申请/专利权人：河南城建学院

申请日：2021-09-26

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN113832095B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12N5/0735;C12N5/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2022.01.11#实质审查的生效;2021.12.24#公开

摘要：本发明公开了一种乙醇处理制备饲养层的方法及其应用，方法包括以下步骤：S1、将饲养层细胞接种在培养皿上，加入适量培养液，盖上培养皿盖，然后置于培养环境中培养至饲养层细胞密度达到80％‑90％；S2、将接种有饲养层细胞的培养皿自培养环境中取出，打开培养皿盖，去掉培养液，用缓冲液洗饲养层细胞一遍，之后去掉缓冲液，然后向培养皿中加入无水乙醇，盖上培养皿盖，之后室温下放置5min；无水乙醇的加入量为S1中所述培养液加入量的12；S3、5min后，打开培养皿盖，去掉无水乙醇，再将培养皿敞口放置4‑6min，得到饲养层，然后盖上培养皿盖，将培养皿封口后室温下保存备用；应用具体涉及通过上述方法制备得到的饲养层在培养多能干细胞方面的应用。

主权项：1.一种乙醇处理制备饲养层的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将饲养层细胞接种在培养皿上，加入适量培养液，盖上培养皿盖，然后置于培养环境中培养至所述饲养层细胞密度达到80%-90%；所述培养液中由85%的高糖DMEM和15%的FBS组成；S2、将接种有所述饲养层细胞的所述培养皿自所述培养环境中取出，打开所述培养皿盖，去掉所述培养液，用缓冲液洗所述饲养层细胞一遍，之后去掉所述缓冲液，然后向所述培养皿中加入无水乙醇，盖上所述培养皿盖，之后室温下放置5min；所述无水乙醇的加入量为S1中所述培养液加入量的12；向所述培养皿中加入所述无水乙醇前，将所述无水乙醇置于4℃的环境中冷藏10-20min；S3、5min后，打开所述培养皿盖，去掉所述无水乙醇，再将所述培养皿敞口放置4-6min，得到所述饲养层，然后盖上所述培养皿盖，将所述培养皿封口后室温下保存备用；S1中的所述饲养层细胞包括原代分离的小鼠胎儿成纤维细胞、人皮肤成纤维细胞或建系的成纤维细胞NIH3T3中的一种。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 河南城建学院 一种乙醇处理制备饲养层的方法及其应用

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