申请/专利权人：南京邮电大学

申请日：2023-12-25

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117741147A

主分类号：G01N33/574

分类号：G01N33/574;G01N33/68;C12Q1/6844;C12Q1/6886;G01N21/65;C12N15/115;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明属于功能纳米探针技术和生物检测领域，公开了细胞膜蛋白同源与异源二聚SERS同时检测试剂盒及检测方法，所述试剂盒包括膜蛋白识别探针、滚环扩增RCA试剂和SERS探针，当膜蛋白发生二聚时，膜蛋白识别探针两两靠近发生DNA邻近连接，从而触发RCA试剂形成包含周期性重复序列的长链产物，进而将探针捕获到细胞膜表面并组装成链状聚集体输出增强的SERS信号。该试剂盒能够在复杂的自然细胞微环境中，对同源与异源二聚体蛋白同时进行高灵敏的SERS检测，为肿瘤转移、发展过程中膜蛋白二聚体的分子转导机制提供新的检测和分析方法，在细胞间信号网络分析、分子诊断和细胞靶向治疗等方面具有广泛的应用前景。

主权项：1.细胞膜蛋白同源与异源二聚SERS同时检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：膜蛋白组锚定链、RCA试剂、SERS探针；所述膜蛋白组锚定链包含三条受体蛋白单体锚定链T1、T2、T3，其中T1、T2链分别用于锚定同源二聚的第一蛋白单体和第二蛋白单体，T1、T3用于锚定异源二聚的第三蛋白单体和第四蛋白单体，其中第一蛋白单体、第二蛋白单体和第三蛋白单体为相同的蛋白质单元；T1、T2和T3链中均依顺序包括适体序列、游离序列、杂交序列和触发序列；游离序列为10-20nt的T碱基序列；T1和T2链的适体序列相同且用于靶向结合第一蛋白单体、第二蛋白单体或第三蛋白单体，T1和T2的杂交序列彼此互补，所述触发序列用于触发RCA反应，T3链中的适体序列靶向结合第四蛋白单体、T3链中的杂交序列和T1链的杂交序列互补；T1、T2和T3链中的杂交序列均仅有6～8个互补碱基，当细胞膜表面发生同源二聚即第一蛋白单体和第二蛋白单体聚合时，T1和T2靠近通过杂交序列发生DNA邻近连接得到第一双链T型结构；当细胞膜表面发生异源二聚即第三蛋白单体和第四蛋白单体聚合时，T1和T3靠近通过杂交序列并发生邻近连接得到第二双链T型结构；所述RCA试剂包括用于识别同源二聚的DNA单链CT1和用于识别异源二聚的DNA单链CT2、T4DNA连接酶、Phi29聚合酶和dNTP；所述CT1和CT2均由中间序列和两端序列构成，所述CT1的两端序列能够分别与所述T1、T2链的触发序列杂交结合，所述CT2的两端序列能够分别与所述T1、T3链的触发序列杂交结合，使所述DNA单链CT1和CT2能够在没有相互干扰的情况下分别结合上述第一双链T型结构和第二双链T型结构启动RCA反应，分别得到RCA1长链产物和RCA2长链产物，且所述CT1和CT2的中间序列在RCA反应后分别用于形成RCA1长链产物和RCA2长链产物的周期性重复序列；SERS探针，包括同源SERS探针SERSTag1和异源SERS探针SERSTag2，同源SERS探针是通过在AuNP上锚定巯基修饰的DNA单链Probe1和第一拉曼分子制备的，所述DNA单链Probe1与上述RCA1长链产物的重复序列互补，其中，所述AuNP的直径范围10～30nm，所述第一拉曼分子选自4-MBA、DTNB或2-MBT中任意一种；异源SERS探针是通过在所述AuNP上锚定巯基修饰的DNA单链Probe2和第二拉曼分子制备的，所述DNA单链Probe2与上述RCA2长链产物的重复序列互补，所述AuNP的直径范围10～30nm，所述第二拉曼分子选自4-MBA、DTNB或2-MBT中任意一种但与第一拉曼分子不同。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京邮电大学 细胞膜蛋白同源与异源二聚SERS同时检测试剂盒及检测方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD