针与注射系统的机械臂相连，将注射泵参数设置为入口压力：450；时间：0.30s；出口压力：45；然后，在卵的底部一侧将注射针插入卵内，但不推入注射物质，随后将注射针拔出，释放卵内的压力；最后，在距离首次注射点270微米水平位置处，再次将注射针插入卵内同时推入注射物质；所述注射系统为型号为FemtoJet4i，Injectman4microinjectionsystem的Eppendorf显微注射系统；（5）、胚胎的孵化和培养：将显微注射后的胚胎放置在标准的养虫环境中饲养。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京市农林科学院 一种异色瓢虫胚胎单针双次显微注射方法及所使用的显微注射石英微针

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