申请/专利权人：中国医学科学院药用植物研究所

申请日：2022-12-23

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN115894180B

主分类号：C07C37/68

分类号：C07C37/68;C07C39/11;B01D15/42;B01D11/04

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2023.04.21#实质审查的生效;2023.04.04#公开

摘要：本发明提供了一种从人参黑斑菌的代谢产物中分离真菌毒素的方法，属于农业技术领域。本发明提供的方法包括以下步骤：提供人参黑斑菌的发酵液；采用萃取剂对所述发酵液进行萃取，去除所得萃取液中溶剂，得到总提物浸膏；以二氯甲烷‑甲醇为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将所述总提物浸膏进行硅胶柱层析分离，共得到6个亚组分，依次记为组分Fr‑A、Fr‑B、Fr‑C、Fr‑D、Fr‑E、Fr‑F；将所述组分Fr‑B依次进行葡萄糖凝胶色谱柱分离和高效液相色谱纯化，得到对羟基苯乙醇。本发明通过对人参黑斑菌的代谢产物进行分离，最终得到了单体化合物对羟基苯乙醇，其对人参叶片具有植物毒活性，为人参黑斑菌毒素。

主权项：1.一种从人参黑斑菌的代谢产物中分离真菌毒素的方法，所述真菌毒素为对羟基苯乙醇，包括以下步骤：将人参黑斑菌株于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上进行扩增，然后将处于对数期的人参黑斑菌接种到马铃薯葡萄糖水培养基上，在摇床转速为120rpm且温度为25℃避光条件下发酵14天，得到人参黑斑菌的发酵液；其中，所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基的配方为：马铃薯200gL，葡萄糖20gL，琼脂14gL，其余为蒸馏水；所述马铃薯葡萄糖水培养基的配方为：马铃薯200gL，葡萄糖20gL，其余为蒸馏水；按照马铃薯葡萄糖水培养基的配方配好后，煮沸30min后用棉纱过滤，滤液经121℃高压灭菌30min后备用；采用萃取剂对所述发酵液进行萃取，去除所得萃取液中溶剂，得到总提物浸膏；所述萃取剂为乙酸乙酯；以二氯甲烷-甲醇为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将所述总提物浸膏进行硅胶柱层析分离，共得到6个亚组分，依次记为组分Fr-A、Fr-B、Fr-C、Fr-D、Fr-E、Fr-F；按二氯甲烷与甲醇的体积比计，所述洗脱剂的组成依次为1:0、100:1、80:1、50:1、30:1、5:1，将所述组分Fr-B依次进行葡萄糖凝胶色谱柱分离和高效液相色谱纯化，得到对羟基苯乙醇；所述高效液相色谱纯化的条件包括：以甲醇和水为流动相进行梯度洗脱，洗脱程序为0～35min，甲醇由20％增加至100％，流速为2mLmin；色谱柱为反相硅胶半制备柱，型号为YMC-packODS-A，规格为250×10mm，5μm；收集tR为18.0min的色谱峰对应的纯化液。

全文数据：

权利要求：

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