申请/专利权人：贵州大学

申请日：2021-12-24

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN114235536B

主分类号：G01N1/28

分类号：G01N1/28;G01N1/30

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2022.04.12#实质审查的生效;2022.03.25#公开

摘要：本发明公开了一种观察两年生马尾松茎干木质素沉积的切片制备方法，包括取样、固定、软化、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片、烤片、脱蜡、染色及封片处理步骤。通过本发明的技术方案，较传统的徒手切片观察木质素沉积以及传统石蜡切片方法观察茎干组织结构更具高效性和完整性，并具有多功能性，能够获得一种完整清晰观察马尾松茎干木质素沉积的切片，且能够同时观察到清晰完整的茎干组织结构，为探索生马尾松茎干的次生生长过程奠定基础。

主权项：1.一种观察两年生马尾松茎干木质素沉积的切片制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1取样及固定取两年生马尾松茎底部5mm左右长茎段置于FAA固定液中，4℃冰箱固定48h以上，所述FAA固定液为90ml70％乙醇、5ml甲醛、5ml冰醋酸和5ml丙三醇的混合溶液；2软化从FAA固定液中将茎段取出，用蒸馏水将茎段表面的固定液冲洗干净，然后将茎段置于1:1，vv的过氧化氢-冰醋酸混合溶液放置5h后，再转入装有1:1，vv的70％叔丁醇-丙三醇混合溶液中，并封闭置于50℃恒温箱中处理7d，每天更换一次1:1，vv的70％叔丁醇-丙三醇混合溶液；3脱水将软化好的茎段用70％乙醇进行首次脱水，期间进行四次溶液的更换，每次在70％乙醇中脱水2h，之后置于4℃冰箱中过夜存放；次日用85％、95％、100％三个浓度梯度的乙醇进行脱水，85％和95％浓度的乙醇的脱水时间为2h，100％乙醇脱水两次，每次时间为1h；4透明将脱水完后的茎段在1:1，vv的100％二甲苯+无水乙醇溶液中过渡2h，过渡完成后在100％二甲苯溶液中透明两次，时间均为2h，透明结束后置于1:1，vv的100％二甲苯+石蜡溶液中，在40℃恒温箱中进行过夜存放；5浸蜡将透明后的茎段放置在60℃恒温箱中进行浸蜡处理，浸蜡过程全部使用纯蜡，期间要进行6次纯蜡的更换，间隔时间分别为4h、2h、2h、2h、2h、过夜；6包埋将最终过夜浸蜡后的茎段在次日进行包埋处理，具体将茎段及石蜡一起倒入不锈钢包埋底模中，根据切片的需要用解剖针调整材料的位置，贴上塑料包埋盒，从塑料包埋盒上部再倒入一些熔好的石蜡，常温下冷却5min后置于冰上进行急速凝固，而后退掉不锈钢底模，得到与塑料包埋盒紧密连接的石蜡块；7切片、贴片及烤片将包埋后的石蜡块修整整齐，用切片机切成8～12μm的薄片，并将薄片转移到载玻片上，将载玻片放置在40℃展片机上5min后，拿起载玻片竖放至多余的水分流掉，而后将载玻片放在40℃烘箱中干燥1d，在放置切片前，在载玻片上滴1滴甲液和2滴乙液并混合均匀，所述甲液组分为：1.5g明胶、5ml甘油、2g苯酚、100ml蒸馏水；乙液组分为：4ml甲醛、100ml蒸馏水；8脱蜡将烘干后的切片在100％二甲苯溶液中进行3次脱蜡处理，每次处理时间为3min，然后在1:1，vv的100％二甲苯+100％乙醇溶液中过渡3min，后转移至100％乙醇溶液中进行两次处理，每次时间为3min，再换至95％乙醇溶液中浸泡3min；9染色将脱蜡后的切片转移至5％间苯三酚+95％乙醇溶液处理3min，后用浓盐酸处理1min进行染色；10封片将染色后的切片依次转移至95％乙醇溶液、100％乙醇溶液、100％二甲苯+100％乙醇溶液、100％二甲苯溶液、100％二甲苯溶液中各处理3min后进行封片处理，封片剂为1:2，vv的100％二甲苯+中性树胶溶液，封片结束立即进行拍照观察处理。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 贵州大学 一种观察两年生马尾松茎干木质素沉积的切片制备方法

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