申请/专利权人：赛诺菲

申请日：2017-04-13

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN109476732B

主分类号：C07K16/24

分类号：C07K16/24;C07K16/28;C07K16/32;A61P35/00

优先权：["20170317 EP EP17305298.6","20160413 US 62/322,036","20160503 US 62/331,191","20161024 US 62/412,187"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2019.05.10#实质审查的生效;2019.03.15#公开

摘要：本发明提供包含4条多肽链的三特异性和或三价结合蛋白，所述4条多肽链形成特异性结合一个或多个靶蛋白的3个抗原结合位点，其中形成该结合蛋白的第一对多肽具有双重可变域，其具有交叉cross‑over取向，且其中形成该结合蛋白的第二对多肽具有单一可变域。本文还提供用于制备三特异性和或三价结合蛋白的方法和此类结合蛋白的用途。

主权项：1.一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；并且其中：aL1、L2、L3、和L4各自独立地是0个氨基酸的长度或包含选自以下序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO:104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105、S、RT、TKGPSSEQIDNO:106、GQPKAAPSEQIDNO:175和GGSGSSGSGGSEQIDNO:148；或bL1、L2、L3、和L4各自独立地包含选自以下的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO:104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105、S、RT、TKGPSSEQIDNO:106、GQPKAAPSEQIDNO:175和GGSGSSGSGGSEQIDNO:148。

全文数据：三特异性和或三价结合蛋白相关申请的交叉引用本申请要求2016年4月13日提交的美国临时申请序列号62322，036；2016年5月3日提交的美国临时申请序列号62331,191；2016年10月24日提交的美国临时申请序列号62412,187；及2017年3月17日提交的欧洲申请EP17305298.6号的优先权权益，所述申请通过提述以其整体并入本文。以ASCII文本文件提交的序列表以ASCII文本文件的如下提交内容在此通过提述以其整体并入本文：计算机可读形式CRF的序列表文件名183952027140SEQLISTING.txt，记录日期：2017年4月11日，大小：200KB。发明领域本发明涉及包含4条多肽链的三特异性和或三价结合蛋白，所述4条多肽链形成特异性结合一个或多个靶蛋白的3个抗原结合位点，其中形成该结合蛋白的第一对多肽具有双重可变域，其具有交叉cross-over取向，且其中形成该结合蛋白的第二对多肽具有单一可变域。本发明还涉及用于制备三特异性和或三价结合蛋白的方法及此类结合蛋白的用途。背景技术基于生物治疗剂的单克隆抗体已成为新药开发的重要途径。单克隆抗体技术通过其Fc功能提供特异性靶向、精确信号传送和或对特定细胞群体的有效负载，并提供长效生物效应。抗体工程中的努力允许开发组合两种单克隆抗体的特异性的双特异性抗体用于多种生物学应用，这拓宽了抗体药物开发的范围。新发现的具有改进的广度和效力的中和抗体可以提供更多选择用于开发生物治疗剂以治疗复杂疾病如癌症、关节炎和或炎性病症。发明内容本发明提供形成3个抗原结合位点的多特异性结合蛋白例如抗体。这些结合蛋白能特异性结合一个、两个或三个抗原靶标或靶蛋白。在一个实施方案中，本发明提供一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个抗原靶标或靶蛋白，其中第一多肽链具有如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]；且第二多肽链具有如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]；且第三多肽链具有如下式表示的结构：VH3-CH1[III]；且第四多肽链具有如下式表示的结构：VL3-CL[IV]；其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。在一些实施方案中，所述第二和或第三多肽链还包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。在另一个实施方案中，本发明提供一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。在一些实施方案中，结合蛋白是三特异性的且能够特异性结合3个不同的抗原靶标。在一些实施方案中，结合蛋白是三价但双特异性的，并且能够特异性结合3个抗原靶标，其中两个是相同的。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白是三价但单特异性的，并且能够特异性结合3个抗原靶标，其全都是相同的。在一些实施方案中，结合蛋白能够抑制一个或多个靶蛋白的功能。在一些实施方案中，结合蛋白是三特异性的且能够特异性结合3个不同的抗原靶标。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含一个、两个或三个抗原结合位点，其特异性结合选自下组的靶蛋白：A2AR、APRIL、ATPD酶ATPDase、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4也称为VTCN1、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2也称为MCP-1、CCL3也称为MIP-1a、CCL4也称为MIP-1b、CCL5也称为RANTES、CCL7也称为MCP-3、CCL8也称为mcp-2、CCL11也称为嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin、CCL15也称为MIP-1d、CCL17也称为TARC、CCL19也称为MIP-3b、CCL20也称为MIP-3a、CCL21也称为MIP-2、CCL24也称为MPIF-2嗜酸性粒细胞趋化因子-2、CCL25也称为TECK、CCL26也称为嗜酸性粒细胞趋化因子-3、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23也称为FCER2，IgE的受体、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80也称为B7-1、CD86也称为B7-2、CD122、CD137也称为41BB、CD137L、CD152也称为CTLA4、CD154也称为CD40L、CD160、CD272、CD273也称为PDL2、CD274也称为PDL1、CD275也称为B7H2、CD276也称为B7H3、CD278也称为ICOS、CD279也称为PD-1、CDH1也称为E-钙粘素、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1也称为M-CSF、CSF-2也称为GM-CSF、CSF-3也称为GCSF、CX3CL1也称为SCYD1、CXCL12也称为SDF1、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1ectonucleosidetriphosphatediphosphohydrolase1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb也已知作为IL25的受体、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4也称为b4整合素、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2也已知作为IL33的受体、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP也已知作为IL7Ra的辅助受体co-receptor、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1也称为GPR5CCXCR1。在一些实施方案中，一个或多个上述抗原靶标为人抗原靶标。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白是三特异性的且能够特异性结合选自上文列表的3个不同的抗原靶标。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白是三价但双特异性的，且能够特异性结合选自上文列表的3个抗原靶标，其中两个是相同的。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白是三价但单特异性的，且能够特异性结合选自上文列表的3个抗原靶标，其全部是相同的。在一些实施方案中，结合蛋白特异性结合3个靶蛋白，所述靶蛋白对应于T细胞上的2个靶蛋白以及1个肿瘤靶蛋白。在一些实施方案中，T细胞上的所述靶蛋白之一是CD3。在一些实施方案中，T细胞上的所述靶蛋白之一是CD28。在一些实施方案中，所述肿瘤靶蛋白是CD38。在一些实施方案中，结合蛋白特异性结合3个靶蛋白，所述靶蛋白对应于T细胞上的2个靶蛋白以及1个选自下组的靶蛋白：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。在另一个实施方案中，本发明提供一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链具有如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链具有如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链具有如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链具有如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地是源自如SEQIDNO：2、4、10、14、18、22、115任一项所示氨基酸序列的可变域；bVL1、VL2和VL3各自独立地包含可变域的轻链互补决定区，所述可变域包含如SEQIDNO：43-59、123-125的任一项所示的氨基酸序列；cVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：151、153、155、157、159、161、163、165和167的任一项所示的可变域序列；dVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含如SEQIDNO：43-59、123-125、138-140和149的任一项所示的氨基酸序列；或eVL1、VL2和VL3各自独立地包含如表2-5所示的轻链互补决定区和或可变域序列；且其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地是源自如SEQIDNO：1、3、9、13、17、21、114任一项所示氨基酸序列的可变域；bVH1、VH2和VH3各自独立地包含可变域的重链互补决定区，所述可变域包含如SEQIDNO：25-42、120-122的任一项所示的氨基酸序列；cVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：150、152、154、156、158、160、162、164和166的任一项所示的可变域序列；dVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含如SEQIDNO：25-42、120-122和126-128任一项所示的氨基酸序列；或eVH1、VH2和VH3各自独立地包含如表2-5所示的重链互补决定区和或可变域序列。在一些实施方案中，第二和或第三多肽链还包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。在另一个实施方案中，本发明提供一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地是源自如SEQIDNO：2、4、10、14、18、22、115的任一项所示氨基酸序列的可变域；bVL1、VL2和VL3各自独立地包含可变域的轻链互补决定区，所述可变域包含如SEQIDNO：43-59、123-125的任一项所示的氨基酸序列；cVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：151、153、155、157、159、161、163、165和167的任一项所示的可变域序列；dVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含如SEQIDNO：43-59、123-125、138-140和149的任一项所示的氨基酸序列；或eVL1、VL2和VL3各自独立地包含如表2-5所示的轻链互补决定区和或可变域序列；且其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地是源自如SEQIDNO：1、3、9、13、17、21、114的任一项所示氨基酸序列的可变域；bVH1、VH2和VH3各自独立地包含可变域的重链互补决定区，所述可变域包含如SEQIDNO：25-42、120-122的任一项所示的氨基酸序列；cVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：150、152、154、156、158、160、162、164和166的任一项所示的可变域序列；dVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含如SEQIDNO：25-42、120-122和126-128任一项所示的氨基酸序列；或eVH1、VH2和VH3各自独立地包含如表2-5所示的重链互补决定区和或可变域序列。在一些实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：151、153、155、157、159、161、163、165和167的任一项所示的可变域序列；且VH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：150、152、154、156、158、160、162、164和166的任一项所示的可变域序列。在一些实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区包含如SEQIDNO：43-59、123-125、138-140和149的任一项所示的氨基酸序列；且dVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，所述重链互补决定区包含如SEQIDNO：25-42、120-122和126-128的任一项所示的氨基酸序列。在本文所述的任一结合蛋白的一些实施方案中，aVH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：45的氨基酸序列的CDR-L3；bVH1包含含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：45的氨基酸序列的CDR-L3；cVH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：37的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：38的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：39的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：55的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：56的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：57的氨基酸序列的CDR-L3；dVH1包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：37的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：38的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：39的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：55的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：56的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：57的氨基酸序列的CDR-L3；eVH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：40的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：41的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：42的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：58的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：59的氨基酸序列的CDR-L3；fVH1包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：40的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：41的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：42的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：58的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：59的氨基酸序列的CDR-L3；gVH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：126的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：127的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：128的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：138的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：139的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：140的氨基酸序列的CDR-L3；hVH1包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：126的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：127的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：128的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：138的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：139的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：140的氨基酸序列的CDR-L3；iVH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：120的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：121的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：122的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：123的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：124的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：125的氨基酸序列的CDR-L3；或jVH1包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：120的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：121的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：122的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：123的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：124的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：125的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，aVH1包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：45的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：45的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，结合蛋白包含一个特异性结合T细胞表面蛋白的抗原结合位点和另一个特异性结合抗原靶标例如肿瘤靶蛋白的抗原结合位点。在一些实施方案中，结合蛋白包含特异性结合CD3的抗原结合位点，特异性结合CD28的抗原结合位点，和特异性结合选自下组的肿瘤靶蛋白的抗原结合位点：CD19、CD20、CD38、Her2和LAMP1。在一些实施方案中，VH1和VL1形成特异性结合人CD3的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人CD28的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，VH1和VL1形成特异性结合人CD28的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人CD3的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人肿瘤靶蛋白的第三结合位点。在一些实施方案中，所述抗原结合位点特异性结合选自下组的人肿瘤靶蛋白：CD19、CD20、CD38、Her2和LAMP1。在一些实施方案中，特异性结合CD3的抗原结合位点包含：a包含SEQIDNO：152的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：153的氨基酸序列的轻链可变域；或b包含SEQIDNO：154的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：155的氨基酸序列的轻链可变域。在一些实施方案中，特异性结合CD3的抗原结合位点包含6个CDR，或重链和轻链可变域，其示于表2-5。在一些实施方案中，特异性结合CD28的抗原结合位点包含：a包含SEQIDNO：160的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：161的氨基酸序列的轻链可变域；或b包含SEQIDNO：162的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：163的氨基酸序列的轻链可变域。在一些实施方案中，特异性结合CD28的抗原结合位点包含6个CDR，或重链和轻链可变域，其示于表2-5。在一些实施方案中，特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点包含：a包含SEQIDNO：156的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：157的氨基酸序列的轻链可变域；b包含SEQIDNO：158的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：159的氨基酸序列的轻链可变域；c包含SEQIDNO：164的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：165的氨基酸序列的轻链可变域；d包含SEQIDNO：150的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：151的氨基酸序列的轻链可变域；或e包含SEQIDNO：166的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：167的氨基酸序列的轻链可变域。在一些实施方案中，特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点包含6个CDR，或重链和轻链可变域，其示于表2-5。在一些实施方案中，特异性结合肿瘤靶蛋白的所述抗原结合位点包含表2-5所示的抗-Her2、抗-CD19、抗-CD20、抗-CD38或抗-LAMP1结合域的六个CDR，或重链和轻链可变域。在另一个实施方案中，本发明提供一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链具有如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链具有如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链具有如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链具有如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地是源自如SEQIDNO：61、63、69、71、74、76、82、86、88、94任一项所示氨基酸序列的可变域；或bVL1、VL2和VL3各自独立地包含可变域的轻链互补决定区，所述可变域是如SEQIDNO：61、63、69、71、74、76、82、86、88、94的任一项所示的至少一个氨基酸序列；cVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：169、171和173的任一项所示的可变域序列；dVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：141-147、178和179；或eVL1、VL2和VL3各自独立地包含如表2-5所示的轻链互补决定区和或可变域序列；且其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地是源自如SEQIDNO：60、62、68、73、75、81、85、87、93的任一项所示氨基酸序列的可变域；或bVH1、VH2和VH3各自独立地包含可变域的重链互补决定区，所述可变域是SEQIDNO：60、62、68、73、75、81、85、87、93的任一项所示的至少一个氨基酸序列；cVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：168、170和172的任一项所示的可变域序列；dVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：129-137；或eVH1、VH2和VH3各自独立地包含如表2-5所示的重链互补决定区和或可变域序列。在一些实施方案中，第二和或第三多肽链还包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。在另一个实施方案中，本发明提供一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地是源自如SEQIDNO：61、63、69、71、74、76、82、86、88、94的任一项所示氨基酸序列的可变域；bVL1、VL2和VL3各自独立地包含可变域的轻链互补决定区，所述可变域是如SEQIDNO：61、63、69、71、74、76、82、86、88、94的任一项所示的至少一个氨基酸序列；cVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：169、171和173的任一项所示的可变域序列；dVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：141-147、178和179；或eVL1、VL2和VL3各自独立地包含如表2-5所示的轻链互补决定区和或可变域序列；且其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地是源自如SEQIDNO：60、62、68、73、75、81、85、87、93的任一项所示氨基酸序列的可变域；bVH1、VH2和VH3各自独立地包含可变域的重链互补决定区，所述可变域是SEQIDNO：60、62、68、73、75、81、85、87、93的任一项所示的至少一个氨基酸序列；cVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：168、170和172的任一项所示的可变域序列：dVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：129-137；eVH1、VH2和VH3各自独立地包含如表2-5所示的重链互补决定区和或可变域序列。在一些实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：169、171和173的任一项所示的可变域序列；且VH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：168、170和172的任一项所示的可变域序列。在一些实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区包含如SEQIDNO：141-147、178和179的任一项所示的氨基酸序列；且VH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，所述重链互补决定区包含如SEQIDNO：129-137的任一项所示的氨基酸序列。在本文所述的任一结合蛋白的一些实施方案中，aVH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；bVH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；cVH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；dVH1包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；eVH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；fVH1包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；gVH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；hVH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3：iVH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；或jVH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1、VL1、VH2、VL2、VH3和VL3的一项或多项包含表2-5所示抗体的一个、两个或三个CDR序列。在一些实施方案中，结合蛋白包含3个抗原结合位点，其中所述抗原结合位点的一个、两个或三个特异性结合选自下组的细胞因子靶蛋白：IL-4、IL-13和TNFa。在一些实施方案中，aVH1和VL1形成特异性结合人TNFa的第一抗原结合位点VH2和VL2形成特异性结合人IL13的抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL4的抗原结合位点；bVH1和VL1形成特异性结合人TNFa的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL4的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL13的第三抗原结合位点；cVH1和VL1形成特异性结合人IL4的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人TNFa的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL13的第三抗原结合位点；dVH1和VL1形成特异性结合人IL4的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL13的抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人TNFa的第三抗原结合位点；eVH1和VL1形成特异性结合人IL13的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL4的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人TNFa的第三抗原结合位点；或fVH1和Vk1形成特异性结合人IL13的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人TNFa的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL4的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，特异性结合人TNFa的抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含SEQIDNO：168的氨基酸序列，所述轻链可变域包含SEQIDNO：169的氨基酸序列。在一些实施方案中，特异性结合人IL4的抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含SEQIDNO：170的氨基酸序列，所述轻链可变域包含SEQIDNO：171的氨基酸序列。在一些实施方案中，特异性结合人IL13的抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含SEQIDNO：172的氨基酸序列，所述轻链可变域包含SEQIDNO：173的氨基酸序列。在本文所述的任一结合蛋白的一些实施方案中，所述第二和或第三多肽链还包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。在一些实施方案中，L1、L2、L3、或L4的至少一个独立地长度为0个氨基酸。在一些实施方案中，L1、L2、L3、或L4各自独立地长度为至少1个氨基酸。在一些实施方案中，所述结合蛋白是三特异性的且能够特异性结合3个不同的抗原靶标。在一些实施方案中，所述结合蛋白是三特异性的且能够特异性结合3个不同的抗原靶标。在一些实施方案中，所述结合蛋白能够抑制一个或多个靶蛋白的功能。在本文所述的任一结合蛋白的一些实施方案中，L1、L2、L3、或L4的至少一个独立地长度为0个氨基酸。在一些实施方案中，L1、L2、L3、或L4各自独立地长度为至少1个氨基酸。在一些实施方案中，L1、L2、L3和L4的一项、两项、三项或全部四项的长度为0至15个氨基酸。在一些实施方案中，L1、L2、L3和L4的至少两项的长度为1至15个氨基酸。在一些实施方案中，aL1、L2、L3和L4各自独立地长度为0个氨基酸或包含选自由下列组成的组的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO：104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105、S、RT、TKGPSSEQIDNO：106、GQPKAAPSEQIDNO：175和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148；或bL1、L2、L3和L4各自独立地包含选自由下列组成的组的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO：104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105、S、RT、TKGPSSEQIDNO：106、GQPKAAPSEQIDNO：175和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148。在一些实施方案中，L1包含序列GQPKAAPSEQIDNO：175，L2包含序列TKGPSSEQIDNO：106，L3包含序列S，且L4包含序列RT；L1包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，L2包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；L1包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO：148，L2包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO：148，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；或L1包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，L2长度为0个氨基酸，L3包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，且L4长度为0个氨基酸。在本文所述的任一结合蛋白的一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第一Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第一Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和或第二Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置428和434对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为M428L和N434S。在一些实施方案中，所述第二多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；且其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V。在一些实施方案中，所述第二多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V且其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W。在一些实施方案中，所述第二和第三多肽链二者的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置428和434对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为M428L和N434S。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；且其中所述第一和第二Fc区仅有一个包含与人IgG1或IgG4的位置435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为H435R和Y436F。在一些实施方案中，所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG1CH3域，且其中所述CH3域仅有一个包含与人IgG1或IgG4的位置435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为H435R和Y436F。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和或第二Fc区是人IgG4Fc区；且其中所述第一和第二Fc区各自包含与人IgG4的位置228和409对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S228P和R409K。在一些实施方案中，所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG4CH3域，且其中所述CH3域各自包含与人IgG4的位置228和409对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S228P和R409K。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和或第二Fc区是人IgG4Fc区；且其中所述第一和第二Fc区各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为F234A和L235A。在一些实施方案中，所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG4CH3域，且其中所述CH3域各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为F234A和L235A。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和或第二Fc区是人IgG1Fc区；且其中所述第一和第二Fc区各自包含与人IgG1的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为L234A和L235A。在一些实施方案中，所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG1CH3域，且其中所述CH3域各自包含与人IgG1的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为L234A和L235A。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区是人IgG1Fc区。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区是人IgG4Fc区。在本文所述的任一结合蛋白的一些实施方案中，所述第一多肽链的CL域是人κCL域，且第四多肽链的CL域是人λCL域；或所述第一多肽链的CL域是人λCL域，且第四多肽链的CL域是人κCL域。在一些实施方案中，第一多肽链包含λCL域；其中第二多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368、407、435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；且其中第四多肽链包含κCL域。在一些实施方案中，第一多肽链包含λCL域；其中第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；其中第二多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368、407、435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F，且其中第四多肽链包含κCL域。在一些实施方案中，第一多肽链包含λCL域；其中第二多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置354、366、435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C、T366W、H435R和Y436F；其中第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V；且其中第四多肽链包含κCL域。在一些实施方案中，第一多肽链包含κCL域；其中第二多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；其中第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368、407、435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；且其中第四多肽链包含λCL域。在一些实施方案中，第二和或第三多肽链包含人IgG1或IgG4Fc区。在另一个实施方案中，本发明提供一种结合蛋白，其包含第一多肽链、第二多肽链、第三多肽链和第四多肽链，其中：a所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：1的氨基酸序列或与SEQIDNO：1的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：2的氨基酸序列或与SEQIDNO：2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；b所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：1的氨基酸序列或与SEQIDNO：1的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：2的氨基酸序列或与SEQIDNO：2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；c所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：13的氨基酸序列或与SEQIDNO：13的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：14的氨基酸序列或与SEQIDNO：14的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；d所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：13的氨基酸序列或与SEQIDNO：13的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：14的氨基酸序列或与SEQIDNO：14的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；e所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：17的氨基酸序列或与SEQIDNO：17的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：18的氨基酸序列或与SEQIDNO：18的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；f所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：17的氨基酸序列或与SEQIDNO：17的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：18的氨基酸序列或与SEQIDNO：18的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；g所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：21的氨基酸序列或与SEQIDNO：21的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：22的氨基酸序列或与SEQIDNO：22的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；h所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：21的氨基酸序列或与SEQIDNO：21的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：22的氨基酸序列或与SEQIDNO：22的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；i所述第一多肽链包含SEQIDNO：63的氨基酸序列或与SEQIDNO：63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：62的氨基酸序列或与SEQIDNO：62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：60的氨基酸序列或与SEQIDNO：60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：61的氨基酸序列或与SEQIDNO：61的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；j所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：60的氨基酸序列或与SEQIDNO：60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：61的氨基酸序列或与SEQIDNO：61的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；k所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：60的氨基酸序列或与SEQIDNO：60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：71的氨基酸序列或与SEQIDNO：71的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列：1所述第一多肽链包含SEQIDNO：76的氨基酸序列或与SEQIDNO：76的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：75的氨基酸序列或与SEQIDNO：75的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；m所述第一多肽链包含SEQIDNO：82的氨基酸序列或与SEQIDNO：82的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：81的氨基酸序列或与SEQIDNO：81的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；n所述第一多肽链包含SEQIDNO：88的氨基酸序列或与SEQIDNO：88的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：87的氨基酸序列或与SEQIDNO：87的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；o所述第一多肽链包含SEQIDNO：94的氨基酸序列或与SEQIDNO：94的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：93的氨基酸序列或与SEQIDNO：93的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；p所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；q所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；r所述第一多肽链包含SEQIDNO：63的氨基酸序列或与SEQIDNO：63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：62的氨基酸序列或与SEQIDNO：62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；s所述第一多肽链包含SEQIDNO：63的氨基酸序列或与SEQIDNO：63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：62的氨基酸序列或与SEQIDNO：62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；t所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：114的氨基酸序列或与SEQIDNO：114的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：115的氨基酸序列或与SEQIDNO：115的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；或u所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：114的氨基酸序列或与SEQIDNO：114的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：115的氨基酸序列或与SEQIDNO：115的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明提供分离的核酸分子，其包含编码根据任何上述实施方案的结合蛋白或其多肽的核苷酸序列。在另一个实施方案中，本发明提供包含根据上述实施方案之一的核酸分子的表达载体。在另一个实施方案中，本发明提供分离的宿主细胞，其包含根据任何上述实施方案的核酸分子。在另一个实施方案中，本发明提供宿主细胞，其包含根据任何上述实施方案的表达载体。在一些实施方案中，所述分离的宿主细胞是哺乳动物细胞或昆虫细胞。在另一个实施方案中，本发明提供一种载体系统，其包含编码根据任何上述实施方案的结合蛋白的第一、第二、第三和第四多肽链的一个或多个载体。在一些实施方案中，载体系统包含编码所述结合蛋白的第一多肽链的第一载体、编码所述结合蛋白的第二多肽链的第二载体、编码所述结合蛋白的第三多肽链的第三载体和编码所述结合蛋白的第四多肽链的第四载体。在一些实施方案中，载体系统包含编码所述结合蛋白的第一和第二多肽链的第一载体，及编码所述结合蛋白的第三和第四多肽链的第二载体。在一些实施方案中，所述一个或多个载体是表达载体。在一个实施方案中，本发明提供分离的宿主细胞，其包含根据任何上述实施方案的载体系统。在一个实施方案中，本发明提供生产结合蛋白的方法，该方法包括：a在使得该宿主细胞表达所述结合蛋白的条件下培养根据上述任何实施方案的宿主细胞；和b从该宿主细胞分离所述结合蛋白。在一个实施方案中，本发明提供包含根据任何上述实施方案的结合蛋白及药学上可接受的载剂的药物组合物。在另一个实施方案中，本发明提供在患者中预防和或治疗癌症的方法，包括对该患者施用治疗有效量的根据任何上述实施方案的至少一种结合蛋白或药物组合物。在另一个实施方案中，本发明提供根据任何上述实施方案的结合蛋白或药物组合物，其用于在患者中预防和或治疗癌症的用途。在另一个实施方案中，本发明提供根据任何上述实施方案的结合蛋白，其用于制造用于在患者中预防和或治疗癌症的药物。在一些实施方案中，所述结合蛋白包含一个特异性结合T细胞表面蛋白的抗原结合位点和另一个特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点。在一些实施方案中，所述结合蛋白包含特异性结合CD3的抗原结合位点、特异性结合CD28的抗原结合位点和特异性结合选自下组的肿瘤靶蛋白的抗原结合位点：CD19、CD20、CD38、Her2和LAMP1。在一些实施方案中，所述至少一个结合蛋白与化疗剂共同施用。在一些实施方案中，所述患者是人。在一些实施方案中，所述结合蛋白能够抑制一个或多个选自下组的靶蛋白的功能：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。在另一个实施方案中，本发明提供在患者中预防和或治疗炎性疾病或病症的方法，包括对该患者施用治疗有效量的根据任何上述实施方案的至少一种结合蛋白或药物组合物。在另一个实施方案中，本发明提供根据任何上述实施方案的结合蛋白或药物组合物，其用于在患者中预防和或治疗炎性疾病或病症的方法的用途。在另一个实施方案中，本发明提供根据任何上述实施方案的结合蛋白，其用于制造在患者中预防和或治疗炎性疾病或病症的药物。在一些实施方案中，所述结合蛋白包含3个抗原结合位点，其各自特异性结合选自下组的细胞因子靶蛋白：IL-4、IL-13和TNFa。在一些实施方案中，所述3个结合位点中的2个特异性结合细胞因子靶蛋白选自下组的细胞因子靶蛋白：IL-4、IL-13和TNFa。在一些实施方案中，所述至少一种结合蛋白与抗炎剂共同施用。在一些实施方案中，所述患者是人。在一些实施方案中，所述结合蛋白能够抑制一个或多个选自下组的靶蛋白的功能：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、ⅥSTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。在另一个实施方案中，本发明提供纯化通过宿主细胞产生的结合蛋白的方法，包括：a在宿主细胞中产生包含4条多肽链的结合蛋白，所述4条多肽链形成特异性结合一个或多个抗原靶或靶蛋白的3个抗原结合位点，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL，是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中所述第二多肽链的CH3域和第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代是H435R和Y436F：b使a中产生的结合蛋白与蛋白A接触；和c在适于从包含0或2个CH3域的结合蛋白分离出结合蛋白的条件下从蛋白A洗脱所述结合蛋白，所述CH3域包含为H435R和Y436F的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述第一多肽链的CL域是人κCL域，且所述第四多肽链的CL域是人λCL域；或所述第一多肽链的CL域是人λCL域，且所述第四多肽链的CL域是人κCL域，且该方法还包括：d使c中洗脱的结合蛋白与κ轻链亲和介质接触；和e在适于从仅包含λCL域的结合蛋白分离出结合蛋白的条件下从所述κ轻链亲和介质洗脱结合蛋白。在一些实施方案中，所述方法在e之后还包括：f使e中洗脱的结合蛋白与λ轻链亲和介质接触；和g在适于从仅包含κCL域的结合蛋白分离出结合蛋白的条件下从所述λ轻链亲和介质洗脱洗脱结合蛋白。在一些实施方案中，所述第一多肽链的CL域是人κCL域，且所述第四多肽链的CL域是人λCL域；或所述第一多肽链的CL域是人λCL域，且所述第四多肽链的CL域是人κCL域，且所述方法进一步包括：d使c中洗脱的结合蛋白与λ轻链亲和介质接触；和e在适于从仅包含κCL域的结合蛋白分离出所述结合蛋白的条件下从所述λ轻链亲和介质洗脱结合蛋白。在一些实施方案中，所述方法在e之后进一步包括：f使e中洗脱的结合蛋白与κ轻链亲和介质接触；和g在适于从仅包含λCL域的结合蛋白分离出所述结合蛋白的条件下从所述κ轻链亲和介质洗脱结合蛋白。在一些实施方案中，第一多肽链包含λCL域；其中第二多肽链的CH3域包含与人IgG1的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1的位置349、366、368、407、435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；且其中第四多肽链包含κCL域。在一些实施方案中，在c和e的一项或多项中使用疏水作用色谱HIC来检测所述结合蛋白。在一些实施方案中，所述第二和第三多肽链的CH3域和或Fc区是人IgG1或IgG4CH3域和或Fc区。应当理解的是，本文描述的各种实施方案的一个、一部分、或全部特征可以进行组合以形成本发明的其他实施方案。本发明的这些及其他态样对于本领域技术人员而言是明显的。本发明的这些和其他实施方案在下文进一步详述。附图简述图1A-C显示了三特异性结合蛋白的示意图，所述结合蛋白包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合3个靶蛋白，其中第一对多肽具有双重可变域其具有交叉取向VH1-VH2和VL2-VL1，形成2个抗原结合位点，且其中第二对多肽具有形成单一抗原结合位点的单一可变域VH3和VL3。图1A显示了包含“杵臼knobs-into-holes”突变的三特异性结合蛋白，其中所述杵在具有单一可变域的第二对多肽上。图1B显示了包含“杵臼”突变的三特异性结合蛋白，其中所述杵在具有交叉取向的第一对多肽上。图1C显示了表1-3中所示结合蛋白的多肽链上可变域的取向，以及杵臼取向。“重链A”例如本发明的第三多肽链指重链A的可变域。“轻链A”例如本发明的第四多肽链指轻链A的可变域。“重链B”例如本发明的第二多肽链指重链B的可变域1和可变域2。“轻链B”例如本发明的第一多肽链指轻链B的可变域1和可变域2。图2显示了用于确定抗Her2xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白1或同种型对照抗体与人CD3、CD28和Her2的结合的ELISA测定的结果。使用缀合有辣根过氧化物酶HRP的抗Fab二抗来检测结合的抗体。图3A-3C显示了Her2+乳腺癌细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用抗Her2xCD28xCD3IgG4三特异性抗体本文称为“结合蛋白1”、抗CD28xCD3IgG4双特异性抗体huCD28xCD3、抗Her2IgG1抗体、或对照抗体人-IgG1来进行，其使用E：T＝10处的人PBMC。图3A显示了ZR-75-1细胞的三特异性抗体介导的特异性杀伤的结果。图3B显示了AU565细胞的三特异性抗体介导的特异性杀伤的结果。图3C显示了用于确定ZR-75-1和AU565细胞上的指定标志物的细胞表面表达的FACS分析的结果。图4和5显示了Her2+乳腺癌细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用抗Her2xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白1、抗CD28xCD3IgG4双特异性抗体huCD28xCD3、抗Her2IgG1抗体、或对照抗体人-IgG1来进行。图4显示了ZR-75-1细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP45926的人外周血单核细胞PBMC以E：T＝10进行。图5显示了AU565细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP45944的人PBMC以E：T＝10进行。图4和图5证实了与图3A-3C其使用来自不同供体的PBMC相似的细胞杀伤结果。图6A和6B显示了用抗Her2xCD28xCD3IgG4三特异性结合蛋白HER2CD28supxCD3mid；本文称为“结合蛋白1”、缺乏抗CD28结合域的抗Her2xCD28xCD3IgG4三特异性结合蛋白HER2ΔCD28supxCD3mid、缺乏抗CD3结合域的抗Her2xCD28xCD3IgG4三特异性结合蛋白HER2CD28supxΔCD3mid、缺乏抗CD28结合域和抗CD3结合域二者的抗Her2xCD28xCD3IgG4三特异性结合蛋白HER2ΔCD28supxΔCD3mid、对照抗CD3单克隆抗体、或对照IgG4抗体处理的人T细胞的活化CD69+和增殖。图6A显示了来自三种供体的人CD4+T细胞的活化CD69+。图6B显示了来自三种供体的人CD8+T细胞的活化CD69+。CD28sup：抗CD28超激动剂抗体。CD3mid：抗CD3抗体。图7A-C显示了经由抗CD3和抗CD28信号传导的IL-2、NFκB和活化T细胞的核因子NFAT通路激活，如通过荧光素酶测定法使用带有IL-2启动子-荧光素酶构建体图7A，NFκB启动子-荧光素酶构建体图7B、或NFAT启动子-荧光素酶构建体图7C的人JurkatT细胞所测量的。测试的抗体是上文关于图6A-6D所述的那些。图8显示了ELISA测定的结果，所述测定用于确定抗CD19xCD28xCD3IgG4三特异性抗体本文称为“结合蛋白3”，或同种型对照抗体，与CD3、CD28和CD19的结合。用缀合有辣根过氧化物酶HRP的抗Fab二抗来检测结合的抗体。图9A-9N显示了CD19+人GCB淋巴瘤细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用抗CD19xCD28xCD3IgG4三特异性抗体本文称为“结合蛋白3”，或指定的对照，用人PBMC作为效应细胞以E：T＝10来进行。图9A显示了OCI-LY19细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果。图9B显示了FACS分析的结果，所述FACS分析用于确定指定标志物在OCI-LY1细胞上的细胞表面表达。图9C显示了OCI-LY19细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48572的PBMC以E：T＝10来进行。图9D显示了OCI-LY19细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48573的PBMC以E：T＝10来进行。图9E显示了人淋巴瘤KARPASS-42细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48572的PBMC以E：T＝10来进行。图9F显示了KARPASS-422细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48573的PBMC以E：T＝10来进行。图9G显示了人慢性B细胞白血病MeC1细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48572的PBMC以E：T＝10来进行。图9H显示了人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48775的PBMC以E：T＝10来进行。图9I显示了人伯基特氏淋巴瘤Burkitt′s1ymphomaRaji细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48572的PBMC以E：T＝10来进行。图9J显示了弥散性大B细胞淋巴瘤HBL1细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48775的PBMC以E：T＝10来进行。图9K显示了大细胞淋巴瘤SUDHL8细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48572的PBMC以E：T＝10来进行。图9L显示了SUDHL8细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48573的PBMC以E：T＝10来进行。图9M显示了人B细胞淋巴瘤ARH77细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48775的PBMC以E：T＝10来进行。图9N显示了OCI-Ly3细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用来自供体KP48775的PBMC以E：T＝10来进行。图10显示了ELISA测定的结果，所述ELISA测定用于确定抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5，或同种型对照抗体，对CD3、CD28和CD38的结合。用缀合有辣根过氧化物酶HRP的抗Fab二抗来检测结合的抗体。图11A-11D显示了CD38+人多发性骨髓瘤癌细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5、抗CD28xCD3IgG4双特异性抗体huCD28xCD3、抗CD38IgG1抗体、或对照抗体人IgG1来进行。图11A显示了MOLP-8细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用人PBMC作为效应细胞以E：T＝10进行。图11B显示了RPMI-8226细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用人PBMC作为效应细胞以E：T＝10进行。图11C显示了KMS-12-BM细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用人PBMC作为效应细胞以E：T＝10进行。图11D显示了FACS分析的结果，所述FACS分析用于确定指定标志物在MOLP-8、RPMI-8226和KMS-12-BM细胞上的细胞表面表达。图12A-12D显示了CD38+人多发性骨髓瘤癌细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5、抗CD28xCD3IgG4双特异性抗体huCD28xCD3、抗CD38IgG1抗体、或对照抗体人IgG1，用PBMC作为效应细胞以E：T＝10来进行。图12A显示了NCI-H929细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果。图12B显示了MM.1S细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果。图12C显示了MM.1R细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果。图12D显示了FACS分析的结果，所述FACS分析用于确定指定标志物在NCI-H929、MM.1S和MM.1R细胞上的细胞表面表达。图13A-13D显示了CD38+人多发性骨髓瘤癌细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5、抗CD28xCD3IgG4双特异性抗体huCD28xCD3、抗CD38IgG1抗体、或对照抗体人IgG1，用PBMC作为效应细胞以E：T＝10来进行。图13A显示了OPM-2细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果。图13B显示了KMS-26细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果。图13C显示了U266细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果。图13D显示了FACS分析的结果，所述FACS分析用于确定指定标志物在OPM-2、KMS-26和U226细胞上的细胞表面表达。图14A-14C显示了CD38+人多发性骨髓瘤癌细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5、抗CD28xCD3IgG4双特异性抗体huCD28xCD3、抗CD38IgG1抗体、或对照抗体人IgG1，用PBMC作为效应细胞以E：T＝10来进行。图14A显示了SUDHL-8细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果。图14B显示了OCI-LY19细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果。图14C显示了FCS分析的结果，所述FACS分析用于确定指定标志物在SUDHL-8和OCI-LY19细胞上的细胞表面表达。图15A-15D显示了CD38+ALL癌细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5、抗CD28xCD3IgG4双特异性抗体huCD28xCD3、抗CD38IgG1抗体、或对照抗体人IgG1，用PBMC作为效应细胞以E：T＝10来进行。图15A显示了KOPN-8细胞的特异性杀伤的结果。图15B显示了HAL-1细胞的特异性杀伤的结果。图15C显示了CCRF-SB细胞的特异性杀伤的结果。图15D显示了FACS分析的结果，所述FACS分析用于确定指定标志物在KOPN-8、HAL-1和CCRF-SB细胞上的细胞表面表达。图16显示了CD38+骨髓瘤癌细胞的抗体介导的特异性杀伤的结果，其使用抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体称为“结合蛋白5”和“结合蛋白6”，取决于所用的具体抗CD28结合域、抗CD28xCD3IgG4双特异性抗体huCD28xCD3、抗CD38IgG1抗体、对照抗CD38IgG1抗体、或对照抗体人IgG1，用来自供体PK45926的PBMC以E：T＝10来进行。图17A和17B显示了经由抗CD3和抗CD28信号传导的IL-2、NFκB和活化T细胞的核因子NFAT通路激活，如通过荧光素酶测定法使用带有IL-2启动子-荧光素酶构建体图17A或NFAT启动子-荧光素酶构建体图17B的人JurkatT细胞所测量的。测试的抗体是抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性IgG4抗体结合蛋白5，标记为“Tri-Ab”、缺乏CD28结合域的抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性IgG4抗体标记为“Tri-AbΔCD28”、缺乏CD3结合域的抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性IgG4抗体标记为“Tri-AbΔCD3”和缺乏CD3和CD28结合域的抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性IgG4抗体标记为“Tri-AbΔCD28xΔCD3”。对每个指定的Tri-Ab一式两份进行荧光素酶测定。图18A-18E显示了在非人灵长类中使用抗Her2xCD28xCD3IgG4三特异性抗体本文称为“结合蛋白1”的剂量递增毒性研究剂量从0.1、0.5、2.5、5、10、递增至100μgkg；动物标记为“409”和“410”。图18A显示了施用抗Her2xCD28xCD3三特异性抗体之后6小时，各动物中的循环CD4+T细胞百分比的结果。图18B显示了施用抗Her2xCD28xCD3三特异性抗体之后6小时，各动物中的循环CD8+T细胞百分比的结果。图18C显示了施用后6小时循环CD4+T细胞的CD69+的结果。图18D显示了施用后6小时循环CD8+T细胞的CD69+的结果。图18E显示了以各个剂量施用抗Her2xCD28xCD3三特异性抗体之后6小时观察到的炎性细胞因子释放。图19A-B显示了移植了BT474细胞的CD34+脐带血细胞人源化NSG小鼠模型中，抗Her2xCD28xCD3IgG4三特异性抗体本文称为“结合蛋白1”的体内抗肿瘤活性。图19A显示了用指定浓度的抗Her2xCD28xCD3三特异性结合蛋白或PBS对照处理的小鼠的体重的变化。图19B显示了用指定浓度的抗Her2xCD28xCD3三特异性结合蛋白或PBS对照处理的小鼠中肿瘤体积变化。图20A-20H显示了移植了BT474细胞的人PMBC人源化的NSG小鼠模型中抗Her2xCD28xCD3IgG4三特异性抗体本文称为“结合蛋白1”的体内抗肿瘤活性。图20A显示了施用指定浓度的抗Her2xCD28xCD3三特异性结合蛋白、指定浓度的赫赛汀Herceptin、或介质对照对小鼠体重的效果。图20B显示了抗Her2xCD28xCD3三特异性结合蛋白、赫赛汀或指定对照的剂量依赖性抗肿瘤活性，如个体小鼠中的。图20C显示了施用指定浓度的抗Her2xCD28xCD3三特异性结合蛋白或PBS之后小鼠中的平均肿瘤体积。图20D显示了施用指定浓度的赫赛汀或PBS对照后小鼠中的平均肿瘤体积。图20E显示了施用指定浓度的抗Her2xCD28xCD3三特异性结合蛋白、指定浓度的赫赛汀或PBS对照后第34天小鼠中的平均肿瘤体积。图20F显示了施用指定浓度的抗Her2xCD28xCD3三特异性结合蛋白、指定浓度的赫赛汀或PBS对照后第34天小鼠中的平均肿瘤重量。图20G显示了研究结束时小鼠血液中的人CD45+、CD3+、CD4+、CD8+细胞。图20H显示了研究结束时小鼠脾脏中的人CD45+、CD3+、CD4+、CD8+细胞。图21A-F显示了非人灵长类中使用抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5的剂量递增毒性研究的结果剂量从0.1、0.5、2.5、5、10、递增至100μgkg。图21A显示了施用抗CD38xCD28xCD3三特异性抗体后的T细胞活化CD69+线状图和循环CD4+T细胞的增殖柱状图。图21B显示了施用抗CD38xCD28xCD3三特异性抗体后的T细胞活化CD69+线状图和循环CD8+T细胞的增殖柱状图。图21C显示了接受抗CD38xCD28xCD3三特异性抗体的动物在通过个体动物每次施用后6小时的IL6释放。图21D显示了接受抗CD38xCD28xCD3三特异性抗体的动物在通过个体动物每次施用后6小时的IL10释放。图21E显示了接受抗CD38xCD28xCD3三特异性抗体的动物中的TNFα释放。图21F显示了接受抗CD38xCD28xCD3三特异性抗体的动物在通过个体动物每次施用后6小时的IFNγ释放。图22A-22C显示了CD34+脐带血细胞人源化的NSG小鼠模型中抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5的体内抗肿瘤活性，所述模型移植了用CD38和PD-L1转导的RPMI-8226多发性骨髓瘤细胞。作为先导性研究，该实验确定了结合蛋白5的工作剂量范围。图22A显示了指定浓度的抗CD38xCD28xCD3三特异性结合蛋白或对照的组中的体内肿瘤生长曲线。图22B显示施用了抗CD38xCD28xCD3三特异性结合蛋白或指定对照的小鼠中的肿瘤浸润性人CD8+T细胞。图22C显示施用了抗CD38xCD28xCD3三特异性结合蛋白或指定对照的小鼠中的肿瘤浸润性人CD4+T细胞。图23A-23D显示了CD34+脐带血细胞人源化NSG小、鼠模型中的抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5的体内活性，所述模型移植了用CD38和PD-L1转导的RPMI-8226细胞。图23A显示了用指定浓度的抗CD38xCD28xCD3三特异性结合蛋白或PBS对照处理的小鼠的体重变化。图23B显示了用指定浓度的抗CD38xCD28xCD3三特异性结合蛋白或PBS对照处理的小鼠中的肿瘤体积变化。图23C显示了在第19天各组中的肿瘤体积。所有处理组中的肿瘤体积都显示出显著降低，这与PBS对照组在统计学上是不同的。图23D显示了在第一次施用指定浓度的抗CD38xCD28xCD3三特异性结合蛋白或PBS对照后4小时小鼠中炎性细胞因子IFN-g、TNF和IL-2的浓度。图24和25显示了CD34+脐带血细胞人源化的NSG小鼠模型中的T细胞体内活化，其通过确定CD69+T细胞的百分比增加来进行，所述活化是通过施用抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5；三角形、抗CD28xCD3IgG4双特异性抗体正方形、或抗CD28IgG4抗体圆形来进行的。图24显示了CD4+T细胞的体内活化。图25显示了CD8+T细胞的体内活化。图26A-26C显示了CD34+脐带血细胞人源化的NSG小鼠模型中的T细胞体内活化，其通过确定炎性细胞因子的血清水平来进行，所述活化是通过施用抗CD38xCD28xCD3IgG4三特异性抗体结合蛋白5；三角形、抗CD28xCD3IgG4双特异性抗体正方形、或抗CD28IgG4抗体圆形来进行的。图26A显示了IL-2的血清水平。图26B显示了TNF的血清水平。图26C显示了IFN-γ的血清水平。图27A和27B显示了通过大小排阻色谱对指定蛋白的纯化。图27A显示了通过大小排阻色谱对结合蛋白9-15的纯化。图27B显示了通过大小排阻色谱对结合蛋白16-19的纯化。图28A描绘了用于优化纯化策略的实验中使用的三特异性结合蛋白和可选的结合蛋白特征的构型例如κλ轻链、杵臼突变和H435RY436F突变。图28B显示了测试的构型。图29显示了来自分析型疏水相互作用色谱HIC的代表性的色谱图，证明了三特异性结合蛋白与错配的种类是可区分的。图30A和30B显示了结合蛋白的成功纯化，其针对CODV组采用λ轻链、针对Fab组采用κ轻链、在CODV组有杵突变，在Fab组有臼突变、及在Fab组有RF突变，其通过蛋白A纯化，然后是KappaSelectGEHealthcare纯化步骤。通过疏水作用色谱HIC；图30A和SDS-PAGE图30B，证明了从错配的种类成功纯化结合蛋白。【实施方式】本发明提供三特异性和或三价结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合至一个或多个靶蛋白，其中形成所述结合蛋白的第一对多肽具有双重可变域，其具有交叉取向，且其中形成所述结合蛋白的第二对多肽具有单一可变域。一般定义如本发明所使用的，下列术语除非另有说明，否则应理解为具有下列含义。除非文中另有要求，否则单数术语应包括复数，复数术语应包括单数。本文所用术语“多核苷酸”是指长度为至少10个核苷酸的单链或双链核酸聚合物。在一些实施方案中，包含多核苷酸的核苷酸可以是核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或任一核苷酸类型的修饰形式。所述修饰包括碱基修饰例如溴尿苷、核糖修饰例如阿拉伯糖苷和2′，3′-双脱氧核糖及核苷酸间键修饰例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯phosphoroselenoate、二硒代磷酸酯、苯胺基硫代磷酸酯phosphoroanilothioate、苯胺基磷酸酯phoshoraniladate和氨基磷酸酯phosphoroamidate。术语“多核苷酸”明确包括DNA的单链和双链形式。“分离的多核苷酸”是基因组、cDNA或合成来源的或其一些组合的多核苷酸，其：1不与分离的多核苷酸天然存在于其中的多核苷酸的全部或部分缔合，2与其天然不与其连接的多核苷酸连接，或3不作为较大序列的部分天然存在。“分离的多肽”是这样的多肽：1不含正常与其一起存在的至少一些其它多肽，2基本不含来自相同来源例如来自相同物种的其它多肽，3由来自不同物种的细胞表达，4已从其与之天然缔合的多核苷酸、脂质、碳水化合物或其它物质的至少约50％分离，5不与“分离的多肽”天然与之缔合的多肽的部分缔合通过共价或非共价相互作用，6与其与之天然不缔合的多肽可操作地缔合通过共价或非共价相互作用，或7天然不存在。所述分离的多肽可由合成来源的基因组DNA、cDNA、mRNA或其它RNA或其任何组合编码。优选地，分离的多肽基本不含在其自然环境中存在的可能干扰其用途治疗、诊断、预防、研究或其它的多肽或其它污染物。天然存在的抗体通常包含四聚体。每个此种四聚体通常由两个相同的多肽链对组成，每对具有一条全长“轻”链通常分子量为约25kDa和一条全长“重”链通常分子量为约50-70kDa。本文所用术语“重链”和“轻链”是指任何具有足以赋予针对靶抗原的特异性的可变域序列的免疫球蛋白多肽。各轻链和重链的氨基端部分通常包括约100-110个或更多个氨基酸的可变结构域，其通常负责抗原识别。各链的羧基端部分通常限定负责效应子功能的恒定域。因此，在天然存在的抗体中，全长重链免疫球蛋白多肽包含可变域VH和3个恒定域CH1、CH2和CH3，其中VH域位于多肽的氨基端，CH3域位于羧基端，而全长轻链免疫球蛋白多肽包含可变域VL和恒定域CL，其中VL域位于多肽的氨基端，CL域位于羧基端。人轻链通常分类为κ和λ轻链，人重链通常分类为μ、δ、γ、α或ε，分别限定抗体的同种型为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG具有若干亚类，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。IgM具有亚类，包括但不限于IgM1和IgM2。IgA同样被细分为亚类，包括但不限于IgA1和IgA2。在全长轻链和重链内，可变域和恒定域通常通过约12个或更多个氨基酸的“J”区连接，其中重链还包含多出约10个氨基酸的“D”区。参见例如FUNDAMENTALIMMUNOLOGYPaul，W编，RavenPress，第二版，1989，其通过提述以其整体并入用于所有目的。各轻链重链对的可变区通常形成抗原结合位点。天然存在的抗体的可变域通常显示出由3个高变区亦称互补决定区或CDR连接的相对保守的框架区FR的同样的通用结构。来自每对的两条链的CDR通常通过框架区对齐，这可以使得能够结合特定的表位。从氨基端到羧基端，轻链和重链可变域二者通常包含域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。术语“CDR组”意指在能够结合抗原的单个可变区中存在的一组3个CDR。这些CDR的确切边界已根据不同系统进行了不同定义。由Kabat描述的系统Kabat等，SEQUENCESOFPROTEINSOFIMMUNOLOGICALINTERESTNationalInstitutesofHealth，Bethesda，Md.1987和1991不仅提供了可应用于抗体的任何可变区的明确残基编号系统，而且还提供了限定3个CDR的精确残基边界。这些CDR可以被称为KabatCDR。Chothia和同事Chothia和Lesk，1987，J.Mol.Biol.196：901-17；Chothia等，1989，Nature342：877-83发现在KabatCDR内的某些亚部分采用几乎相同的肽主链构象，尽管在氨基酸序列水平上具有很大的多样性。这些亚部分指定为L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分别指定轻链和重链区。这些区域可以称为ChothiaCDR，其具有与KabatCDR重叠的边界。限定与KabatCDR重叠的CDR的其他边界已由Padlan，1995，FASEBJ.9：133-39；MacCallum，1996，J.Mol.Biol.2625：732-45；和Lefranc，2003，Dev.Comp.Immunol.27：55-77描述。另外其他的CDR边界定义可能不严格遵循上述系统之一，但仍会与KabatCDR重叠，尽管它们可以按照下述预测或实验发现来加以缩短或延长：特定残基或残基组或甚至整个CDR不显著影响抗原结合。本文使用的方法可以利用根据这些系统中任一种定义的CDRs，尽管具体实施方案使用Kabat或Chothia定义的CDR。使用所述氨基酸序列鉴定预测的CDR是本领域所熟知的，如Martin，A.C.″Proteinsequenceandstructureanalysisofantibodyvariabledomains，″InAntibodyEngineering，Vol.2.KontermannR.，DübelS编.Springer-Verlag，Berlin，p.33-512010中所述。还可以通过其他常规方法来检查重链和或轻链可变域的氨基酸序列以鉴定CDR的序列，所述其他常规方法例如通过与已知的其他重链和轻链可变区的氨基酸序列进行比较以确定序列高变性的区域。编号的序列可以通过肉眼进行比对，或者通过采用比对程序如CLUSTAL程序套件中之一来比对，如Thompson，1994，NucleicAcidsRes.22：4673-80中所述。惯常使用分子模型来正确地描绘框架区和CDR区，并因而对基于序列的指定加以校正。本文所用术语“Fc”是指这样的分子，其包含因抗体消化得到的或通过其它方法产生的非抗原结合片段的序列，不论呈单体还是多聚体形式，并可含有铰链区。天然Fc的原始免疫球蛋白来源优选为人源的，并可以是任何的免疫球蛋白，尽管优选的是IgG1和IgG2。Fc分子由单体多肽组成，所述单体多肽可通过共价即二硫键和非共价缔合连接成为二聚或多聚体形式。天然Fc分子单体亚单元之间的分子间二硫键的数量范围为1-4，这取决于类别例如IgG、IgA和IgE或亚类例如IgG1、IgG2、IgG3、IgA1和IgGA2。Fc的一个实例是自木瓜蛋白酶消化IgG所得的二硫键键合的二聚体。本文所用术语“天然Fc”是单体、二聚和多聚体形式的通称。Fab片段通常包含一条轻链及一条重链的VH和CH1域，其中Fab片段的VH-CH1重链部分无法与另一重链多肽形成二硫键。本文所用的Fab片段还可包含一条轻链其含有被氨基酸接头分隔开的2个可变域和一条重链其含有被氨基酸接头分隔开的2个可变域和CH1域。Fab′片段通常包含一条轻链和含有多个恒定区在CH1与CH2域之间的一条重链的一部分，从而可在两条重链间形成链间二硫键以形成Fab′2分子。本文使用的术语“结合蛋白”意指这样的非天然存在的或是重组的或工程化的分子，其特异性结合至少一个靶抗原，并且其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链具有下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链具有下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链具有下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链具有下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。“重组的”分子是通过重组方法制备、表达、产生或分离的分子。本发明的一个实施方案提供了具有生物学和免疫学特异性的结合蛋白，所述特异性是针对1至3个靶抗原。本发明的另一个实施方案提供了包含核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列编码形成此类结合蛋白的多肽链。本发明的另一个实施方案提供了包含核酸分子的表达载体，所述核酸分子包含编码形成此类结合蛋白的多肽链的核苷酸序列。本发明的又一个实施方案提供了表达此类结合蛋白即包含编码形成此类结合蛋白的多肽链的核酸分子或载体的宿主细胞。本文所用术语“可交换性”是指结合蛋白形式内的且保持折叠和最终结合亲和力的可变域的可互换性。“完全可交换性”是指在式I的多肽链或式II的多肽链中交换VH1和VH2域两者的顺序并因此交换VL1和VL2域的顺序即将顺序颠倒，同时保持所述结合蛋白的完整功能性的能力，这通过结合亲和力的保留来证实。而且，应注意的是，标识VH和VL仅是指最终形式中特定蛋白质链上的域位置。例如，VH1和VH2可来源于亲本抗体中的VL1和VL2域，并被置于结合蛋白中的VH1和VH2位置中。同样地，VL1和VL2可来源于亲本抗体中的VH1和VH2域，并被置于结合蛋白中的VH1和VH2位置中。因此，VH和VL标识是指现在的位置，而非亲本抗体中的原始位置。VH和VL域因而是“可交换的”。本文所用的术语“抗原”或“靶抗原”或“抗原靶标”是指这样的分子或分子的部分，其能够被结合蛋白结合，且额外能够用于动物以产生能与该抗原的表位结合的抗体。靶抗原可具有一个或多个表位。关于被结合蛋白识别的各个靶抗原，结合蛋白能够与识别靶抗原的完整抗体竞争。术语“Her2”意指人表皮生长因子受体2，其是表皮生长因子受体家族的成员。“CD3”是分化因子簇3多肽且是T细胞表面蛋白，其通常是T细胞受体TCR复合体的一部分。“CD28”是分化簇28多肽并且是T细胞表面蛋白，其提供协同刺激信号用于T细胞激活和存活。“CD19”是分化簇19多肽并且定位在B细胞上。“CD20”是分化簇20多肽并且是活化的糖基化磷蛋白，其在B细胞表面表达。“CD38”是分化簇38多肽并且是见于许多免疫细胞表面的糖蛋白。“LAMP1”是溶酶体相关膜蛋白1。“IL-4”是白介素4并且是诱导天然辅助T细胞分化的细胞因子。“IL-13”是白介素13并且是一种由许多细胞类型如T细胞分泌的细胞因子。“TNFa”是肿瘤坏死因子α并且是涉及全身性炎症的细胞因子。术语“T细胞衔接体”是指针对宿主免疫系统更具体而言是T细胞的胞毒活性以及针对肿瘤靶蛋白的结合蛋白。术语“单特异性结合蛋白”是指特异性结合至一个抗原靶标的结合蛋白。术语“单价结合蛋白”是指具有一个抗原结合位点的结合蛋白。术语“双特异性结合蛋白”是指特异性结合至两个不同抗原靶标的结合蛋白。术语“二价结合蛋白”是指具有两个结合位点的结合蛋白。术语“三特异性结合蛋白”是指特异性结合至三个不同抗原靶标的结合蛋白。术语“三价结合蛋白”是指具有三个结合位点的结合蛋白。在特定的实施方案中，三价结合蛋白能结合至1个抗原靶标。在其他实施方案中，三价结合蛋白能结合至2个抗原靶标。在其他实施方案中，三价结合蛋白能结合至3个抗原靶标。“分离的”结合蛋白指已从其天然环境的污染组分中鉴定和分离和或回收的多肽。其天然环境的污染组分是干扰多肽的诊断或治疗用途的材料，其可包括酶、激素和其他蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在一些实施方案中，将所述多肽纯化达到：1通过Lowry法测得的以抗体重量计大于95％，最优选的是以重量计大于99％，2通过使用转杯式spinningcup测序仪测得的足以获得至少15个N-末端或内部氨基酸序列残基的程度，或者3通过使用考马斯蓝或优选的银染色法在还原或非还原条件下的SDS-PAGE测得的同质性。分离的结合蛋白包括在重组细胞内原位的结合蛋白，因为结合蛋白天然环境中的至少一种污染组分是不存在的。本文所用术语“基本纯的”或“基本纯化的”是指是存在的主要种类的任何化合物或种类即以摩尔浓度基础计，比组合物中的任何其它各个种类丰富。在一些实施方案中，基本纯化的部分是其中所述种类包含存在的所有大分子种类的至少约50％以摩尔浓度基础计的组合物。在其它实施方案中，基本纯的组合物包含存在于组合物中的所有大分子种类的大于约80％、85％、90％、95％或99％。在另外其它的实施方案中，该种类被纯化至基本同质性通过常规检测方法无法在组合物中检出污染种类，其中组合物基本由单一大分子种类组成。本文所用的“中和”结合蛋白意指能阻遏或显著降低其结合的靶抗原的效应子功能的分子。本文所用的“显著降低”意指靶抗原的效应子功能至少约60％、优选为至少约70％、更优选为至少约75％、更优选为至少约80％、更优选为至少约85％、最优选为至少约90％的降低。术语“表位”包括任何决定簇，优选为能够与免疫球蛋白或T细胞受体特异性结合的多肽决定簇。在一些实施方案中，表位决定簇包括例如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基等分子的化学活性表面群聚，并且在一些实施方案中，可具有特定的三维结构特征和或特定的电荷特征。表位是被抗体或结合蛋白结合的抗原的区域。在一些实施方案中，当结合蛋白优先识别其在蛋白质和或大分子的复杂混合物中的靶抗原时，称为与抗原特异性结合。在一些的实施方案中，当平衡解离常数≤10-8M、更优选当平衡解离常数≤10-9M、最优选当解离常数≤10-10M时，结合蛋白被称为与抗原特异性结合。可通过例如表面等离振子共振来测定结合蛋白的解离常数KD。一般而言，通过采用BIAcore系统PharmaciaBiosensor；Piscataway，NJ的表面等离振子共振SPR，表面等离振子共振分析测量配体生物传感器基质上的靶抗原和分析物溶液中的结合蛋白之间的实时结合相互作用。表面等离振子分析也可通过固定分析物将结合蛋白固定在生物传感器基质上和呈现配体靶抗原来进行。本文所用术语“KD”是指具体结合蛋白和靶抗原间的相互作用的解离常数。本文所用术语“特异性结合”是指结合蛋白或其抗原结合片段以至少约1x10-6M、1x10-7M、1x10-8M、1x10-9M、1x10-10M、1x10-11M、1x10-12M或更大的Kd与含有表位的抗原结合和或以其对非特异性抗原的亲和力至少2倍大的亲和力与表位结合的能力。本文所用术语“接头”是指插入免疫球蛋白域中为轻链和重链的域提供足够的可动性以折叠成交叉双重可变区免疫球蛋白的一个或多个氨基酸残基。在序列水平上，接头分别在可变域之间或可变和恒定域之间的转换处插入。可鉴定域之间的转换，因为已完全了解免疫球蛋白域的近似大小。域转换的确切位置可通过定位不形成二级结构元件如β-片层或α-螺旋的肽段来确定，其通过实验数据证实或可通过建模技术或二级结构预测来假设。本文所述接头称为L1，其位于VL2的C端和VL1域的N端之间的轻链上；以及L2，其位于VL1的C端和CL域的N端之间的轻链上。重链接头称为L3，其位于VH1的C和VH2域的N端之间；和L4，其位于VH2的C端和CH1域的N端之间。本文所用术语“载体”是指用于将编码信息转移至宿主细胞中的任何分子例如核酸、质粒或病毒。术语“载体”包括能够将其已连接的另一个核酸转运的核酸分子。载体的一个类型是“质粒”，其是指可向其中插入另外的DNA区段的环状双链DNA分子。载体的另一个类型是病毒载体，其中另外的DNA区段可插入病毒基因组中。某些载体能够在其所导入的宿主细胞中自主复制例如具有细菌复制起点的细菌载体和附加型episomal哺乳动物载体。其它载体例如非附加型哺乳动物载体可在导入宿主细胞中时整合到宿主细胞的基因组中，由此与宿主基因组一起复制。此外，一些载体能够指导其与之有效连接的基因的表达。此类载体在本文称为“重组表达载体”或简称“表达载体”。一般而言，在重组DNA技术中实用的表达载体常常为质粒的形式。术语“质粒”和“载体”在本文可互换使用，因为质粒是最常使用的载体形式。然而，本发明意欲包括表达载体的其它形式，例如病毒载体例如复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒，其起等同功能的作用。本文所用短语“重组宿主细胞”或“宿主细胞”是指其中已导入重组表达载体的细胞。重组宿主细胞或宿主细胞不仅意指特定的受试细胞，而且还指这类细胞的子代。由于因其突变或环境影响所致某些修饰可发生在后代中，因此尽管这样的后代实际上可不与亲本细胞相同，但这样的细胞仍包括在本文所用术语“宿主细胞”的范围内。可使用各种宿主细胞表达系统来表达结合蛋白，包括细菌、酵母、杆状病毒和哺乳动物表达系统以及噬菌体展示表达系统。合适细菌表达载体的一个实例为pUC19。为了重组表达结合蛋白，用一个或多个携带编码结合蛋白的多肽链的DNA片段的重组表达载体转化或转染宿主细胞，使得多肽链在宿主细胞中表达，并优选分泌到其中培养宿主细胞的培养基中，可从所述培养基中回收结合蛋白。本文所用术语“转化”是指细胞遗传特性的改变，当细胞被修饰以含有新的DNA时，细胞被转化。例如，当细胞自其天然状态被遗传修饰时，细胞被转化。在转化后，转化的DNA可通过物理上physically整合至细胞染色体中而与细胞的重组，或可瞬时保持为附加型元件而不被复制，或可作为质粒独立复制。当DNA随细胞分裂而复制时，细胞被视为已稳定转化。本文所用术语“转染”是指外来或外源DNA被细胞摄取，当外源DNA被导入细胞膜内时，细胞被“转染”。多种转染技术是本领域所熟知的。可采用这类技术将一个或多个外源DNA分子导入合适的宿主细胞中。本文所用和应用于客体的术语“天然存在的”是指该客体可存在于大自然中并且未经人为操作的事实。例如，存在于可从天然来源分离的生物包括病毒中且未被人为有意修饰的多核苷酸或多肽是天然存在的。类似地，本文所用的“非天然存在的”是指自然中不存在或已人为进行结构修饰或合成的客体。如本文所用，20个常规氨基酸及其缩写按照常规用法。20个常用氨基酸的立体异构体例如D-氨基酸；非天然氨基酸例如α-、α-二取代的氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸和其它非常规氨基酸也可以是结合蛋白的多肽链的合适组分。非常规氨基酸的实例包括：4-羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、ε-N，N，N-三甲基赖氨酸、ε-N-乙酰基赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟赖氨酸、σ-N-甲基精氨酸和其它类似氨基酸和亚氨基酸例如4-羟脯氨酸。在本文所用多肽表示法中，按照标准用法和惯例，左侧方向为氨基端方向，右侧方向为羧基端方向。可基于共同的侧链性质，将天然存在的残基分类：1疏水：Met、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Trp、Tyr、Pro；2极性亲水：Arg、Asn、Asp、G1n、Glu、His、Lys、Ser、Thr；3脂肪族：Ala、Gly、Ile、Leu、Val、Pro；4脂肪族疏水：Ala、Ile、Leu、Val、Pro；5中性亲水：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；6酸性：Asp、Glu；7碱性：His、Lys、Arg；8影响链取向的残基：Gly、Pro；9芳香族：His、Trp、Tyr、Phe；和10芳香族疏水：Phe、Trp、Tyr。保守氨基酸取代可涉及这些类别之一的成员与同一类别的另一成员的交换。非保守取代可涉及这些类别之一的成员与另一类别的成员的交换。采用众所周知的技术，技术人员会能够确定结合蛋白的多肽链的合适变体。例如，通过靶向被视为对活性不重要的区域，本领域的技术人员可鉴定可被改变而不破坏活性的多肽链的合适区域。或者，本领域的技术人员可鉴定在类似多肽中保守的残基和分子部分。此外，甚至可将对生物活性或对结构可能是重要的区域进行保守氨基酸取代而不破坏生物活性或对多肽结构没有不利影响。本文所用术语“患者”包括人和动物受试者。本文所用术语“治疗treatment”或“治疗treat”是指任何治疗性治疗和预防或预防性措施二者。需要治疗的受试者包括患有病症的受试者以及易患病症的受试者或要对其病症进行预防的受试者。在具体的实施方案中，结合蛋白可用于治疗患有癌症的人，或对癌症易感的人，或在人受试者中减轻癌症。结合蛋白还可用于在人患者中预防癌症。在具体的实施方案中，所述癌症为多发性骨髓瘤、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、淋巴瘤、乳腺癌如Her2+乳腺癌、生发中心B细胞淋巴瘤或B细胞急性成淋巴细胞性白血病，在其他实施方案中，结合蛋白可用于治疗患有炎性病症的人，或对炎性病症易感的人，或在人受试者中减轻炎性病症。本文所用术语“药物组合物”或“治疗组合物”是指当适当地施用于患者时能够引起所需治疗效果的任何化合物或组合物。本文所用术语“药学上可接受的载剂”或“生理学上可接受的载剂”是指适于实现或增强结合蛋白的递送的一种或多种制剂材料。术语“有效量”和“治疗有效量”在用于修饰包含一种或多种结合蛋白的药物组合物时，是指足以产生所需治疗结果的量或剂量。更具体地说，治疗有效量是足以抑制与待治疗病况相关的一个或多个临床上确定的病理过程达一定时间的结合蛋白的量。有效量可随所使用的具体结合蛋白而变化，也可取决于与受治疗患者相关的各种因素和状况和病症的严重程度。例如，如果结合蛋白是进行体内施用，则因素如患者的年龄、体重和健康状况以及在临床前动物研究中获得的剂量反应曲线和毒性数据会是需要考虑的因素。对给定药物组合物的有效量或治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。本发明的一个实施方案提供包含药学上可接受的载剂和治疗有效量的结合蛋白的药物组合物。三特异性和或三价结合蛋白在一些实施方案中，本发明的结合蛋白是三特异性和或三价结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个例如3个不同的抗原靶标或靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白是三特异性和或三价结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个例如3个抗原靶标或靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白是三特异性和或三价结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个例如3个不同的抗原靶标或靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白是三特异性和或三价结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个例如3个抗原靶标或靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。在一些实施方案中，所述第一多肽链和第二多肽链具有交叉取向，其形成两个不同的抗原结合位点。在一些实施方案中，VH1和VL1形成结合对并形成第一抗原结合位点。在一些实施方案中，VH2和VL2形成结合对并形成第二抗原结合位点。在一些实施方案中，所述第三和第四多肽形成第三抗原结合位点。在一些实施方案中，VH3和VL3形成结合对并形成第三抗原结合位点。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白是三特异性和或三价结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个例如3个抗原靶标或靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VD1-L1-VD2-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VD3-L3-VD4-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VD1是第一免疫球蛋白的重链或轻链的可变域；VD2是第二免疫球蛋白的重链或轻链的可变域；VD3是第三免疫球蛋白的重链或轻链的可变域；VD4是第四免疫球蛋白的重链或轻链的可变域；VH3是免疫球蛋白重链可变域；VL3是免疫球蛋白轻链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合一个、两个或三个抗原靶标或靶蛋白的3个抗原结合位点。在一些实施方案中，结合蛋白结合3个抗原靶标。在一些实施方案中，结合蛋白结合3个不同的抗原靶标。在一些实施方案中，所述抗原结合位点的2个结合相同的抗原靶标。在那些实施方案中，结合蛋白包含两个相同的结合域，或不同的结合域，和或特异性结合相同抗原靶标上不同的抗原或表位。在一些实施方案中，所述抗原结合位点的3个结合相同的抗原靶标。在那些实施方案中，结合蛋白包含3个相同的结合域，或不同的结合域，和或特异性结合相同抗原靶标上不同的抗原或表位。在一些实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地是源自如SEQIDNO：2、4、10、14、18、22或115任一项所示氨基酸序列的可变域；且VH1、VH2和VH3各自独立地是源自如SEQIDNO：1、3、9、13、17、21或114任一项所示氨基酸序列的可变域。在其他实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地是源自如SEQIDNO：61、63、69、71、74、76、82、86、88或94任一项所示氨基酸序列的可变域；且VH1、VH2和VH3各自独立地是源自如SEQIDNO：60、62、68、73、75、81、85、87或93任一项所示氨基酸序列的可变域。在其他实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含可变域的轻链互补决定区，所述可变域包含如SEQIDNO：43-59、123-125任一项所示的氨基酸序列；且VH1、VH2和VH3各自独立地包含可变域的重链互补决定区，所述可变域包含如SEQIDNO：25-42、120-122任一项所示的氨基酸序列。在其他实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含可变域的轻链互补决定区，所述可变域包含如SEQIDNO：61、63、69、71、74、76、82、86、88或94任一项所示的氨基酸序列；且VH1、VH2和VH3各自独立地包含可变域的重链互补决定区，所述可变域包含如SEQIDNO：60、62、68、73、75、81、85、87或93任一项所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，VH1、VH2和VH3各自独立地包含如表2-5中所示的重链互补决定区和或可变域序列。在一些实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：169、171和173任一项所示的可变域序列；和或VH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：168、170和172任一项所示的可变域序列。在一些实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：141-147、178和179；和或VH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：129-137。在一些实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：151、153、155、157、159、161、163、165和167任一项所示的可变域序列；和或VH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：150、152、154、156、158、160、162、164和166的任一项所示的可变域序列。在一些实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含如SEQIDNO：43-59、123-125、138-140和149任一项所示的氨基酸序列；和或VH1、VH2和VH3各自独立地包含可变域的重链互补决定区，其包含如SEQIDNO：25-42、120-122和126-128任一项所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，VL1、VL2和VL3各自独立地包含如表2-5中所示的轻链互补决定区和或可变域序列。在具体的实施方案中，式I的多肽链或式II的多肽链中VH1和VH2域的顺序是互相调换的即顺序颠倒，并且因此VL1和VL2的顺序也是互相调换的。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：4的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：3的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：1的氨基酸序列或与SEQIDNO：1的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：1的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：2的氨基酸序列或与SEQIDNO：2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：2的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：10的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：9的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：1的氨基酸序列或与SEQIDNO：1的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：1的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：2的氨基酸序列或与SEQIDNO：2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：2的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：4的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：3的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：13的氨基酸序列或与SEQIDNO：13的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：13的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：14的氨基酸序列或与SEQIDNO：14的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEOIDNO：14的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：10的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：9的多肽链的CDR100％相同的CDR：所述第三多肽链包含SEQIDNO：13的氨基酸序列或与SEQIDNO：13的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：13的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：14的氨基酸序列或与SEQIDNO：14的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：14的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：4的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：3的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：17的氨基酸序列或与SEQIDNO：17的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：17的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：18的氨基酸序列或与SEQIDNO：18的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：18的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：10的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：9的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：17的氨基酸序列或与SEQIDNO：17的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：17的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：18的氨基酸序列或与SEQIDNO：18的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：18的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：4的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：3的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：21的氨基酸序列或与SEQIDNO：21的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：21的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：22的氨基酸序列或与SEQIDNO：22的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：22的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：10的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：9的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：21的氨基酸序列或与SEQIDNO：21的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：21的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：22的氨基酸序列或与SEQIDNO：22的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：22的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：63的氨基酸序列或与SEQIDNO：63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：63的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：62的氨基酸序列或与SEQIDNO：62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：62的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：60的氨基酸序列或与SEQIDNO：60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：60的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：61的氨基酸序列或与SEQIDNO：61的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：61的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：69的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：68的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：60的氨基酸序列或与SEQIDNO：60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：60的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：61的氨基酸序列或与SEQIDNO：61的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：61的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：69的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：68的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：60的氨基酸序列或与SEQIDNO：60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：60的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：71的氨基酸序列或与SEQIDNO：71的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：71的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：76的氨基酸序列或与SEQIDNO：76的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：76的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：75的氨基酸序列或与SEQIDNO：75的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：75的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：73的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：74的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：82的氨基酸序列或与SEQIDNO：82的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：82的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：81的氨基酸序列或与SEQIDNO：81的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：81的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：73的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：74的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：88的氨基酸序列或与SEQIDNO：88的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：88的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：87的氨基酸序列或与SEQIDNO：87的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：87的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：85的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：86的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：94的氨基酸序列或与SEQIDNO：94的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：94的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：93的氨基酸序列或与SEQIDNO：93的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：93的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：85的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：86的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：69的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：68的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：73的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：74的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：69的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：68的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：85的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：86的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：63的氨基酸序列或与SEQIDNO：63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：63的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：62的氨基酸序列或与SEQIDNO：62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：62的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：73的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：74的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：63的氨基酸序列或与SEQIDNO：63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：63的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：62的氨基酸序列或与SEQIDNO：62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：62的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：85的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：86的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：4的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：3的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：114的氨基酸序列或与SEQIDNO：114的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：114的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：115的氨基酸序列或与SEQIDNO：115的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：115的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：10的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：9的多肽链的CDR100％相同的CDR；所述第三多肽链包含SEQIDNO：114的氨基酸序列或与SEQIDNO：114的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：114的多肽链的CDR100％相同的CDR；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：115的氨基酸序列或与SEQIDNO：115的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：115的多肽链的CDR100％相同的CDR。在其他实施方案中，本发明的结合蛋白是三特异性和或三价结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个例如3个不同的靶蛋白，其中第一多肽链具有如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链具有如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3臼[II]且第三多肽链具有如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3杵[III]且第四多肽链具有如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。在其他实施方案中，本发明的结合蛋白是三特异性和或三价结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个例如3个靶蛋白，其中第一多肽链具有如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链具有如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3臼[II]且第三多肽链具有如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3杵[III]且第四多肽链具有如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。在一些实施方案中，所述第一多肽链和第二多肽链具有交叉取向，其形成两个不同的抗原结合位点。在一些实施方案中，VH1和VL1形成结合对并形成第一抗原结合位点。在一些实施方案中，VH2和VL2形成结合对并形成第二抗原结合位点。在一些实施方案中，所述第三和第四多肽形成第三抗原结合位点。在一些实施方案中，VH3和VL3形成结合对并形成第三抗原结合位点。在一些实施方案中，所述第二多肽链和第三多肽链包含一个或多个修饰。在一些实施方案中，所述结合蛋白的第二多肽链和第三多肽链是不同的，例如具有不同的CH1、CH2和或CH3域如包括本文所述的修饰的那些。在一些实施方案中，所述第一多肽链和第四多肽链包含一个或多个修饰。在一些实施方案中，所述结合蛋白的第一多肽链和第四多肽链是不同的，例如具有不同的CL域如包括本文所述的修饰的那些，和或λ对比κCL域。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：150至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：150的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：151至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：151的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：152至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：152的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：153至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：153的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：154至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：154的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：155至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：155的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：156至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：156的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：157至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：157的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：158至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：158的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：159至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：159的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：160至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：160的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：161至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：161的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：162至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：162的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：163至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：163的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：164至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：164的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：165至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：165的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：166至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：166的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：167至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：167的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：168至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：168的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：169至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：169的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：170至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：170的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：171至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：171的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含重链可变域和或轻链可变域，所述重链可变域包含与SEQIDNO：172至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：172的多肽链的CDR100％相同的CDR，所述轻链可变域包含与SEQIDNO：173至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％相同的氨基酸序列，其任选地包含与SEQIDNO：173的多肽链的CDR100％相同的CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白以小于或等于1μM、500nM、100nM、50nM、10nM、5nM、或1nM的平衡解离常数KD结合至一个、两个或三个抗原靶标。用于确定KD的示例性测定是本领域已知的。例如，在一些实施方案中，通过用实施例1中所述的技术例如SPR或ELISA在0℃至37℃例如0℃、4℃、25℃或37℃处测量结合动力学来确定KD。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白体外活化CD4和或CD8T细胞和或诱导细胞其表达所述结合蛋白的一个或多个结合域的一个或多个抗原靶标的抗体介导的体外细胞杀伤。示例性的体外细胞杀伤和T细胞激活测定是本领域已知的。例如，在一些实施方案中，用实施例1中所述的技术来测定体外细胞杀伤和或T细胞活化。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白特异性结合至和或阻断由一个或多个细胞因子介导的信号传导。示例性的细胞因子释放测定是本领域已知的。例如，在一些实施方案中，通过使用实施例1中所述的技术来测定细胞因子释放。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合T细胞上的靶蛋白的第一抗原结合位点、特异性结合T细胞上的靶蛋白的第二抗原结合位点和特异性结合抗原靶标或靶蛋白的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合T细胞上的靶蛋白的第一抗原结合位点、特异性结合T细胞上的靶蛋白的第二抗原结合位点和特异性结合肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合T细胞上的靶蛋白的第一抗原结合位点、特异性结合T细胞上的靶蛋白的第二抗原结合位点和特异性结合人肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，第一和第二抗原结合位点特异性结合肿瘤靶蛋白，例如分别选自CD3和CD28。在一些实施方案中，第一和第二抗原结合位点特异性结合肿瘤靶蛋白，例如分别选自CD28和CD3。在一些实施方案中，第三抗原结合位点特异性结合CD19、CD20、CD38、Her2或LAMP1。此类靶标和靶蛋白的其他实例在下文提供。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合CD3的第一抗原结合位点、特异性结合CD28的第二抗原结合位点和特异性结合抗原靶标或靶蛋白的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合CD28的第一抗原结合位点、特异性结合CD3的第二抗原结合位点和特异性结合抗原靶标或靶蛋白的第三抗原结合位点。此类抗原靶标或靶蛋白的其他实例在下文提供。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合CD3的第一抗原结合位点、特异性结合CD28的第二抗原结合位点和特异性结合肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合CD3的第一抗原结合位点、特异性结合CD28的第二抗原结合位点和特异性结合人肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合CD28的第一抗原结合位点、特异性结合CD3的第二抗原结合位点和特异性结合肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合CD28的第一抗原结合位点、特异性结合CD3的第二抗原结合位点和特异性结合人肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，第三抗原结合位点特异性结合CD19、CD20、CD38、Her2或LAMP1。此类肿瘤抗原靶标或肿瘤靶蛋白的其他实例在下文提供。在一些实施方案中，所述特异性结合CD3的抗原结合位点包含：包含SEQIDNO：152的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：153的氨基酸序列的轻链可变域；或包含SEQIDNO：154的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：155的氨基酸序列的轻链可变域。抗体的其他特异性结合CD3施用于本文所述任何结合蛋白的VH、VL和或CDR序列可见于国际公开No.WO2016116626中，其再次通过提述以其整体并入本文。在一些实施方案中，所述特异性结合CD3的抗原结合位点包含6个CDR，或重链和轻链可变域，如表2-5所示。在一些实施方案中，所述特异性结合CD3的抗原结合位点包含：i分别为SEQIDNo.34、35和36的3个重链CDR，和分别为SEQIDNo.52、53和54的3个轻链CDR；或ii分别为SEQIDNo.34、35和36的3个重链CDR，和分别为SEQIDNo.149、53和54的3个轻链CDR。在一些实施方案中，特异性结合CD3的抗原结合位点是如下多肽链的一部分，所述多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，任选地包含与SEQIDNO：3的多肽链的CDRs100％相同的CDRs。在一些实施方案中，特异性结合CD3的抗原结合位点是如下多肽链的一部分，所述多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，任选地包含与SEQIDNO：4的多肽链的CDRs100％相同的CDRs。在一些实施方案中，所述特异性结合CD28的抗原结合位点包含：包含SEQIDNO：160的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：161的氨基酸序列的轻链可变域；或包含SEQIDNO：162的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：163的氨基酸序列的轻链可变域。在一些实施方案中，所述特异性结合CD28的抗原结合位点包含6个CDR，或重链和轻链可变域，如表2-5所示。在一些实施方案中，所述特异性结合CD28的抗原结合位点包含：i分别为SEQIDNo.28、29和30的3个重链CDR，和分别为SEQIDNo.46、47和48的3个轻链CDR；或ii分别为SEQIDNo.31、32和33的3个重链CDR，和分别为SEQIDNo.49、50和51的3个轻链CDR。在一些实施方案中，特异性结合CD28的抗原结合位点是如下多肽链的一部分，所述多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，任选地包含与SEQIDNO：3的多肽链的CDRs100％相同的CDRs。在一些实施方案中，特异性结合CD28的抗原结合位点是如下多肽链的一部分，所述多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，任选地包含与SEQIDNO：4的多肽链的CDRs100％相同的CDRs。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合CD3的第一抗原结合位点、特异性结合CD28的第二抗原结合位点和特异性结合CD38的第三抗原结合位点，或特异性结合CD28的第一抗原结合位点、特异性结合CD3的第二抗原结合位点和特异性结合CD38的第三抗原结合位点其中：·特异性结合CD3的抗原结合位点包含：i分别为SEQIDNo.34、35和36的3个重链CDR，和分别为SEQIDNo.52、53和54的3个轻链CDR；或ii分别为SEQIDNo.34、35和36的3个重链CDR，和分别为SEQIDNo.149、53和54的3个轻链CDR；且·特异性结合CD28的抗原结合位点包含：i分别为SEQIDNo.28、29和30的3个重链CDR，和分别为SEQIDNo.46、47和48的3个轻链CDR；或ii分别为SEQIDNo.31、32和33的3个重链CDR，和分别为SEQIDNo.49、50和51的3个轻链CDR；且·特异性结合CD38的抗原结合位点包含：i分别为SEQIDNo.40、41和42的3个重链CDR，和分别为SEQIDNo.58、44和59的3个轻链CDR。在一些实施方案中，特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点包含：包含SEQIDNO：156的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：157的氨基酸序列的轻链可变域；包含SEQIDNO：158的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：159的氨基酸序列的轻链可变域；包含SEQIDNO：164的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：165的氨基酸序列的轻链可变域；包含SEQIDNO：150的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：151的氨基酸序列的轻链可变域；或包含SEQIDNO：166的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：167的氨基酸序列的轻链可变域。在一些实施方案中，特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点包含6个CDR，或重链及轻链可变域，其示于表2-5中。在一些实施方案中，特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点包含示于表2-5中的抗-Her2、抗-CD19、抗-CD20、抗-CD38或抗-LAMP1结合域的6个CDR。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：VL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：169、171和173中任一项所示的可变域序列；且其中：VH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：168、170和172中任一项所示的可变域序列。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：VL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区包含选自下组的氨基酸序列：如SEQIDNO：141-147、178和179；且其中：VH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，所述重链互补决定区包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：129-137。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：VL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：151、153、155、157、159、161、163、165和167的任一项所示的可变域序列；且其中：VH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：150、152、154、156、158、160、162、164和166的任一项所示的可变域序列。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：VL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区包含如SEQIDNO：43-59、123-125、138-140和149的任一项所示的氨基酸序列；且其中：VH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，所述重链互补决定区包含如SEQIDNO：25-42、120-122和126-128的任一项所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合CD3的抗原结合位点、特异性结合CD28的抗原结合位点和特异性结合除CD3或CD28以外的其他抗原靶标的抗原结合位点。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含特异性结合人CD3的抗原结合位点、特异性结合人CD28的抗原结合位点和特异性结合除CD3或CD28以外的其他人抗原靶标的抗原结合位点。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含a特异性结合CD3的抗原结合位点，其中所述特异性结合CD3的抗原结合位点包含：i包含SEQIDNO：152的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：153的氨基酸序列的轻链可变域，ii包含SEQIDNO：154的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：155的氨基酸序列的轻链可变域，iii重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3，所述轻链可变域包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3，或iv重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3，所述轻链可变域包含：包含SEQIDNO：149的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；b特异性结合CD28的抗原结合位点，其中所述特异性结合CD28的抗原结合位点包含：i包含SEQIDNO：160的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：161的氨基酸序列的轻链可变域，ii包含SEQIDNO：162的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：163的氨基酸序列的轻链可变域，iii重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3，所述轻链可变域包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3，或iv重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3，所述轻链可变域包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；和c特异性结合除CD3或CD28以外的其他抗原靶标的抗原结合位点。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含：包含SEQIDNO：4或10的氨基酸序列的第一多肽链、包含SEQIDNO：3或9的氨基酸序列的第二多肽链、及第三和第四多肽链，其中所述第三和第四多肽链形成抗原结合域，其特异性结合除CD3或CD28以外的其他抗原靶标。在一些实施方案中，所述特异性结合除CD3或CD28以外的其他抗原靶标的抗原结合位点结合选自下组的抗原：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4也称为VTCN1、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2也称为MCP-1、CCL3也称为MIP-1a、CCL4也称为MIP-1b、CCL5也称为RANTES、CCL7也称为MCP-3、CCL8也称为mcp-2、CCL11也称为嗜酸性粒细胞趋化因子、CCL15也称为MIP-1d、CCL17也称为TARC、CCL19也称为MIP-3b、CCL20也称为MIP-3a、CCL21也称为MIP-2、CCL24也称为MPIF-2嗜酸性粒细胞趋化因子-2、CCL25也称为TECK、CCL26也称为嗜酸性粒细胞趋化因子-3、CCR3、CCR4、CD19、CD20、CD23也称为FCER2，IgE的受体、CD24、CD27、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80也称为B7-1、CD86也称为B7-2、CD122、CD137也称为41BB、CD137L、CD152也称为CTLA4、CD154也称为CD40L、CD160、CD272、CD273也称为PDL2、CD274也称为PDL1、CD275也称为B7H2、CD276也称为B7H3、CD278也称为ICOS、CD279也称为PD-1、CDH1也称为E-钙粘素、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1也称为M-CSF、CSF-2也称为GM-CSF、CSF-3也称为GCSF、CX3CL1也称为SCYD1、CXCL12也称为SDF1、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb也已知作为IL25的受体、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4也称为b4整合素、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2也已知作为IL33的受体、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP也已知作为IL7Ra的辅助受体、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1也称为GPR5CCXCR1。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：45的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：45的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：45的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：45的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：37的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：38的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：39的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：55的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：56的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：57的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：37的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：38的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：39的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：55的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：56的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：57的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：40的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：41的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：42的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：58的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：59的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：40的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：41的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：42的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：58的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：59的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：126的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：127的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：128的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：138的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：139的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：140的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：126的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：127的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：128的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：138的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：139的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：140的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：120的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：121的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：122的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：123的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：124的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：125的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，VH1包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：120的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：121的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：122的氨基酸序列的CDR-H3；且且VL3包含：包含SEQIDNO：123的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：124的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：125的氨基酸序列的CDR-L3。抗原靶标在一些实施方案中，本发明的结合蛋白结合如下抗原靶标或靶蛋白的一个或多个例如一个、两个或三个：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4也称为VTCN1、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2也称为MCP-1、CCL3也称为MIP-1a、CCL4也称为MIP-1b、CCL5也称为RANTES、CCL7也称为MCP-3、CCL8也称为mcp-2、CCL11也称为嗜酸性粒细胞趋化因子、CCL15也称为MIP-1d、CCL17也称为TARC、CCL19也称为MIP-3b、CCL20也称为MIP-3a、CCL21也称为MIP-2、CCL24也称为MPIF-2嗜酸性粒细胞趋化因子-2、CCL25也称为TECK、CCL26也称为嗜酸性粒细胞趋化因子-3、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23也称为FCER2，IgE的受体、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80也称为B7-1、CD86也称为B7-2、CD122、CD137也称为41BB、CD137L、CD152也称为CTLA4、CD154也称为CD40L、CD160、CD272、CD273也称为PDL2、CD274也称为PDL1、CD275也称为B7H2、CD276也称为B7H3、CD278也称为ICOS、CD279也称为PD-1、CDH1也称为E-钙粘素、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1也称为M-CSF、CSF-2也称为GM-CSF、CSF-3也称为GCSF、CX3CL1也称为SCYD1、CXCL12也称为SDF1、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb也已知作为IL25的受体、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4也称为b4整合素、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2也已知作为IL33的受体、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP也已知作为IL7Ra的辅助受体、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1也称为GPR5CCXCR1。在一些实施方案中，上述抗原靶标的一个或多个是人抗原靶标。在一个实施方案中，结合蛋白特异性结合至一个或多个肿瘤抗原靶标例如靶蛋白。在其他实施方案中，结合蛋白特异性结合至一个或多个肿瘤靶蛋白和一个或多个T细胞上的靶蛋白，包括T细胞受体复合体。这些T细胞衔接体结合蛋白能够瞬时招募T细胞至靶细胞，并同时激活T细胞的细胞裂解活性。T细胞上的靶蛋白的实例包括但不限于CD3和CD28，及其他。此类抗原靶标或靶蛋白的其他实例在上文提供。在一些实施方案中，可通过将两种或更多种单特异性抗体亲本抗体的抗原结合域组合于一个抗体内而产生三特异性结合蛋白。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白结合如下抗原靶标的一个或多个例如一个、两个或三个：CD3、CD19、CD20、CD28、CD38、Her2、LAMP1、IL-4、IL-13和TNFa。在本发明的一些实施方案中，三价结合蛋白能够结合3个抗原靶标。在本发明的一些实施方案中，三价结合蛋白能够结合3个不同的抗原靶标。在一个实施方案中，结合蛋白是三特异性的且一个轻链-重链对能够结合两个不同的抗原靶标或表位而一个轻链-重链对能够结合一个抗原靶标或表位。在另一个实施方案中，结合蛋白能够结合3个肿瘤抗原靶标。在另一个实施方案中，结合蛋白能够结合3个不同的肿瘤抗原靶标。在其他实施方案中，结合蛋白能够抑制一个或多个抗原靶标的功能。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白结合一个或多个肿瘤靶蛋白。在一些实施方案中，结合蛋白能够特异性结合单个肿瘤靶蛋白上的3个表位。在一些实施方案中，结合蛋白能够特异性结合单个肿瘤靶蛋白上的3个不同表位。在一些实施方案中，结合蛋白能够结合第一肿瘤靶蛋白上的2个不同表位，和第二肿瘤靶蛋白上的1个表位。在一些实施方案中，所述第一和第二肿瘤靶蛋白是不同的。在一些实施方案中，结合蛋白能够特异性结合3个不同的肿瘤靶蛋白。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白结合一个或多个细胞因子靶蛋白。在一些实施方案中，结合蛋白能够特异性结合单个细胞因子靶蛋白上的3个表位。在一些实施方案中，结合蛋白能够特异性结合单个细胞因子靶蛋白上的3个不同表位。在一些实施方案中，结合蛋白能够结合第一细胞因子靶蛋白上的2个不同表位，和第二细胞因子靶蛋白上的1个表位。在一些实施方案中，所述第一和第二细胞因子靶蛋白是不同的。在一些实施方案中，结合蛋白能够特异性结合3个不同的细胞因子靶蛋白。在一些实施方案中，所述一个或多个细胞因子靶蛋白是IL-4、IL-13和或TNFa的一个或多个。细胞因子靶蛋白的其他实例提供于下文中。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白结合一个或多个肿瘤靶蛋白和一个或多个T细胞靶蛋白。在一些实施方案中，结合蛋白能够特异性结合1个肿瘤靶蛋白和单个T细胞靶蛋白上的2个不同表位。在一些实施方案中，结合蛋白能够特异性结合1个肿瘤靶蛋白和2个不同的T细胞靶蛋白例如CD28和CD3。在一些实施方案中，结合蛋白能够特异性结合1个T细胞靶蛋白和单个肿瘤靶蛋白上的2个不同表位。在一些实施方案中，结合蛋白能够特异性结合1个T细胞靶蛋白和2个不同的肿瘤靶蛋白。在一些实施方案中，结合蛋白的第一和第二多肽链形成2个抗原结合位点，其特异性靶向2个T细胞靶蛋白，且结合蛋白的第三和第四多肽链形成特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点。在一些实施方案中，结合蛋白的第一和第二多肽链形成2个抗原结合位点，其特异性靶向2个肿瘤靶蛋白，且结合蛋白的第三和第四多肽链形成特异性结合T细胞靶蛋白的抗原结合位点。在一些实施方案中，所述一个或多个肿瘤靶蛋白是CD3、CD19、CD20、CD28、CD38、Her2、LAMP1、IL-4、IL-13和或TNFa的一个或多个。在一些实施方案中，所述一个或多个T细胞靶蛋白是CD3和CD28的一个或多个。肿瘤靶蛋白和T细胞靶蛋白的其他实例提供于上文中。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白彼此独立地结合相同的或不同的1、2或3个抗原靶标或靶蛋白，其选自细胞因子靶蛋白、肿瘤靶抗原或肿瘤靶蛋白、T细胞靶蛋白、免疫检验点抑制因子、免疫检验点调节因子、免疫检验点共刺激分子和或免疫细胞表面上的靶标分子。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白是三价但双特异性的，并且能够特异性结合两个相同的抗原靶标或靶蛋白。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白能够特异性结合单个细胞因子靶蛋白、肿瘤靶抗原或肿瘤靶蛋白、T细胞靶蛋白、免疫检验点抑制因子、免疫检验点调节因子、免疫检验点共刺激分子和或免疫细胞表面上的靶标分子上的两个不同表位。此类抗原靶标或靶蛋白的其他实例提供于上文。本发明的结合蛋白可以用获取自或源自人或非人抗体包括例如人、鼠、或或人源化抗体的域或序列来制备。接头在一些实施方案中，接头L1、L2、L3和L4长度范围为无氨基酸长度＝0至约100个氨基酸，或少于100、50、40、30、20、或15个氨基酸或更少。接头长度还可为10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1个氨基酸。一个结合蛋白中的L1、L2、L3和L4可全都具有相同的氨基酸序列或可具有不同的氨基酸序列。合适的接头的实例包括单甘氨酸Gly残基；二甘氨酸肽Gly-Gly：三肽Gly-Gly-Gly；具有4个甘氨酸残基的肽Gly-Gly-Gly-Gly；SEQIDNO：98；具有5个甘氨酸残基的肽Gly-Gly-Gly-Gly-Gly；SEQIDNO：99；具有6个甘氨酸残基的肽Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly；SEQIDNO：100；具有7个甘氨酸残基的肽Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly；SEQIDNO：101；具有8个甘氨酸残基的肽Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly；SEQIDNO：102。可使用其他氨基酸残基组合，如肽Gly-Gly-Gly-Gly-SerSEQIDNO：103，肽Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-SerSEQIDNO：104，肽Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-SerSEQIDNO：105，和肽Gly-Gly-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Gly-GlySEQIDNO：148。其他合适的肽接头包括单个Ser，和Val残基；二肽Arg-Thr，Gln-Pro，Ser-Ser，Thr-Lys，和Ser-Leu；Thr-Lys-Gly-Pro-SerSEQIDNO：106，Thr-Val-Ala-Ala-ProSEQIDNO：107，Gln-Pro-Lys-Ala-AlaSEQIDNO：108，Gln-Arg-Ile-Glu-GlySEQIDNO：109；Ala-Ser-Thr-Lys-Gly-Pro-SerSEQIDNO：110，Arg-Thr-Val-Ala-Ala-Pro-SerSEQIDNO：111，Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-ProSEQIDNO：112，和His-Ile-Asp-Ser-Pro-Asn-LysSEQIDNO：113。上文列出的实例不意在以任何方式限制本发明的范围，且已显示了包含选自下组的任选氨基酸的接头适于用于所述结合蛋白：缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，赖氨酸，精氨酸，组氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，甘氨酸和脯氨酸。关于接头序列的其他描述，参见例如WO2012135345。接头中氨基酸残基的身份和序列可以根据在接头中实现所必需的二级结构元件的类型而变化。例如，甘氨酸，丝氨酸和丙氨酸对于具有最大柔性的接头而言是最佳的。如果需要更刚性和延伸的接头，甘氨酸、脯氨酸、苏氨酸和丝氨酸的一些组合是有用的。任何氨基酸残基可考虑作为与其它氨基酸残基组合的接头，以取决于所需的性质根据需要构建较大的肽接头。在一些实施方案中，L1的长度是L3的长度的至少2倍。在一些实施方案中，L2的长度是L4的长度的至少2倍。在一些实施方案中，L1的长度是L3的长度的至少2倍且L2的长度是L4的长度的至少2倍。在一些实施方案中，L1的长度是3至12个氨基酸残基，L2的长度是3至14个氨基酸残基，L3的长度是1至8个氨基酸残基，且L4的长度是1至3个氨基酸残基。在一些实施方案中，L1的长度是5至10个氨基酸残基，L2的长度是5至8个氨基酸残基，L3的长度是1至5个氨基酸残基，且L4的长度是1至2个氨基酸残基。在一些实施方案中，L1的长度是7个氨基酸残基，L2的长度是5个氨基酸残基，L3的长度是1个氨基酸残基，且L4的长度是2个氨基酸残基。在一些实施方案中，L1的长度是10个氨基酸残基，L2的长度是10个氨基酸残基，L3的长度是0个氨基酸残基，且L4的长度是0个氨基酸残基。在一些实施方案中，L1、L2、L3和L4各自的长度独立选自0至15个氨基酸例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15个氨基酸，其中所述接头的至少两个的长度为0至15个氨基酸例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15个氨基酸。在一些实施方案中，L1、L2、L3和L4各自长度为0个氨基酸。在一些实施方案中，L1、L2、L3和或L4包含序列Asp-Lys-Thr-His-ThrSEQIDNO：525。在一些实施方案中，L1包含序列Asp-Lys-Thr-His-ThrSEQIDNO：525。在一些实施方案中，L3包含序列Asp-Lys-Thr-His-ThrSEQIDNO：525。在一些实施方案中，L1、L2、L3和或L4包含源自抗体可变域和抗体恒定域之间的接点处天然存在的序列例如WO2012135345中所述的。例如，在一些实施方案中，接头包含见于内源性VH和CH1域之间，或内源性VL和CL域例如人κ或λ之间的转接处。在一些实施方案中，接头包含见于内源性人VH和CH1域之间，或内源性人VL和CL域例如人κ或λ之间的转接处。在一些实施方案中，L1、L2、L3和或L4包含序列Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-ProSEQIDNO：175。在一些实施方案中，L1包含序列Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-ProSEQIDNO：175。在一些实施方案中，L1包含序列Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-ProSEQIDNO：175，L2包含序列Thr-Lys-Gly-Pro-Ser-ArgSEQIDNO：176，L3包含序列Ser，且L4包含序列Arg-Thr。在一些实施方案中，L3包含序列Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-ProSEQIDNO：175。在一些实施方案中，L1包含序列Ser，L2包含序列Arg-Thr，L3包含序列Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-ProSEQIDNO：175和L4包含序列Thr-Lys-Gly-Pro-Ser-ArgSEQIDNO：176。在一些实施方案中，L1、L2、L3和L4各自独立地包含选自GGGGSn其中n是0至5的整数；SEQIDNO：174、GGGGSGGGGSSEQIDNO：104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105、S、RT、TKGPSSEQIDNO：106、GQPKAAPSEQIDNO：175和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148的序列。在一些实施方案中，L1包含序列GQPKAAPSEQIDNO：175，L2包含序列TKGPSSEQIDNO：106，L3包含序列S，且L4包含序列RT。在一些实施方案中，L1包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，L2包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸。在一些实施方案中，L1包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO：148，L2包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO：148，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸。在一些实施方案中，L1包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，L2长度为0个氨基酸，L3包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，且L4长度为0个氨基酸。在一些实施方案中，L1和L2长度为0个氨基酸，且L3和L4各自包含选自下列的独立选择的序列：GGGGSn其中n是0至5的整数；SEQIDNO：174、GGGGSGGGGSSEQIDNO：104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105、S、RT、TKGPSSEQIDNO：106、GQPKAAPSEQIDNO：175和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148。在一些实施方案中，L3和L4长度为0个氨基酸，且L1和L2各自包含选自下列的独立选择的序列：GGGGSn其中n是0至5的整数；SEQIDNO：174、GGGGSGGGGSSEQIDNO：104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105、S、RT、TKGPSSEQIDNO：106、GQPKAAPSEQIDNO：175和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148。Fc区和恒定域在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含第二多肽链，所述第二多肽链进一步包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含第三多肽链，所述第三多肽链进一步包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含第二多肽链和第三多肽链，所述第二多肽链进一步包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，所述第三多肽链进一步包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包括一个或两个Fc变体。本文所用的术语“Fc变体”是指自天然Fc修饰但还包含针对挽救salvage受体，FcRn新生Fc受体的结合位点的分子或序列。示例性Fc变体，以及它们与挽救受体的相互作用，是本领域已知的。因此，术语“Fc变体”可以包括自非人天然Fc人源化的分子或序列。此外，天然Fc包含可去除的区域，因为它们提供本发明的抗体样结合蛋白不需要的结构特征或生物活性。因此，术语“Fc变体”包括这样的分子或序列，其中缺少一个或多个天然Fc位点或残基或其中一个或多个Fc位点或残基是修饰的，其影响或涉及：1二硫键形成，2与选择的宿主细胞不相容，3在选择的宿主细胞中表达时的N-末端异质性，4糖基化，5与补体的相互作用，6结合至除挽救受体之外的Fc受体，或7抗体依赖性细胞毒性ADCC。为了改进结合蛋白的产量，在一些实施方案中，可通过“杵臼”技术来改造CH3域，所述技术详细描述于一些实例中，例如国际公开No.WO96027011，Ridgway等，1996，ProteinEng.9：617-21；和Merchant等，1998，Nat.Biotechnol.16：677-81中。具体地，对两个CH3域的相互作用表面进行改造以增加含有这两个CH3域的两条重链的异二聚体化。两条重链的两个CH3域各自可为“杵”，而另一个则为“臼”。导入二硫桥进一步将异二聚体稳定化并增加产量Merchant等，1998；Atwell等，1997，J.Mol.Biol.270：26-35。在具体的实施方案中，所述杵在具有单一可变域的第二对多肽上。在其他实施方案中，所述杵在具有交叉取向的第一对多肽上。在另一些实施方案中，CH3域不包含杵臼。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含第二多肽链上的“杵”突变和第三多肽链上的“臼”突变。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含第三多肽链上的“杵”突变和第二多肽链上的“臼”突变。在一些实施方案中，所述“杵”突变在对应于人IgG1或IgG4的位置354和或366的位置处包含取代，所述位置根据EU索引。在一些实施方案中，所述氨基酸取代为S354C、T366W、T366Y、S354C和T366W或S354C和T366Y。在一些实施方案中，所述“杵”突变在对应于人IgG1或IgG4的位置354和366的位置处包含取代，所述位置根据EU索引。在一些实施方案中，所述氨基酸取代为S354C和T366W。在一些实施方案中，所述“臼”突变在对应于人IgG1或IgG4的位置407和任选地349、366和或368的位置处包含取代，所述位置根据EU索引。在一些实施方案中，所述氨基酸取代为Y407V或Y407T，和任选地Y349C、T366S和或L368A。在一些实施方案中，所述“臼”突变在对应于人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407的位置处包含取代，其根据EU索引。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是Y349C、T366S、L368A和Y407V。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中第一Fc区在对应于人IgG1或IgG4的位置366和任选地354的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为T366W或T366Y和任选地S354C；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区在对应于人IgG1或IgG4的位置407和任选地349、366和或368的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y407V或Y407T及任选地Y349C、T366S和或L368A。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中第一Fc区在对应于人IgG1或IgG4的位置407和任选地349、366和或368的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y407V或Y407T及任选地Y349C、T366S和或L368A；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区在对应于人IgG1或IgG4的位置366和任选地354的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为T366W或T366Y及任选地S354C。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中第一Fc区在对应于人IgG1或IgG4的位置366的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为T366W；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区在对应于人IgG1或IgG4的位置366、368和或407的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为T366S、L368A和或Y407V。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中第一Fc区在对应于人IgG1或IgG4的位置366、368和或407的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为T366S、L368A和或Y407V；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区在对应于人IgG1或IgG4的位置366的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为T366W。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第一Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区在对应于人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫蛋白重链恒定域，其中所述第一Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区在对应于人IgG1或IgG4的位置354和366的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区为人IgG1Fc区。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区为人IgG4Fc区。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含一个或多个改进血清半衰期的突变参见例如Hinton，P.R等2006J.Immunol.1761：346-56。在一些实施方案中，所述突变包括对应于人IgG1或IgG4的位置428和434的位置处的取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为M428L和N434S。在一些实施方案中，结合蛋白包含第二多肽链和第三多肽链，所述第二多肽链进一步包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，所述第三多肽链进一步包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第一和或第二Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置428和434对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为M428L和N434S。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含杵和臼突变及一个或多个改进血清半衰期的突变。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区是人IgG1Fc区。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区是人IgG4Fc区。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含一个或多个改进稳定性的突变，例如IgG4的铰链区和或二聚体接合点的突变参见例如Spiess，C等2013J.Biol.Chem.288：26583-26593。在一些实施方案中，所述突变包含对应于人IgG4的位置228和409的位置处的取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S228P和R409K。在一些实施方案中，所述结合蛋白包含第二多肽链和第三多肽链，所述第二多肽链进一步包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，所述第三多肽链进一步包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区是人IgG4Fc区；且其中所述第一和第二Fc区各自包含与人IgG4的位置228和409对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S228P和R409K。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含杵和臼突变及一个或多个改进稳定性的突变。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区是人IgG4Fc区。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含一个或多个改进纯化的突变，例如通过调节针对纯化试剂的亲和力。例如，已知异二聚化结合蛋白可以从其同二聚化形式选择性地纯化出来，如果该异二聚化形式的两个Fc区含有降低或消除对蛋白A的结合的突变的话，这是由于与任一同二聚化形式相比，异二聚化形式会针对基于蛋白A的纯化具有中等的亲和力，并能从蛋白A选择性洗脱，例如通过使用不同的pH参见例如Smith，E.J.等2015Sci.Rep.5：17943。在一些实施方案中，所述突变包含与人IgG1或IgG4的位置435和436对于的位置处的取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为H435R和Y436F。在一些实施方案中，结合蛋白包含第二多肽链和第三多肽链，所述第二多肽链进一步包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，所述第三多肽链进一步包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；且其中第一和第二Fc区仅有一个在对应于人IgG1或IgG4的位置435和436的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为H435R和Y436F。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含杵和臼突变及一个或多个改进纯化的突变。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区是人IgG1Fc区。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区是人IgG4Fc区。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含一个或多个降低效应功能的突变，例如Fc受体介导的抗体依赖性细胞吞噬作用ADCP、补体依赖性细胞毒性作用CDC和或抗体依赖性细胞毒性作用ADCC。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区是人IgG1Fc区；且其中所述第一和第二Fc区各自包含对应于人IgG1的位置234和235的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为L234A和L235A。在一些实施方案中，所述第二和第三多肽链的Fc区是人IgG1Fc区，且其中所述Fc区各自包含对应于人IgG1的位置234和235的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为L234A和L235A。在一些实施方案中，所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区是人IgG1Fc区；且其中所述第一和第二Fc区各自包含对应于人IgG1的位置234、235、329的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为L234A、L235A和P329A。在一些实施方案中，所述第二和第三多肽链的Fc区是人IgG1Fc区，且其中所述Fc各自包含对应于人IgG1的位置234、235和329的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为L234A、L235A和P329A。在一些实施方案中，所述突变包含对应于人IgG4的位置234和235的位置处的取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为F234A和L235A。在一些实施方案中，所述结合蛋白包含第二多肽链和第三多肽链，所述第二多肽链进一步包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，所述第三多肽链进一步包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；且其中所述第一和第二Fc区各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为F234A和L235A。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含杵和臼突变及一个或多个降低效应功能的突变。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区是人IgG1Fc区。在一些实施方案中，所述第一和或第二Fc区是人IgG4Fc区。关于位置329处的Fc突变的进一步描述，参见例如Shields，R.L等2001J.Biol.Chem.276：6591-6604和WO1999051642。在一些实施方案中，前文所述的突变类型可以任何顺序或组合进行组合。例如，本发明的结合蛋白可包含两个或更多个“杵”和“臼”突变，一个或多个改进血清半衰期的突变，一个或多个改进IgG4稳定性的突变，一个或多个改进纯化的突变，和或一个或多个降低效应功能的突变，如上文所述。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白包含：包含λCL域的第一多肽链；包含对应于人IgG1的位置354和366的位置处的氨基酸取代的第二多肽链的CH3域，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；包含对应于人IgG1的位置349、366、368、407、435和436的位置处的氨基酸取代的第三多肽链的CH3域，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；和包含κCL域的第四多肽链。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含λCL域；其中所述第三多肽链的CH3域在对应于人IgG1的位置354和366的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；其中所述第二多肽链的CH3域在对应于人IgG1的位置349、366、368、407、435和436的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；且其中所述第四多肽链包含κCL域。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含λCL域；其中所述第二多肽链的CH3域在对应于人IgG1的位置354、366、435和436的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C、T366W、H435R和Y436F；其中所述第三多肽链的CH3域在对应于人IgG1的位置349、366、368和407的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V；且其中第四多肽链包含κCL域。在一些实施方案中，所述第一多肽链包含κCL域；其中所述第二多肽链的CH3域在对应于人IgG1的位置354和366的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；其中所述第三多肽链的CH3域在对应于人的位置349、366、368、407、435和436的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；且其中第四多肽链包含λCL域。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白通过蛋白A亲和色谱、κ轻链亲和色谱例如使用KappaSelect树脂根据制造商的说明进行；GEHealthcare和任选地λ轻链亲和色谱例如使用LambdaFabSelect树脂根据制造商的说明进行；GEHealthcare加以纯化。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白通过蛋白A亲和色谱、λ轻链亲和色谱例如使用LambdaFabSelect树脂根据制造商的说明进行；GEHealthcare和任选地κ轻链亲和色谱例如使用KappaSelect树脂根据制造商的说明进行；GEHealthcare加以纯化。在一些实施方案中，结合蛋白包含两个Fc区，其各自包含CH3域，且所述CH3域仅有一个在对应于人IgG1或IgG4的位置435和436的位置处包含氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为H435R和Y436F。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白通过按顺序为蛋白A亲和色谱，然后是κ轻链亲和色谱例如使用KappaSelect树脂根据制造商的说明进行；GEHealthcare，然后是任选的λ轻链亲和色谱例如使用LambdaFabSelect树脂根据制造商的说明进行；GEHealthcare加以纯化。在一些实施方案中，本发明的结合蛋白通过按顺序为蛋白A亲和色谱，然后是λ轻链亲和色谱例如使用LambdaFabSelect树脂根据制造商的说明进行；GEHealthcare，然后是任选的κ轻链亲和色谱例如使用KappaSelect树脂根据制造商的说明进行；GEHealthcare加以纯化。例如在一些实施方案中，将结合蛋白与蛋白A接触，并在适于从包含0或2个含H435R和Y436F氨基酸取代的CH3域的结合蛋白分离出该结合蛋白的条件下从蛋白A洗脱，将结合蛋白与κ轻链亲和介质例如KappaSelect树脂中所用的；GEHealthcare接触，并在适于从仅包含λCL域的结合蛋白分离出该结合蛋白的条件下从κ轻链亲和介质洗脱例如根据制造商的说明书。适于蛋白A洗脱的条件是本领域已知的，包括但不限于从pH4.5-2.8逐步洗脱梯度。在一些实施方案中，采用可用于蛋白质纯化的蛋白A或蛋白A变体。在一些实施方案中，将所述蛋白A附接于基质或树脂，例如作为层析介质的一部分。在一些实施方案中，在从κ轻链亲和介质洗脱后，将所述结合蛋白与λ轻链亲和介质例如LambdaFabSelect树脂中所用的；GEHealthcare接触，并在适于从仅包含κCL域的结合蛋白分离出该结合蛋白的条件下从λ轻链亲和介质洗脱例如根据制造商的说明书。在一些实施方案中，用HIC色谱来检测本发明的结合蛋白。在一些实施方案中，所述结合蛋白包含：包含λCL域的第一多肽链；在对应于人IgG1或IgG4的位置354和366的位置处包含氨基酸取代的第二多肽链的CH3域，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；在对应于人IgG1或IgG4的位置349、366、368、407、435和436的位置处包含氨基酸取代的第三多肽链的CH3域，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；和包含κCL域的第四多肽链。在一些实施方案中，结合蛋白通过宿主细胞产生。在一些实施方案中，结合蛋白纯化自细胞培养介质或宿主细胞提取物。在一些实施方案中，结合蛋白通过宿主细胞分泌或产生和提取自宿主细胞例如在与蛋白A接触之前。在一些实施方案中，当与蛋白A接触时，结合蛋白处于细胞培养介质或宿主细胞提取物中。在一些实施方案中，将结合蛋白从其他结合蛋白、多肽和或其他细胞组分中纯化。在一些实施方案中，本文所述三特异性结合蛋白的CH1、CH2、CH3和CL可为结合蛋白1-53的任何CH1、CH2、CH3和CL序列。核酸采用标准重组DNA方法来构建编码形成所述结合蛋白的多肽的多核苷酸，将这些多核苷酸掺入重组表达载体中，并将这类载体导入宿主细胞中。参见例如Sambrook等，MOLECULARCLONING：ALABORATORYMANUALColdSpringHarborLaboratoryPress，第三版。酶促反应和纯化技术可按照生产商的说明书、按本领域通常实现的或按本文描述的进行。除提供特定的定义外，与本文所述分析化学、合成有机化学及医学和制药化学的实验室程序和技术联用的术语是本领域熟知和常用的术语。类似地，常规技术可用于化学合成、化学分析、药物制备、制剂化、递送和患者治疗。本发明的其他态样涉及分离的核酸分子，其包含编码本文所述任何结合多肽的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述分离核酸可操作地连接至异源性启动子以指导编码结合蛋白的核酸序列的转录。启动子可指指导核酸转录的核酸控制序列。当第一核酸序列置于与第二核酸序列的功能性联系中时，则第一核酸序列可操作地连接至第二核酸序列。例如，如果启动子影响该编码序列的转录或表达，则所述启动子可操作地连接至结合蛋白的编码序列。启动子的实例包括但不限于获取自病毒基因组的启动子如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒如腺病毒2、牛乳头瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、乙型肝炎病毒、猿猴病毒40SV40等等，来自异源真核启动子如肌动蛋白启动子、免疫球蛋白启动子、来自热休克启动子，等等，CAG-启动子Niwa等，Gene1082：193-9，1991，磷酸甘油酸激酶PGK启动子，四环素诱导型启动子Masui等，NucleicAcidsRes.33：e43，2005，lac系统，trp系统，tac系统，trc系统，噬菌体λ的主要操纵子和启动子区，3-磷酸甘油酸激酶的启动子，酵母酸性磷酸酶的启动子，和酵母α-交配因子的启动子。编码本发明结合蛋白的多核苷酸可以受到如下启动子的控制：组成型启动子、诱导型启动子、或本文描述的任何其他合适的启动子或本领域技术人员容易公认的其他合适的启动子。在一些实施方案中，分离核酸被掺入至载体中。在一些实施方案中，所述载体是表达载体。表达载体可包括一个或多个可操作地连接至待表达多核苷酸的调控序列。术语“调控序列”包括启动子、增强子和其他表达控制元件例如多腺苷酸化信号。合适的增强子的实例包括但不限于来自哺乳动物基因例如球蛋白，弹性蛋白酶，白蛋白，甲胎蛋白α-fetoprotein，胰岛素等的增强子序列，以及来自真核细胞病毒的增强子序列如位于复制起点的晚期侧1ateside的SV40增强子bp100-270，巨细胞病毒早期启动子增强子，如位于复制起点的晚期侧的多瘤病毒增强子，腺病毒增强子等。合适的载体的实例可包括例如质粒、粘粒、附加体、转座子和病毒载体例如腺病毒，牛痘病毒，辛德毕斯病毒Sindbis-viral，麻疹病毒，疱疹病毒，慢病毒，逆转录病毒，腺相关病毒载体等。表达载体可用于转染宿主细胞，如例如细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。能在宿主中表达和复制的生物功能性病毒和质粒DNA载体是本领域已知的，并能用于转染任何目的细胞。本发明的其他态样涉及包含一个或多个载体的载体系统，其编码本文所述的任意结合蛋白的第一、第二、第三和第四多肽链。在一些实施方案中，所述载体系统包含编码结合蛋白的第一多肽链的第一载体，编码结合蛋白的第二多肽链的第二载体，编码结合蛋白的第三多肽链的第三载体，和编码结合蛋白的第四多肽链的第四载体。在一些实施方案中，载体系统包含编码结合蛋白的第一和第二多肽链的第一载体，以及编码结合蛋白的第三和第四多肽链的第二载体。在一些实施方案中，载体系统包含编码结合蛋白的第一和第三多肽链的第一载体，以及编码结合蛋白的第二和第四多肽链的第二载体。在一些实施方案中，载体系统包含编码结合蛋白的第一和第四多肽链的第一载体，以及编码结合蛋白的第二和第三多肽链的第二载体。在一些实施方案中，载体系统包含编码结合蛋白的第一、第二、第三和第四多肽链的第一载体。载体系统的一个或多个载体可为本文所述的任何载体。在一些实施方案中，所述一个或多个载体是表达载体。分离的宿主细胞本发明的其他态样涉及包含一个或多个本文所述分离的多核苷酸、载体和或载体系统的分离的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是细菌细胞例如大肠杆菌E.coli细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是酵母细胞例如酿酒酵母S.cerevisiae细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是昆虫细胞。昆虫细胞的实例可以包括例如果蝇Drosophila细胞例如S2细胞，粉纹夜蛾Trichoplusiani细胞例如HighFiveTM细胞，和草地贪夜蛾Spodopterafrugiperda细胞例如Sf21或Sf9细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是哺乳动物细胞。哺乳动物宿主细胞的实例可包括例如人胚肾细胞例如293或用于悬浮培养生长的293细胞亚纯系，Expi293TM细胞，CHO细胞，幼仓鼠肾细胞例如BHK，ATCCCCL10，小鼠sertoli细胞例如TM4细胞，猴肾细胞例如CV1ATCCCCL70，非洲绿猴肾细胞例如VERO-76，ATCCCRL-1587，人宫颈癌细胞例如HELA，ATCCCCL2，犬肾细胞例如MDCK，ATCCCCL34，布法罗大鼠肝细胞例如BRL3A，ATCCCRL1442，人肺细胞例如W138，ATCCCCL75，人肝细胞例如HepG2，HB8065，小鼠乳腺肿瘤细胞例如MMT060562，ATCCCCL51，TRI细胞，MRC5细胞，FS4细胞，人肝细胞瘤细胞系例如HepG2，及骨髓瘤细胞例如NS0和Sp20细胞。本发明的其他态样涉及生产本文所述的任何结合蛋白的方法。在一些实施方案中，所述方法包括a在适合宿主细胞表达所述结合蛋白的条件下培养包含分离核酸、载体和或载体系统例如本文所述的任何分离核酸、载体和或载体系统的宿主细胞例如本文所述的任何宿主细胞；和b从宿主细胞分离所述结合蛋白。在表达蛋白的条件下培养宿主细胞的方法是本领域普通技术人员已知的。从培养的宿主细胞分离蛋白的方法是本领域普通技术人员已知的，其包括例如通过亲和色谱例如两步亲和色谱法，其包括蛋白A亲和色谱，然后是大小排阻色谱进行。结合蛋白的用途所述结合蛋白可应用于任何已知的测定方法，如竞争性结合测定法、直接和间接夹心测定法和用于一种或多种靶抗原的检测和定量的免疫沉淀测定法。所述结合蛋白以适于所应用的测定方法的亲和力结合一个或多个靶抗原。对于诊断应用，在一些实施方案中，可用可检测模块来标记结合蛋白。可检测模块可为能够直接或间接产生可检测信号的任一种。例如，可检测模块可为放射性同位素，如3H、14C、32p、35S、125I、99Tc、111In、或67Ga；荧光或化学发光化合物，如异硫氰酸荧光素、罗丹明、或荧光素；或酶，如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、或辣根过氧化物酶。所述结合蛋白还可用于体内成像。可将用可检测模块标记的结合蛋白施用于动物，优选为施用至血液中，并测定宿主中带标记的抗体的存在和定位。可用动物中无论是通过核磁共振、放射学、或本领域所知的其他方法可检测的任何模块来标记结合蛋白。结合蛋白还能用于细胞活化，肿瘤靶向，细胞因子活性的中和，病毒感染的中和，多重信号传导事件的组合，以治疗癌症，关节炎和或炎症性疾病。例如在一些实施方案中，结合蛋白特异性结合一个、两个或三个选自下组的抗原靶标：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4也称为VTCN1、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2也称为MCP-1、CCL3也称为MIP-1a、CCL4也称为MIP-1b、CCL5也称为RANTES、CCL7也称为MCP-3、CCL8也称为mcp-2、CCL11也称为嗜酸性粒细胞趋化因子、CCL15也称为MIP-1d、CCL17也称为TARC、CCL19也称为MIP-3b、CCL20也称为MIP-3a、CCL21也称为MIP-2、CCL24也称为MPIF-2嗜酸性粒细胞趋化因子-2、CCL25也称为TECK、CCL26也称为嗜酸性粒细胞趋化因子-3、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23也称为FCER2，IgE的受体、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80也称为B7-1、CD86也称为B7-2、CD122、CD137也称为41BB、CD137L、CD152也称为CTLA4、CD154也称为CD40L、CD160、CD272、CD273也称为PDL2、CD274也称为PDL1、CD275也称为B7H2、CD276也称为B7H3、CD278也称为ICOS、CD279也称为PD-1、CDH1也称为E-钙粘素、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1也称为M-CSF、CSF-2也称为GM-CSF、CSF-3也称为GCSF、CX3CL1也称为SCYD1、CXCL12也称为SDF1、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb也已知作为IL25的受体、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4也称为b4整合素、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2也已知作为IL33的受体、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP也已知作为IL7Ra的辅助受体、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1也称为GPR5CCXCR1。在一些实施方案中，上述抗原靶标的一个或多个是人抗原靶标。在一些实施方案中，将本发明的结合蛋白施用于对其有需要的患者，用于治疗或预防癌症。例如，在一些实施方案中，结合蛋白包含一个特异性结合T细胞表面蛋白的抗原结合位点和另一个特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点例如特异性结合T细胞表明蛋白的2个抗原结合位点和1个特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点，或2个特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点和1个特异性结合T细胞表面蛋白的抗原结合位点。在一些实施方案中，结合蛋白包含特异性结合CD3的抗原结合位点、特异性结合CD28的抗原结合位点和特异性结选自下组的肿瘤靶蛋白的抗原结合位点：CD19、CD20、CD38、Her2和LAMP1。在一些实施方案中，所述结合蛋白与化疗剂共同施用。在一些实施方案中，所述患者是人。在一些实施方案中，将本发明的结合蛋白施用于对其有需要的患者，用于治疗或预防炎性疾病或病症。在一些实施方案中，所述结合蛋白包含3个抗原结合位点，其各自特异性结合选自IL-4、IL-13和TNFa的细胞因子靶蛋白。在一些实施方案中，所述结合蛋白与抗炎剂共同施用。在一些实施方案中，所述患者是人。本发明还涉及包含结合蛋白和其他试剂的套组，其可用于检测生物样品中的靶抗原水平。此类试剂包括可检测标记、封闭血清、阳性和阴性对照样品、以及检测试剂。在一些实施方案中，套组包含组合物，所述组合物包含本文所述的任何结合蛋白、多核苷酸、载体、载体系统和或宿主细胞。在一些实施方案中，套组包含容器及标签或包装插页，其位于所述容器上或与容器相连。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、IV溶液袋等。所述容器可由多种材料形成，如玻璃或塑料。所述容器盛有组合物，所述组合物是单独的或与另一组合物组合，其对于治疗、预防和或诊断病况是有效的，并且所述容器可以具有无菌入口例如所述容器可以是静脉内溶液袋或小瓶，其具有可由皮下注射针刺穿的塞子。在一些实施方案中，所述标签或包装插页指示了该组合物用于预防、诊断和或治疗优选的病况。或者或此外，制品或套组还可包含第二或第三容器，其包含药学上可接受的缓冲剂，如注射用抑菌水BWFI、磷酸盐缓冲盐水、Ringer′s溶液和右旋糖溶液。其还可包括从商业和用户角度所需的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、滤器、针和注射器。结合蛋白治疗组合物及其施用包含结合蛋白的治疗性组合物或药物组合物在本发明的范围内。此类治疗性组合物或药物组合物可包含治疗有效量的结合蛋白、或结合蛋白-药物缀合物，与药学上或生理学上可接受的制剂其根据与施用模式的适应性而选出混合。可接受的配制材料优选为在所采用的剂量和浓度处对受试者是非毒性的。所述药物组合物可含有用于改变、维持、或保留组合物的例如pH、渗透压osmolarity、粘度、澄清度、颜色、等张性、气味、无菌度、稳定度、溶解或释放速率、吸收、或渗透的制剂材料。合适的制剂材料包括但不限于氨基酸例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸、抗微生物剂、抗氧化剂例如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠、缓冲剂例如硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐或其它有机酸、填充剂例如甘露糖醇或甘氨酸、螯合剂例如乙二胺四乙酸EDTA、络合剂例如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精、填料、单糖、二糖和其它碳水化合物例如葡萄糖、甘露糖或糊精、蛋白质例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白、着色剂、矫味剂和稀释剂、乳化剂、亲水聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮、低分子量多肽、成盐平衡离子例如钠、防腐剂例如苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或过氧化氢、溶剂例如甘油、丙二醇或聚乙二醇、糖醇例如甘露醇或山梨醇、悬浮剂、表面活性剂或润湿剂例如普朗尼克类pluronics、PEG、山梨聚糖酯类sorbitanesters、聚山梨醇酯类如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80、Triton曲拉通、氨丁三醇、卵磷脂、胆固醇或Tyloxapal四丁酚醛、稳定增强剂如蔗糖或山梨醇、张度增强剂例如碱金属卤化物优选为氯化钠或氯化钾或甘露醇山梨醇、递送介质、稀释剂、赋形剂和或药学佐剂参见例如REMINGTON′SPHARMACEUTICALSCIENCES第18版，A.R.Gennaro编，MackPublishingCompany1990和其后续版本，通过提述并入本文用于任何目的。根据例如意欲的施用途径、递送形式和所需剂量，技术人员可确定最适药物组合物。所述组合物可影响结合蛋白的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。药物组合物中主要的介质或载剂在性质上可为水性的或非水的。例如，合适的注射用介质或载剂可为水、生理盐水溶液或人工脑脊液，可能补充有用于胃肠外施用的组合物中常见的其它物质。中性缓冲的盐水或与血清白蛋白混合的盐水是其它的示例性介质。其它示例性的药物组合物包含约pH7.0-8.5的Tris缓冲液，或约pH4.0-5.5的乙酸盐缓冲液，其还可包括山梨醇或合适的代替物。在本发明的一个实施方案中，可通过将所选的具有所需纯度的组合物与任选的配制剂混合，来制备呈冻干饼或水溶液形式的结合蛋白组合物用于储存。另外，可使用合适的赋形剂例如蔗糖，将结合蛋白配置为冻干物。可选择本发明的药物组合物用于胃肠外递送或皮下使用。或者，组合物可选择用于吸入或用于通过消化道递送，例如口服。这类药学上可接受的组合物的制备属本领域的技术范围内。制剂组分以施用部位可接受的浓度存在。例如，使用缓冲剂使组合物保持在生理pH或在略微较低的pH，通常在约5至约8的pH范围。当考虑胃肠外施用时，用于本发明的治疗组合物可呈无热原、胃肠外可接受的水溶液形式，其包含药学上可接受的介质中的所需结合蛋白。用于胃肠外注射的特别合适的介质是无菌蒸馏水，其中结合蛋白被配制为适当防腐的无菌等渗溶液。另一种制备物可涉及所需分子与制剂的配制物，所述制剂例如可注射微球、生物可侵蚀粒子、聚合化合物例如聚乳酸或聚乙醇酸、小珠或脂质体，其提供产品的控释或缓释，然后产品通过积存注射depotinjection递送。还可使用透明质酸，其可具有促进维持循环中的持续时间的作用。用于引入所需分子的其它合适方法包括可植入药物递送装置。在一个实施方案中，药物组合物可配制来用于吸入。例如，结合蛋白可配制成干粉剂用于吸入。结合蛋白吸入溶液还可与推进剂propellant配制在一起用于气雾剂递送。在又一个实施方案中，可使溶液雾化。还考虑某些配制物可口服施用。在本发明的一个实施方案中，以这种方式施用的结合蛋白可与或不与常用于固体剂型例如片剂和胶囊剂混配的那些载剂配制在一起。例如，胶囊剂可设计成在胃肠道某点上释放制剂的活性部分，此时生物利用度被最大化且内吸收前降解被最小化。可包括其它作用剂以促进结合蛋白的吸收。还可使用稀释剂、矫味剂、低熔点蜡、植物油、润滑剂、悬浮剂、片剂崩解剂和粘合剂。另一种药物组合物可涉及与适于制造片剂的无毒赋形剂混合的有效量的结合蛋白。可通过将片剂溶于无菌水或另一种合适的介质来制备呈单位剂型的溶液剂。合适的赋形剂包括但不限于惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠或碳酸氢钠、乳糖或磷酸钙；或粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；或润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。本发明的其它药物组合物对本领域技术人员而言会是显然的，包括这样的配制物，所述配制物涉及呈缓释或控释配制物的结合蛋白。用于配制各种其它缓释或控释方法的技术，例如脂质体载体、生物可蚀解微粒或多孔珠粒和积存注射，也是本领域技术人员已知的。缓释配制物的其它实例包括呈成型制品形式的半渗透聚合物基质，例如膜或微囊。缓释基质可包括聚酯、水凝胶、聚乳酸、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸的共聚物、聚2-羟乙基-甲基丙烯酸酯、乙烯乙酸乙烯酯或聚-D--3-羟基丁酸。缓释组合物还可包括脂质体，其可通过本领域已知的几种方法中的任一种制备。用于体内施用的本发明的药物组合物通常必须是无菌的。这可通过经无菌滤膜过滤实现。当组合物是冻干的时，采用该方法的灭菌可在冻干和复溶之前或之后进行。用于胃肠外施用的组合物可以冻干形式保存或在溶液中保存。另外，通常将胃肠外组合物装入具有无菌入口的容器中，例如静脉内溶液袋或小瓶，其具有可通过皮下注射针刺穿的塞子。一旦药物组合物制成，便可将其作为溶液、悬液、凝胶、乳液、固体或作为脱水或冻干粉剂储存在无菌小瓶中。这类制剂可以即用形式或以需要在施用前复溶的形式例如冻干储存。本发明还包括用于产生单剂施用单位的套组。套组可各含有具有干燥蛋白质的第一容器和具有含水制剂的第二容器。含有单室和多室预填药注射器例如液体注射器和Lyosyringes的套组也包括在本发明的范围内。待治疗性应用的结合蛋白药物组合物的有效量取决于例如治疗背景和目的。本领域的技术人员会了解，用于治疗的合适剂量水平会因此部分地根据所递送的分子、使用结合蛋白所针对的适应症、施用途径和患者尺寸体重、体表面或器官大小和状况年龄和一般健康状况而变化。因此，临床医师可滴定剂量和修改施用途径以获得最佳治疗效果。施用频率会取决于待使用制剂中的结合蛋白的药代动力学参数。通常，临床医师会施用组合物直至达到获得所需效果的剂量。组合物因此可如下施用：作为单剂、随时间推移作为两剂或更多剂其可含或不含相同量的所需分子或作为经植入装置或导管的连续输注。适当剂量的进一步改进按常规由本领域普通技术人员进行，这属□他们常规进行的任务的范围内。合适的剂量可通过利用合适的剂量-响应数据来确定。药物组合物的施用途径遵循已知方法，例如口服；通过经由静脉内、腹膜内、大脑内实质内、脑室内、肌内、眼内、动脉内、门静脉内intraportal或病灶内途径的注射；通过缓释系统；或通过植入装置。需要时，通过推注或通过连续输注或通过植入装置施用组合物。还可通过植入其中已吸附或包封所需分子的膜、海绵或其它合适的材料，来局部施用组合物。在使用植入装置时，可将装置植入任何合适的组织或器官中，并且所需分子的递送可以是通过扩散、定时释放推注或连续施用。在一些实施方案中，本发明涉及预防和或治疗患者中的增生性疾病或病症例如癌症的方法。在一些实施方案中，所述方法包括对该患者施用治疗有效量的本文所述结合蛋白的至少一种。在一些实施方案中，所述患者是人。在一些实施方案中，所述至少一种结合蛋白与抗癌治疗例如本领域已知的任何抗癌治疗组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种结合蛋白在一种或多种抗癌治疗之前施用。在一些实施方案中，所述至少一种结合蛋白与一种或多种抗癌治疗同时施用。在一些实施方案中，所述至少一种结合蛋白在一种或多种抗癌治疗之后施用。在一些实施方案中，本发明涉及预防和或治疗炎性疾病或病症例如癌症的方法。在一些实施方案中，所述方法包括对患者施用治疗有效量的本文所述结合蛋白的至少一种。在一些实施方案中，所述患者是人。在一些实施方案中，所述至少一种结合蛋白与抗炎治疗例如本领域已知的任何抗炎治疗组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种结合蛋白在一种或多种抗炎治疗之前施用。在一些实施方案中，所述至少一种结合蛋白与一种或多种抗炎治疗同时施用。在一些实施方案中，所述至少一种结合蛋白在一种或多种抗炎治疗之后施用。在不限制本发明的前提下，下文描述了一些本发明的实施方案用于说明目的。项1：一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。项2：一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。项3：项1的结合蛋白，其中所述第二和或第三多肽链还包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。项4：项1-3任一项的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4的至少一个独立地长度为0个氨基酸。项5：项1-3任一项的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4各自独立地长度为至少1个氨基酸。项6：项1-3任一项的结合蛋白，其中aL1、L2、L3和L4各自独立地长度为0个氨基酸或包含选自由下列组成的组的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO：104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105、S、RT、TKGPSSEQIDNO：106、GQPKAAPSEQIDNO：175和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148：或bL1、L2、L3、或L4各自独立地包含选自由下列组成的组的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，S，RT，TKGPSSEQIDNO：106，GQPKAAPSEQIDNO：175，和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148。项7：项1-5任一项的结合蛋白，其中aL1包含序列GQPKAAPSEQIDNO：175，L2包含序列TKGPSSEQIDNO：106，L3包含序列S，且L4包含序列RT；bL1包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，L2包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；cL1包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO：148，L2包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO：148，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；或dL1包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，L2长度为0个氨基酸，L3包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，且L4长度为0个氨基酸。项8：项1-7任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白是三特异性的且能够特异性结合3个不同的抗原靶标。项9：权利要求1-8任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白特异性结合3个靶蛋白，所述靶蛋白对应于T细胞上的2个靶蛋白以及1个肿瘤靶蛋白。项10：项9的结合蛋白，其中T细胞上的所述靶蛋白之一是CD3。项11：项9或项10的结合蛋白，其中T细胞上的所述靶蛋白之一是CD28。项12：项9-11任一项的结合蛋白，其中所述肿瘤靶蛋白是CD38。项13：项1-8任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白特异性结合3个靶蛋白，所述靶蛋白对应于T细胞上的2个靶蛋白以及1个选自下组的靶蛋白：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。项14：项1-13任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够抑制一个或多个靶蛋白的功能。项15：项14的结合蛋白，其中所述一个或多个靶蛋白选自由下列组成的组：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。项16：一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：151、153、155、157、159、161、163、165和167任一项所示的可变域序列；或bVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含如SEQIDNO：43-59、123-125、138-140和149任一项所示的氨基酸序列；且其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：150、152、154、156、158、160、162、164和166的任一项所示的可变域序列；或bVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含如SEQIDNO：25-42、120-122和126-128任一项所示的氨基酸序列。项17：一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：151、153、155、157、159、161、163、165和167任一项所示的可变域序列；或bVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含如SEQIDNO：43-59、123-125、138-140和149任一项所示的氨基酸序列；且其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：150、152、154、156、158、160、162、164和166的任一项所示的可变域序列；或bVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含如SEQIDNO：25-42、120-122和126-128任一项所示的氨基酸序列。项18：项16的结合蛋白，其中所述第二和或第三多肽链还包含连接至Cm的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。项19：项16-18任一项的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4的至少一个独立地长度为0个氨基酸。项20：项16-18任一项的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4各自独立地长度为至少1个氨基酸。项21：项16-18和20任一项的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4各自独立地包含选自由下列组成的组的序列：aL1、L2、L3和L4各自独立地长度为0个氨基酸或包含选自由下列组成的组的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO：104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105、S、RT、TKGPSSEQIDNO：106、GQPKAAPSEQIDNO：175和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148；或bGGGGSGGGGSSEQIDNO：104，GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，S，RT，TKGPSSEQIDNO：106，GQPKAAPSEQIDNO：175，和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148。项22：项16-20任一项结合蛋白，其中aL1包含序列GQPKAAPSEQIDNO：175，L2包含序列TKGPSSEQIDNO：106，L3包含序列S，且L4包含序列RT；bL1包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，L2包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；cL1包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO：148，L2包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO：148，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；或dL1包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，L2长度为0个氨基酸，L3包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，且L4长度为0个氨基酸。项23：项16-22任一项的结合蛋白，其中：aVH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：45的氨基酸序列的CDR-L3；bVH1包含：包含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：45的氨基酸序列的CDR-L3；cVH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：37的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：38的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：39的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：55的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：56的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：57的氨基酸序列的CDR-L3；dVH1包含：含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：37的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：38的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：39的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：55的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：56的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：57的氨基酸序列的CDR-L3；eVH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：40的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：41的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：42的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：58的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：59的氨基酸序列的CDR-L3；fVH1包含：含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：40的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：41的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：42的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：58的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：59的氨基酸序列的CDR-L3；gVH1包含；包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：126的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：127的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：128的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：138的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：139的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：140的氨基酸序列的CDR-L3；hVH1包含：含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：126的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：127的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：128的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：138的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：139的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：140的氨基酸序列的CDR-L3；iVH1包含：包含SEQIDNO：28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：120的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：121的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：122的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：123的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：124的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：125的氨基酸序列的CDR-L3；或jVH1包含：含SEQIDNO：31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：120的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：121的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：122的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：123的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：124的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：125的氨基酸序列的CDR-L3。项24：一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：169、171和173任一项所示的可变域序列；或bVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：141-147、178和179；其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：168、170和172的任一项所示的可变域序列；或bVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：129-137。项25：一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO：169、171和173任一项所示的可变域序列；或bVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：141-147、178和179；其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO：168、170和172的任一项所示的可变域序列；或bVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：129-137。项26：项24的结合蛋白，其中第二和或第三多肽链还包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。项27：项24-26任一项的结合蛋白，其中L1、L2、L3和L4的至少一个独立地长度为0个氨基酸。项28.项24-26任一项的结合蛋白，其中L1、L2、L3和L4各自独立地长度为至少1个氨基酸。项29.项24-26和28任一项的结合蛋白，其中aL1、L2、L3和L4各自独立地长度为0个氨基酸或包含选自由下列组成的组的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO：104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105、S、RT、TKGPSSEQIDNO：106、GQPKAAPSEQIDNO：175和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148；或bL1、L2、L3和L4各自独立地包含选自由下列组成的组的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO：104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105、S、RT、TKGPSSEQIDNO：106、GQPKAAPSEQIDNO：175和GGSGSSGSGGSEQIDNO：148。项30.项24-28任一项的结合蛋白，其中：aL1包含序列GQPKAAPSEQIDNO：175，L2包含序列TKGPSSEQIDNO：106，L3包含序列S，且L4包含序列RT；bL1包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，L2包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；cL1包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO：148，L2包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO：148，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；或dL1包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，L2长度为0个氨基酸，L3包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，且L4长度为0个氨基酸。项31.项24-30任一项的结合蛋白，其中：aVH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；bVH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3：cVH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3：dVH1包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；eVH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3：fVH1包含：包含SEQIDNO：129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：131的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：142的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDRR-L3；gVH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；hVH1包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDRR-L3：iVH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；或jVH1包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO：135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO：145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO：132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO：133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO：134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO：143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO：179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO：144的氨基酸序列的CDR-L3。项32：项1、3-16、18-24和26-31任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第一Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V。项33：项1、3-16、18-24和26-31任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第一Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W。项34：项1、3-16、18-24和26-33任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置428和434对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为M428L和N434S。项35：项2、4-15、17、19-23、25和27-31任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；且其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V。项36：项2、4-15、17、19-23、25和27-31任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V；且其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W。项37：项2、4-15、17、19-23、25、27-31、35和36任一项的结合蛋白，其中所述第二和第三多肽链二者的CH3域均包含与人IgG1或IgG4的位置428和434对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为M428L和N434S。项38：项1、3-16、18-24和26-34任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区为人IgG1或IgG4Fc区；且其中所述第一和第二Fc区中仅有一个包含与人IgG1或IgG4的位置435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为H435R和Y436F。项39：项2、4-15、17、19-23、25、27-31和35-37任一项的结合蛋白，其中所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG1或IgG4CH3域，且其中所述CH3域中仅一项包含与人IgG1或IgG4的位置435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为H435R和Y436F。项40：项1、3-16、18-24、26-34和38任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区是人IgG4Fc区；且其中第一和第二Fc区各自包含与人IgG4的位置228和409对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S228P和R409K。项41：项2、4-15、17、19-23、25、27-31、35-37和39任一项的结合蛋白，其中所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG4CH3域，且其中所述CH3域各自包含与人IgG4的位置228和409对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S228P和R409K。项42：项1、3-16、18-24、26-34、38和40任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区是人IgG4Fc区；且其中所述第一和第二Fc区各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为F234A和L235A。项43：项2、4-15、17、19-23、25、27-31、35-37、39和41任一项的结合蛋白，其中所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG4CH3域，且其中所述CH3域各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为F234A和L235A。项44：项1、3-16、18-24、26-34、38和40任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区是人IgG1Fc区；且其中所述第一和第二Fc区各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为L234A和L235A。项45：项2、4-15、17、19-23、25、27-31、35-37、39和41任一项的结合蛋白，其中所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG1CH3域，且其中所述CH3域各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为L234A和L235A。项46：项2、4-15、17、19-23、25、27-31、35-37、39、41、43和45任一项的结合蛋白，其中VH1和VL1形成特异性结合的人CD3的第一抗原结合位点，其中VH2和VL2形成特异性结合人CD28的第二抗原结合位点，且其中VH3和VL3形成特异性结合人肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。项47：项2、4-15、17、19-23、25、27-31、35-37、39、41、43和45任一项的结合蛋白，其中VH1和VL1形成特异性结合人CD28的第一抗原结合位点，其中VH2和VL2形成特异性结合人CD3的第二抗原结合位点，且其中VH3和VL3形成特异性结合人肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。项48：项46或项47的结合蛋白，其中所述第三抗原结合位点特异性结合选自下组的人肿瘤靶蛋白：CD19、CD20、CD38、Her2和LAMP1。项49：项46-48任一项的结合蛋白，其中所述特异性结合CD3的抗原结合位点包含：a包含SEQIDNO：152的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：153的氨基酸序列的轻链可变域；或b包含SEQIDNO：154的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：155的氨基酸序列的轻链可变域。项50：项46-49任一项的结合蛋白，其中所述特异性结合CD28的抗原结合位点包含：a包含SEQIDNO：160的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：161的氨基酸序列的轻链可变域；或b包含SEQIDNO：162的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：163的氨基酸序列的轻链可变域。项51：项46-50任一项的结合蛋白，其中所述特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点包含：a包含SEQIDNO：156的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：157的氨基酸序列的轻链可变域；b包含SEQIDNO：158的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：159的氨基酸序列的轻链可变域；c包含SEQIDNO：164的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：165的氨基酸序列的轻链可变域；d包含SEQIDNO：150的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：151的氨基酸序列的轻链可变域；或e包含SEQIDNO：166的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO：167的氨基酸序列的轻链可变域。项52：项2、17、35-37、39、41、43和45任一项的结合蛋白，其中：aVH1和VL1形成特异性结合人TNFa的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL13的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL4的第三抗原结合位点；bVH1和VL1形成特异性结合人TNFa的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL4的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL13的第三抗原结合位点；cVH1和VL1形成特异性结合人IL4的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人TNFa的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL13的第三抗原结合位点；dVH1和VL1形成特异性结合人IL4的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL13的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人TNFa的第三抗原结合位点；eVH1和VL1形成特异性结合人IL13的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL4的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人TNFa的第三抗原结合位点；或fVH1和VL1形成特异性结合人IL13的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人TNFa的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL4的第三抗原结合位点。项53：项52的结合蛋白，其中所述特异性结合人TNFa的抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含SEQIDNO：168的氨基酸序列，所述轻链可变域包含SEQIDNO：169的氨基酸序列。项54：项52或项53的结合蛋白，其中所述特异性结合人IL4的抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含SEQIDNO：170的氨基酸序列，所述轻链可变域包含SEQIDNO：171的氨基酸序列。项55：项52-54任一项的结合蛋白，其中所述特异性结合人IL13的抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含SEQIDNO：172的氨基酸序列，所述轻链可变域包含SEQIDNO：173的氨基酸序列。项56：项1-55任一项的结合蛋白，其中：a所述第一多肽链的CL域是人κCL域，且所述第四多肽链的CL域是人λCL域；或b所述第一多肽链的CL域是人λCL域，且所述第四多肽链的CL域是人κCL域。项57：项2、17、25、35-37、39、41和43-55任一项的结合蛋白，其中所述第一多肽链包含λCL域；其中所述第二多肽链的CH3域包含与人IgG1的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1的位置349、366、368、407、435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；且其中第四多肽链包含κCL域。项58：一种结合蛋白，其包含第一多肽链、第二多肽链、第三多肽链和第四多肽链，其中：a所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：1的氨基酸序列或与SEQIDNO：1的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：2的氨基酸序列或与SEQIDNO：2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；b所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：1的氨基酸序列或与SEQIDNO：1的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：2的氨基酸序列或与SEQIDNO：2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；c所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：13的氨基酸序列或与SEQIDNO：13的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：14的氨基酸序列或与SEQIDNO：14的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；d所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：13的氨基酸序列或与SEQIDNO：13的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：14的氨基酸序列或与SEQIDNO：14的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；e所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：17的氨基酸序列或与SEQIDNO：17的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：18的氨基酸序列或与SEQIDNO：18的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；f所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：17的氨基酸序列或与SEQIDNO：17的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：18的氨基酸序列或与SEQIDNO：18的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；g所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：21的氨基酸序列或与SEQIDNO：21的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：22的氨基酸序列或与SEQIDNO：22的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；h所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：21的氨基酸序列或与SEQIDNO：21的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：22的氨基酸序列或与SEQIDNO：22的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；i所述第一多肽链包含SEQIDNO：63的氨基酸序列或与SEQIDNO：63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：62的氨基酸序列或与SEQIDNO：62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：60的氨基酸序列或与SEQIDNO：60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：61的氨基酸序列或与SEQIDNO：61的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；j所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：60的氨基酸序列或与SEQIDNO：60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：61的氨基酸序列或与SEQIDNO：61的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；k所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：60的氨基酸序列或与SEQIDNO：60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：71的氨基酸序列或与SEQIDNO：71的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；1所述第一多肽链包含SEQIDNO：76的氨基酸序列或与SEQIDNO：76的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：75的氨基酸序列或与SEQIDNO：75的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；m所述第一多肽链包含SEQIDNO：82的氨基酸序列或与SEQIDNO：82的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：81的氨基酸序列或与SEQIDNO：81的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；n所述第一多肽链包含SEQIDNO：88的氨基酸序列或与SEQIDNO：88的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：87的氨基酸序列或与SEQIDNO：87的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；o所述第一多肽链包含SEQIDNO：94的氨基酸序列或与SEQIDNO：94的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：93的氨基酸序列或与SEQIDNO：93的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；p所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；q所述第一多肽链包含SEQIDNO：69的氨基酸序列或与SEQIDNO：69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：68的氨基酸序列或与SEQIDNO：68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；r所述第一多肽链包含SEQIDNO：63的氨基酸序列或与SEQIDNO：63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：62的氨基酸序列或与SEQIDNO：62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：73的氨基酸序列或与SEQIDNO：73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：74的氨基酸序列或与SEQIDNO：74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；s所述第一多肽链包含SEQIDNO：63的氨基酸序列或与SEQIDNO：63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：62的氨基酸序列或与SEQIDNO：62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：85的氨基酸序列或与SEQIDNO：85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸序列或与SEQIDNO：86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；t所述第一多肽链包含SEQIDNO：4的氨基酸序列或与SEQIDNO：4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或与SEQIDNO：3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：114的氨基酸序列或与SEQIDNO：114的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：115的氨基酸序列或与SEQIDNO：115的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；或u所述第一多肽链包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或与SEQIDNO：10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或与SEQIDNO：9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO：114的氨基酸序列或与SEQIDNO：114的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO：115的氨基酸序列或与SEQIDNO：115的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。项59：一种分离的核酸分子，其包含编码项1-58任一项的结合蛋白的核苷酸序列。项60：一种表达载体，其包含项59的核酸分子。项61：一种分离的宿主细胞，其包含项59的核酸分子。项62：一种分离的宿主细胞，其包含项60的表达载体。项63：项61或项62的分离的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞或昆虫细胞。项64：一种药物组合物，其包含项1-58任一项的结合蛋白及药学上可接受的载剂。项65：一种在患者中预防和或治疗癌症的方法，包括对所述患者施用治疗有效量的项1-23和32-58任一项的至少一个结合蛋白或项64的药物组合物。项66：项65的方法，其中所述结合蛋白包含一个特异性结合T细胞表面蛋白的抗原结合位点和另一个特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点。项67：项66的方法，其中所述结合蛋白包含特异性结合CD3的第一抗原结合位点，特异性结合CD28的第二抗原结合位点，和特异性结合选自下组的肿瘤靶蛋白第三抗原结合位点：CD19、CD20、CD38、Her2和LAMP1。项68：项65-67任一项的方法，其中所述至少一个结合蛋白与化疗剂共同施用。项69：一种在患者中预防和或治疗炎性疾病或病症的方法，包括对所述患者施用治疗有效量的项1-15、24-45和52-58任一项的至少一个结合蛋白或项64的药物组合物。项70：项69的方法，其中所述结合蛋白包含3个抗原结合位点，其各自特异性结合选自下组的细胞因子靶蛋白：IL-4、IL-13和TNFa。项71：项69或项70的方法，其中所述至少一个结合蛋白与抗炎剂共同施用。项72：项65-71任一项的方法，其中所述患者是人。项73：项65或项69的方法，其中所述结合蛋白能够抑制一个或多个选自下组的靶蛋白的功能：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。项74：项1-23和32-58任一项的结合蛋白或项64的组合物，其用于在患者中预防和或治疗癌症的用途。项75：用于项74的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白包含一个特异性结合T细胞表面蛋白的抗原结合位点和另一个特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点。项76：用于项75的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白包含特异性结合CD3的第一抗原结合位点，特异性结合CD28的第二抗原结合位点，和特异性结合选自下组的肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点：CD19、CD20、CD38、Her2和LAMP1。项77：用于项74-76的任一项的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白与化疗剂共同施用。项78：项1-15、24-45和52-58任一项的结合蛋白或项64的药物组合物，其用于在患者中预防和或治疗炎性疾病或病症的用途。项79：用于项78的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白包含3个抗原结合位点，其各自特异性结合选自下组的细胞因子靶蛋白：IL-4、IL-13和TNFa。项80：用于项78或项79的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白与抗炎剂共同施用。项81：用于项74-80任一项的用途的结合蛋白或组合物，其中所述患者是人。项82：用于项74或项78的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白能够抑制一个或多个选自下组的靶蛋白的功能：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。项83：一种纯化通过宿主细胞产生的结合蛋白的方法，包括：a在宿主细胞中产生项2、17、25、35-37、41、43、45和46-55任一项的结合蛋白，其中第二多肽链的CH3域和所述第三多肽链的CH3域中仅有一个包含与人IgG1或IgG4的位置435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代是H435R和Y436F；b使a中产生的结合蛋白与蛋白A接触；和c在适于从包含0或2个CH3域的结合蛋白分离出结合蛋白的条件下从蛋白A洗脱所述结合蛋白，所述CH3域包含为H435R和Y436F的氨基酸取代，由此纯化所述结合蛋白。项84：项83的方法，其中所述第一多肽链的CL域是人κCL域，且所述第四多肽链的CL域是人λCL域；或所述第一多肽链的CL域是人λCL域，且所述第四多肽链的CL域是人κCL域，且所述方法进一步包括：d使c中洗脱的结合蛋白与κ轻链亲和介质接触；和e在适于从仅包含λCL域的结合蛋白分离出结合蛋白的条件下从所述κ轻链亲和介质洗脱结合蛋白。项85：项84的方法，其在e之后还包括：f使e中洗脱的结合蛋白与λ轻链亲和介质接触；和g在适于从仅包含κCL域的结合蛋白分离出结合蛋白的条件下从所述λ轻链亲和介质洗脱所述结合蛋白。项86.项83的方法，其中所述第一多肽链的CL域是人κCL域，且所述第四多肽链的CL域是人λCL域；或所述第一多肽链的CL域是人λCL域，且所述第四多肽链的CL域是人κCL域，且所述方法进一步包括：d使c中洗脱的结合蛋白与λ轻链亲和介质接触；和e在适于从仅包含κCL域的结合蛋白分离出所述结合蛋白的条件下从所述λ轻链亲和介质洗脱结合蛋白。项87.项86的方法，在e之后进一步包括：f使e中洗脱的结合蛋白与κ轻链亲和介质接触；和g在适于从仅包含λCL域的结合蛋白分离出所述结合蛋白的条件下从所述κ轻链亲和介质洗脱结合蛋白。项88：项83-87任一项的方法，其中所述第一多肽链包含λCL域；其中所述第二多肽链的CH3域包含与人IgG1的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1的位置349、366、368、407、435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；且其中第四多肽链包含κCL域。项89：项83-88任一项的方法，其中在c和e的一项或多项中使用疏水相互作用色谱HIC来检测所述结合蛋白。项90.权利要求83-89任一项的方法，其中所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG1或IgG4CH3域。实施例下文实施例用于描述本发明的具体实施方案，及其多种用途。所述实施例仅出于例示目的而示出，并且不应理解为以任何方式限制本发明的范围。实施例1：材料与方法如下材料与方法用于实施例2-5所述的实验。三特异性抗体设计图1A-1C中示出了通用三特异性抗体设计的示意图。基于5个参数设计单个三特异性抗体：1选择抗体结合位点；2考虑每个结合位点的位置；3双特异性结合臂即图1C中的重链轻链B的接头选择；4“杵”和“臼”突变整合至抗体的各自的那一半中；5选择Fc同种型IgG1或IgG4。在每个三特异性分子的氨基酸序列的装配之后，使用人优选密码子CambrYAppliedBiosciences，Cambridge，MA，USA对各个三特异性抗体合成四个基因，并克隆至真核表达载体中。三特异性抗体的生产和纯化根据制造商的方案，通过使用ExpiFectamineTM293转染套组ThermoFisherScientific将4种表达质粒瞬时转染至Expi293细胞中来产生三特异性抗体。简言之，将每个质粒的25％ww稀释于Opti-MEM中，在室温RT与预稀释的ExpiFectamine试剂混合20-30分钟，并加入至Expi293细胞中2.5x106细胞ml。通常使用转染优化以确定质粒的最佳比例，从而产生具有良好产率和纯度的三特异性抗体。转染后4-5天，从转染细胞收集上清液，并通过0.45μm过滤单元Nalgene过滤。使用3步法纯化上清液中的三特异性抗体。首先，使用蛋白A亲和纯化，并使用“IgGElutionBuffer”ThermoFisherScientific洗脱结合的抗体。第二，将产物针对PBSpH7.4透析过夜，其中2次更换PBS缓冲液。在下一步之前通过0.45μm过滤器单元Nalgene过滤清除任何沉淀物。第三，使用大小排阻层析SEC纯化Hiload16600Superdex200pg或Hiload26600Superdex200pg，GEHealthcare去除制备中的聚集体和不同种类。在还原和非还原的SDS-PAGE上分析级分以鉴定含有单体三特异性抗体的级分，然后将其组合。纯化的抗体可被等分并长期储存在-80℃。ELISA测定使用ELISA或SPR方法分析纯化的抗体的结合特性。对于ELISA，使用三特异性抗体中每个结合位点的对应抗原在4℃以4PBSpH7.4中的2μgml每种抗原涂覆96孔免疫平板Nunc439454，ThermoFisherScientific过夜。使用PBS中的5％脱脂乳+2％BSA在室温将涂覆的平板封闭1小时，然后用PBS+0.25％Tween20洗涤三次AquaMax400，MolecularDevices。制备抗体三特异性和对照抗体的连续稀释液，并添加到ELISA板100μl孔，一式两份上，在室温温育1小时，然后用PBS+0.25％Tween20洗涤5次。洗涤后，将缀合有HRP的二抗人Fab1：5000，目录号109-035-097，JacksonImmunoResearchInc添加至每个孔并在室温温育30分钟。用PBS+0.25％Tween20洗涤5次后，向每个孔加入100μl的TMB微孔过氧化物酶底物KPL，Gaithersburg，MD，USA。通过加入50μl1MH2SO4终止反应，并使用SpectraMaxM5MolecularDevices测量OD450，并使用SoftMaxPro6.3软件MolecularDevices进行分析。将最终数据转移至GraphPadPrism软件GraphPadSoftware，CA，USA，并如所示绘图。使用相同的软件计算EC50。SPR测定选择两对重链和轻链进行全动力学分析。使用BIACORE3000GEHealthcare上的表面等离振子共振SPR技术进行纯化抗体的动力学表征。使用研究的抗体的捕获测定其使用标签特异性抗体捕获和取向。对于捕获含有蛋白构建体的Fc，使用人抗体捕获套组GEHealthcare，对于捕获含有蛋白构建体的His标签，使用His捕获套组GEHealthcare。使用标准程序将捕获抗体经伯胺基团11000RU固定在研究级CM5芯片GELifeSciences上。以10μL分钟的流速用调节的RU值捕获分析的抗体，所述调节的RU值导致通常为30RU的最大分析物结合信号。对于示例性测定，重组人IL13目录号IL012和人IL4目录号IL004购自Millipore，重组人TNFα目录号H8916购自SigmaAldrich。在0.1至3nM的浓度范围的IL4和0.8至25nM的IL13，针对重组人IL4和IL13测量结合动力学。对于人TNFα，使用3至100nM的浓度范围。作为测定缓冲液，以30μl分钟的流速使用HBSEP10mMHEPES，pH7.4，150mMNaCl，3mMEDTA和0.005％表面活性剂P20。用各自的捕获套组的再生溶液regenerationsolution再生芯片表面。在BIAevaluation程序包v4.1中使用没有捕获抗体的流动细胞f1owcell作为参考和具有质量转移masstransfer的1∶1Langmuir结合模型来分析和计算动力学参数。为了研究抗原的同时结合，通过抗人抗体捕获表面来捕获三特异性抗体。抗原以单一浓度使用，IL4为3nM，IL13为25nM，TNFα为100nM。为了显示所有三种抗原的同时结合，注射IL4，IL13和TNFα的混合物。在分开的分析周期中，单独注射IL13，然后注射IL4或TNFα，然后共注射IL4TNFα或共注射TNFαIL4。比较了每个循环中测量的最终响应，以显示两种或三种抗原的连续结合与所有三种抗原的混合物的同时结合的相似性。体外T细胞活化和增殖测定使用Ficoll-PaquePlus方法从购自BloodResearchComponentBrookline，MA，USA的血沉棕黄层纯化人PBMC。简言之，首先在PBSpH7.4中以1：3的比例稀释新鲜的血沉棕黄层，并在使用前与Ficoll-PaquePlus溶液Ficoll通过颠倒瓶数次而充分混合。将15mL密度梯度培养基添加至每个管，以1000xg、室温旋转30秒。培养基现在位于多孔屏障下方，然后将30-40mL稀释的血沉棕黄层小心地倒入每个Leucosep管中，并在室温以800×g离心15分钟，松开制动brakeoff和最大加速度为5。除去血浆层，将含有富集的PBMC的上清液其余部分转移到新管中Leucosep管未保持在倒置位置超过2秒。富集的PBMC用45mlPBS洗涤，并在室温以250×g离心10分钟。重复洗涤，并将多个管组合为一个管。将细胞重悬于20mLPBS中并用Bio-RadTC20计数。为了建立体外T细胞活化测定，将纯化的人PBMC重悬于培养基具有10％FBS且补充谷氨酰胺链霉素的RPMI1640ThermoFisherScientmc106细胞m1中。将指定浓度的不同的三特异性和对照抗体加入至每个孔中，或用于在使用前涂覆平板，如Stebbings，R等2007J.Immunol.179：3325-3331，并在组织培养箱中温育16-24小时。将细胞旋转减慢，收集上清液以测量细胞因子释放，或弃去。用针对T细胞标志物CD3，CD4，CD8等和活化标志物CD69，CD62L等的荧光标记抗体染色细胞，并通过在Fortessa流式细胞仪BecktonDickinson，SanJose，CA上运行样品，然后使用Flowjo软件FlowJov10分析来进行分析，并如所示绘图。为了建立体外T细胞增殖测定，将纯化的人PBMC重悬于培养基具有10％FBS且补充谷氨酰胺链霉素的RPMI1640ThermoFisherScientific106细胞ml。将指定浓度的不同的三特异性和对照抗体加入每个孔，并在组织培养箱中温育1-7天。将细胞旋转减慢，收集上清液以测量细胞因子释放，或弃去。用针对T细胞标志物CD3，CD4，CD8等和活化标志物CD69，CD62L等的荧光标记抗体染色细胞，并通过在Fortessa流式细胞仪BecktonDickinson，SanJose，CA上运行样品，然后使用Flowjo软件FlowJov10分析来进行分析，并如所示绘图。体外细胞杀伤测定使用纯化的人PBMC用于使用不同的三特异性抗体针对各种癌细胞的体外杀伤测定。简言之，在96孔V底平板中建立杀伤测定。对于各个平板，将来自各个供体的40mlPBMC以2x10∧6个细胞ml铺板，并制备2.5x10∧5个细胞ml4μL的染料染色至高达1x10∧7个细胞的30mlPKH26Sigma＃MINI26标记的靶细胞。将各种浓度的第一20μL孔测试蛋白或PMA添加至各个孔，然后向各个孔添加80μL孔标记的靶细胞2X10∧4个细胞孔。然后向每个孔添加100μLPBMC，达到E∶T＝10∶1孔2x10∧5个细胞孔，并在37℃5％CO2培养箱中温育24小时。将细胞旋转减慢，收集上清液以测量细胞因子释放，或弃去。用VividLIVEDEADTM可固定紫罗兰死细胞染色缓冲液LifeTechnology＃L34955染色细胞通过将60μLVivid试剂加入60mlPBS中来制备染色缓冲液。通过在黑暗中室温温育15分钟将细胞重悬于100μL染色缓冲液中。用1xPBS洗涤细胞后，将细胞重悬于具有0.5％多聚甲醛的200μLPBS中，并通过Fortessa流式细胞仪BecktonDickinson，SanJose，CA收集PKH26+Vivid+癌细胞，然后使用Flowjo软件分析。杀伤百分比计算为“特异性杀伤-自发杀伤总细胞”，如所示绘图。细胞因子释放测定为了测量体外活化测定、体外杀伤测定、CD34+脐带细胞人源化NSG小鼠中的体内活化测定和毒性研究中的炎性细胞因子浓度，收集细胞培养物上清液，并用MilliplexHumanHighSensitivityT细胞13-plex套组EMDMillipore根据制造商的方案稀释血清样品。这些随后通过EMDMillipore系统和Analyst5.1软件进行分析。体内小、鼠模型和功效研究使用人CD34+造血干细胞移植的NSG小鼠hu-CD34作为体内小鼠模型。这些小鼠建立了多谱系人免疫细胞，并且是免疫肿瘤学功效研究的有效平台参见例如Shultz，L.D等2014ColdSpringHarb.Protoc.2014：694-708。通过注射CD34+造血干细胞产生Hu-CD34+NSG小鼠，显示有效的多谱系移植人免疫细胞群体，包括T细胞，B细胞和一些其他群体McDermott，S.P等2010Blood116：193-200。多谱系造血作用发生在12周内。移植稳定超过一年没有移植物抗宿主病。对于使用hu-CD34NSG小鼠的功效研究，小鼠购自TheJacksonLaboratoryMaine，USA，并在使用前验证人细胞群体。一般而言，将在MatrigelBDBiosciences50％vv中混合的5x106肿瘤细胞用于在每只小鼠中接种肿瘤。一旦肿瘤大小达到100-150mm3的范围，选择小鼠并随机分配至各组用于研究。抗体以给定剂量每周3次静脉内给予。每周监测体重1-3次。肿瘤大小通过卡尺测量1-3次周。当肿瘤大小达到1,500mm3时或最后一次施用后24小时，终止杀死terminated所有小鼠。将终末血液样品0.3mL收集到血清分离管中，通过轻轻颠倒5次予以混合，并置于管架中。还收集终末肿瘤并称重，然后置于固定剂中用于免疫组织化学分析。使用人PBMC人源化hu-PBMCNSG小鼠作为另一体内小鼠模型。这些小鼠通过注射来自健康供体的纯化的人PBMC而产生，其使用成年外周血单核细胞而具有最快的移植速率，并且能够进行需要强效应和记忆T细胞和NK细胞功能的短期研究，并且适于短期功效研究3-4周，这是由于移植物抗宿主病。对于使用hu-PBMCNSG小鼠的功效研究，从TheJacksonJacksonMaine，USA购买了8-10周龄的NSG小鼠货号：005557，NOD.Cg-PrkdcscidI12rgtm1WjlSzJ。每只小鼠接种了MatrigelBDBiosciences50％vv中混合的5x106个肿瘤细胞。一旦肿瘤大小达到50-100mm3的范围，将来自健康供体的10x106人PBMC重建至每只小鼠。第二天验证人细胞重建。一旦肿瘤大小达到100-150mm3的范围，选择小鼠并随机分入各组用于研究。抗体以施用剂量每周3次静脉内施用。每周监测体重1-3次。肿瘤大小通过卡尺测量1-3次周。当肿瘤大小达到1,500mm3时或最后一次施用后24小时，终止杀死所有小鼠。将终末血液样品0.3mL收集到血清分离管中，通过轻轻颠倒5次予以混合，并置于管架中。还收集终末肿瘤并称重，然后置于固定剂中用于免疫组织化学分析。NHP耐受性和药代动力学研究所有NHP研究均由CovancePrinceton，NewJersey，USA根据CovanceICUCA方案进行。在所有研究中都使用药物和蛋白未施用Drug-andprotein-或蛋白未施用的雄性食蟹猴。基于研究设计，为每个三特异性抗体选择并分组猴子。通过经隐静脉静脉内输注1小时给予抗体。对于低剂量＜10μgkg连续给予增加的剂量，而对于较高剂量＞10μgkg则具有1-2天的间隔，出于观察目的。按照规定，在每个剂量施用后对所有动物自输注开始的0小时仅第1天，0.5小时中间输注，1小时和6小时收集血液样品。根据研究主管，病理学家和或临床兽医的判断收集额外的非计划血液样品。所有动物在第60天返回群落。使用标准方法制备来自血液样品的PBMC和血清，并保存以供将来分析。荧光素酶报告测定GloResponseTMIL2-luc2PJurkat细胞，复苏及使用Promega部件＃CS187002和GloResponseTMNFAT-Luc2Jurkat细胞Promega目录＃CS176401购自PromegaWI，USA，并制备用于根据制造商的方案使用。简言之，将细胞在37℃水浴中复苏2分钟，并轻轻转移至含有10mL预热的R10培养基的15mL锥形离心管中。将管在室温以300g离心5分钟。去除上清液，将细胞重悬于20mL预热的R10培养基中并转移至75cm2培养瓶中，然后在37℃的组织培养箱中温育，直到细胞生长且稳定～3-4天。细胞每周两次分装为0.1e6个细胞mL。将细胞保持在R10+潮霉素B培养基中用于选择。复苏后～7天使用细胞用于测定。对于抗体刺激，以各种浓度制备三特异性或对照抗体，并在PBS中连续稀释。每孔分配25μL抗体。对于平板结合的抗体，使用Maxisorp平板，并在40℃温育过夜。对于可溶性抗体，使用U底平板。将报告细胞重悬至0.3-0.5e6mL，并将175μL细胞添加至各个孔，并在37℃CO2培养箱中温育6小时。然后将板从培养箱中取出并使其平衡至环境温度10-15分钟。然后将50μl的Bio-GloTM试剂Promega目录号G7941环境温度加入测定平板的各个孔。温育5分钟后，使用MicroB2LumiJET微孔板计数器PerkinElmer；1s读取时间测量发光活性。使用GraphPadPrism软件绘制数据。构象稳定性使用差示扫描荧光测定法DSF确定热稳定性测量例如熔点，Tm。将样品在D-PBS缓冲液Invitrogen中稀释至终浓度为0.2μgμl，包括白色半裙边96孔板BIORAD中的D-PBS中的SYPRO-Orange染料的4x浓缩溶液Invitrogen，DMSO中的5000x储液。所有测量均使用MyiQ2实时PCR仪BIORAD一式两份进行。在iQ5软件v2.1BIORAD中生成熔解曲线的负一阶导数曲线-dRFUdT。然后将数据导出到MicrosoftExcel中，以确定Tm和数据的图形显示。IC50测量用报告细胞系检测针对II-4和II-13的抗体活性在可商购的HEK-BlueIL-4IL-13报告细胞InvivoGen中确定双特异性抗体或针对细胞因子IL4和IL13的衍生物的活性。设计HEK-BlueIL-4IL-13细胞以监测IL-4或IL13对STAT6途径的活化。用细胞因子刺激细胞导致报告基因分泌的胚胎碱性磷酸酶SEAP的产生，其可以用QUANTI-Blue测定法在培养上清液中测量。为了测试针对IL4或IL13的抗体活性，将细胞因子与不同浓度的抗体预温育1小时，并添加至50,000个HEK-BlueIL-4IL-13细胞。在细胞培养上清液中温育24小时后用QUANTI-Blue测定法InvivoGen测量SEAP的细胞因子介导的诱导。对每个抗体浓度用n＝3个数据点来进行每个实验。通过内部应用Biostat-SpeedV2.0Sanofi计算每种抗体的半最大抑制浓度IC50。用报告细胞系检测针对TNFα的抗体活性通过使用市售的HEK-BlueTNF-a报告细胞InvivoGen测定双特异性抗体或衍生物针对TNFa的活性。设计HEK-BlueTNF-a细胞以通过监测NFkB途径的激活来检测生物活性TNFa，其通过报告基因分泌的胚胎碱性磷酸酶SEAP的表达来进行，所述表达可用QUANTIBlueAssayInvivoGen在上清液中测量。为了确定针对TNFa的抗体活性，将细胞因子与不同浓度的抗体预温育1小时，并添加至50,000个HEKBlueTNF-a细胞。在培养上清液中24小时后用QUANTI-Blue测定法InvivoGen测量SEAP的细胞因子介导的诱导。对于每个抗体浓度用n＝3个数据点来进行每个实验。计算每种抗体的半最大抑制浓度。实施例2：三特异性结合蛋白概览开发了一种用于生成三特异性结合蛋白的新策略。三特异性蛋白质包含形成三个靶结合位点的四个多肽图1A-C。每个靶结合位点包含来自靶向不同的人抗原靶的抗体的VH和VL域参见例如表1。三特异性结合蛋白含有第一对多肽，其具有双重可变域，该可变域具有形成两个不同的抗原结点位点的交叉取向称为CODVIg形式，以及第二对多肽，其各自具有形成第三抗原结点位点的单一可变域图1A和1B。表1：结合蛋白1-21的重链和轻链SEQIDNO，和结合蛋白所针对的靶抗原第一对多肽具有双重可变域包含具有结构VL2-接头-VL1-接头-免疫球蛋白轻链恒定域的第一多肽和具有结构VH1-接头-VH2-接头-免疫球蛋白CH1重链恒定结构域，得到一对具有交叉取向的多肽，其形成两个不同的抗原结合位点：VH1-VL1和VH2-VL2图1C，参见轻链和重链B。表A概述了代表性的三特异性结合蛋白的IgG1和IgG4变体的双特异性臂即包含重链和轻链B的臂的设计，包括指示三特异性结合蛋白的双特异性臂中使用的接头的各种组合。第二对多肽其各自具有单一可变域包含具有结构VH3-免疫球蛋白CH1重链恒定域的第一多肽和具有结构VL3-免疫球蛋白轻链恒定域的第二多肽，得到一对多肽，其形成第三抗原结合位点：VH3-VL3图1C，参见轻链和重链A。此外，构建三特异性结合蛋白，使得CH3域中的任一个可包含杵或臼修饰以促进抗体异源二聚化图1。表A：作为IgG1臼或IgG4臼的三特异性结合蛋白的三特异性臂的设计概述接头：[L3，L4][L1，L2]-[S，RT][GQPKAAPSEQIDNO：175，TKGPSSEQIDNO：106]；[，][GGGGSGGGGSSEQIDNO：104，GGGGSGGGGSSEQIDNO：104]；或[GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，][GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO：105，]实施例3：T细胞衔接体的体外结合活性和抗体介导的特异性杀伤本实施例描述了表征T细胞衔接体的活性的体外测定。使用上述实施例2中关于三特异性结合蛋白设计描述的方法，生成了四种三特异性结合蛋白结合蛋白1、3、5和6。这些三特异性结合蛋白是通过将分离自靶向不同的人蛋白的抗体的VH和VL域移接到三特异性结合蛋白框架上产生的，所述不同的人蛋白：CD3，CD19，CD28，CD38或Her2。构建结构蛋白1使得第一对多肽其形成两个抗原结合位点靶向CD28和CD3且第二对多肽其形成单个抗原结点位点靶向Her2结合蛋白1＝Her2xCD28×CD3。构建结合蛋白3使得第一对多肽其形成两个抗原结合位点靶向CD28和CD3且第二对多肽其形成单个抗原结合位点靶向CD19结合蛋白3＝CD19×CD28×CD3。构建结构蛋白5使得第一对多肽其形成两个抗原结合位点靶向CD28和CD3且第二对多肽其形成单个抗原结合位点靶向CD38结合蛋白5＝CD38×CD28×CD3。构建结合蛋白6使得第一对多肽其形成两个抗原结合位点靶向CD28和CD3且第二对多肽其形成单个抗原结点位靶向CD38结合蛋白6＝CD38×CD28×CD3。用包含抗Her2的三特异性结合蛋白的体外测定为了测试三特异性结合蛋白靶向和结合三种不同的人抗原的能力，首先通过ELISA测定测验结合蛋白1对其靶标的特异性。结合蛋白1能够结合其所有三种靶蛋白CD3，CD28和Her2图2，指示三特异性形式的每个结合域保留其功能。用膜染料PKH-26Sigma标记ZR-75-1，AU565Her2+，ARH-77CD19+，MOLP-8，RPMI-8226，KMS-12_BM，NCI-H929，MM.1.S，MM.1.，ROPM-2，KMS-26和U266细胞CD38+并用作细胞毒性测定中的靶细胞。在增加浓度的三特异性抗体，双特异性抗体或对照蛋白的存在下，将这些标记的细胞系以10∶1的E∶T比率与富集的人PanT细胞共培养24小时。通过如下步骤来确定靶细胞中细胞裂解的程度：用活死细胞标记物LifeTechnologies染色，并通过在Fortessa流式细胞仪BecktonDickinson，SanJose，CA上运行样品来测量标记的靶细胞群体中的死细胞数目，然后使用Flowjo软件FlowJov10进行分析。用荧光缀合的针对人CD3、CD28、CD19、CD38、LAMP1和或Her2的抗体Biolegend来染色Her2+、CD19+、CD38+肿瘤细胞系。还包括用各自同种型匹配的对照抗体进行染色。然后在Fortessa仪器BecktonDickinson，SanJose，CA上获得细胞。流式分析在FlowJov10上进行。各种结合蛋白的介导的杀伤结果示于图3A-5，9A，9B和11A-16中。测试了结合蛋白1在表达HER2蛋白的肿瘤细胞的表面上诱导其抗体介导的细胞杀伤的能力。不仅结合蛋白1能够结合其所有三种靶蛋白，而且还能够诱导Her2+细胞系的抗体介导的细胞杀伤图3A-4。结合蛋白1表现出强的抗体介导的细胞杀伤活性，而抗CD3CD28双特异性抗体和抗Her2抗体显示出最小的杀伤活性图3A，3B，4和5，证明使用三特异性抗体使得肿瘤细胞与T细胞通过肿瘤抗原HER2和T细胞标志物CD3和CD28接合的有效性。抗CD3CD28不仅对T细胞募集很重要，而且还提供了更有效的T细胞激活和生存信号传导，潜在地改进了疗效。另外，使用抗Her2xCD28xCD3三特异性抗体结合蛋白1对体外T细胞活化和增殖以及细胞因子产生进行了研究。结合蛋白1和具有一个或两个通过定点诱变失活的结合域的对照变体ΔCD28：抗CD28失活；ΔCD3：抗CD3失活；ΔCD3xCD28：抗CD3和抗CD28均失活用于人PBMC体外活化测定，如实施例1所述。结果显示，结合蛋白1在体外有效活化人原代CD4T细胞和CD8T细胞二者。抗CD28的失活降低了活化效力，指示抗CD28共信号传导通路的重要性。抗CD3结合位点的失活使结合蛋白1达到最小的活性，表明抗CD3提供了主要的T细胞激活信号传导图6A和6B。使用IL2和NFAT报告基因人T细胞系Jurkat-IL2和Jurkat-NFAT获得了相似的结果图7A-7C。使用包含抗CD19的三特异性结合蛋白的体外测定抗CD19×CD28×CD3三特异性结合蛋白能够结合其靶抗原图8，表明三特异性形式的每个结合域保持其功能。抗CD19×CD28×CD3三特异性结合蛋白还能诱导CD19+细胞的抗体介导的细胞杀伤图9A-9N。类似地，抗CD19×CD28×CD3三特异性结合蛋白对人淋巴瘤细胞表现出强的杀伤活性，而抗CD3CD28，抗CD19和同种型对照抗体显示出最小的杀伤活性，证明使用三特异性抗体通过肿瘤抗原CD19和T细胞标志物CD3和CD28使得T细胞与肿瘤细胞接合的有效性。使用包含抗CD38的三特异性结合蛋白的体外测定如对结合蛋白1和3所观察到的，结合蛋白5能够结合其所有三种靶蛋白CD3，CD28和CD38，如通过ELISA测定图10所评估的，表明三特异性形式的各结合域保留其功能。还发现结合蛋白5针对具有各种水平的CD38和CD28表达的9种人多发性骨髓瘤细胞参见图11D，12D和13D诱导细胞的抗体介导的细胞杀伤图11A-15D。类似地，三特异性结合蛋白5对人多发性骨髓瘤细胞表现出强的杀伤活性，而抗CD38和同种型对照抗体显示出最小的杀伤活性，证明使用三特异性抗体通过肿瘤抗原CD38和CD28和T细胞标志物CD3和CD28将肿瘤细胞与T细胞接合的有效性。双特异性抗CD3CD28对照抗体还显示出对CD28+MM细胞的边际杀伤活性marginalkillingactivity，参见图11B，12A-C和13A-C。这些结果证明，本文所述的三特异性抗体平台提供了整合两个肿瘤标志物的结合位点或T细胞标记的两个结合位点的可能性，允许科学设计和各种应用的灵活性。结合蛋白5对于5种CD38+人淋巴瘤细胞系图14C和15D也是有效的，显示出强的杀伤活性图14A-B和15A-C。测试了使用结合蛋白5和6的针对多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226的抗体介导的细胞杀伤，并计算它们的EC50并与靶向CD28和CD3的CODV形式双特异性抗体图16和表B进行比较。结合蛋白5和6的不同仅在于抗CD28结合域；结合蛋白5含有抗CD28超激动剂，而结合蛋白6含有常规的抗CD28。结合蛋白5显示出更强的杀伤活性。表B：针对双特异性和三特异性结合蛋白计算的EC50值EC50pMhuCD28xCD3IgG456.16结合蛋白5IgG40.3787结合蛋白6IgG45.709抗CD38×CD28×CD3三特异性结合蛋白5和具有一个或两个通过定点诱变失活的结合域的对照变体ΔCD28：抗CD28失活；ΔCD3：抗CD3失活；ΔCD3xCD28：抗CD3和抗CD28二者均失活在体外活化测定中使用IL2和NFAT报告人T细胞系Jurkat-IL2和Jurkat-NFAT测试，如实施例1所述。结果显示，结合蛋白5在体外有效激活人IL2和NFAT启动子二者图17A和17B。抗CD28的失活降低了活化效力，其对于IL2报告基因更为突出，这表明抗CD28共信号传导通路的重要性。抗CD3结合位点的失活使结合蛋白5达到最小的活性，表明抗CD3提供了主要的T细胞激活信号传导。实施例4：T细胞衔接体的体内活性本实施例描述的实验表征了含有T细胞衔接体的抗Her2或抗CD38的体内特性和活性。使用包含抗Her2的三特异性结合蛋白的体内测定如实施例1所述，使用Her2×CD28×CD3三特异性抗体的剂量递增研究在非人灵长类动物图18A-18E中进行。结合蛋白1中的所有三个结合域均与猴CD3CD28HER2具有交叉反应性。设计了剂量递增毒性研究来评估分子的潜在毒性概貌。收集血样用于血清和PBMC分离。在每次施用后研究循环T细胞群体图18A和18B，以及T细胞亚群活化CD69+图18C和18D。循环中CD4和CD8T细胞的百分比在低剂量升高时增加，但在高剂量升高时最终降低。显著的CD4和CD8T细胞活化仅在100μgkg剂量处突出，表明相对高的可耐受剂量。还测量了几种细胞因子的血清水平。仅在最高剂量处观察到显著的细胞因子释放100μgkg；图18E。接下来，如实施例1图19A-20H所述检查三特异性抗Her2×CD28×CD3结合蛋白1抗体对人源化小鼠模型中肿瘤生长的影响。图19A和19B总结了使用接种有人HER2+乳腺癌细胞系BT474的人CD34+造血干细胞移植的NSG小鼠hu-CD34模型得到的结果。所有剂量组中显著的抗肿瘤活性均是明显的。抗肿瘤活性是剂量依赖性的，与25μgkg的对照组相比有统计学差异。任何治疗组中均未观察到明显体重减轻。还进行了使用人HER2+乳腺癌细胞系BT474接种的人PBMC重建NSG小鼠模型的第二次体内研究图20A-20H。在高剂量组100和500μgkg内观察到了显著的抗肿瘤活性。在500μgkg组的40％的小鼠中观察到肿瘤缩减。抗肿瘤活性是剂量依赖性的。用100和500μgkg剂量治疗的组中的抗肿瘤活性显著优于抗HER2治疗组0.1至10mgkg，指示来自结合蛋白1的优异的抗肿瘤活性。任何观察组中均未观察到明显体重减轻。使用包含抗CD38的三特异性结合蛋白的体内测定使用如实施例1中所述的三特异性抗CD38×CD28×CD3抗体结合蛋白5在非人灵长类中进行剂量递增研究图21A-21F。结合蛋白5中的三个结合域中的两个与猴CD3和CD28具有交叉反应性。设计了剂量递增毒性研究来评估该分子的潜在毒性概貌。收集血样用于血清和PBMC分离。每次施用后研究循环T细胞群体图21A和21B，柱状图以及T细胞亚群活化CD69+图21A和21B，线图。循环中的CD4和CD8T细胞的百分比在低剂量升高时增加，但在高剂量升高时最终降低。显著的CD4和CD8T细胞活化仅在100μgkg剂量处突出，表明相对高的可耐受剂量。还测量了几种细胞因子的血清水平。仅在最高剂量100μgkg；图21C-21F处观察到显著的细胞因子释放。如实施例1所述，随后在人源化小鼠图22A-23D中测试了抗CD38×CD28×CD3三特异性抗体的体内活性。图22A-22C总结了来自使用人CD34+造血干细胞移接的NSG小鼠hu-CD34模型其移植有用CD38和PD-L1转导的人MM细胞系RPMI-8226，以5、50和100μgkg的剂量用结合蛋白5处理的剂量确定先导研究的结果。显著的抗肿瘤活性仅在5μgkg处理的组中明显图22A。在结合蛋白5处理的小鼠5μgkg图22B和22C中观察到CD8T细胞浸润。使用结合蛋白5，以0.04-5μgkg施用，在相同模型中进行随访研究图23A-23D。在结合蛋白5处理的所有组中均显示出显著的抗肿瘤活性图23B，其在研究结束时与对照有统计学差异图23C。在任何处理组中均未观察到显著的体重减轻图23A。在用指定浓度的结合蛋白5或PBS对照图23D处理的小鼠中，在第一次施用后4小时观察到血清炎症细胞因子IFN-γ，TNF-α和IL-2的剂量依赖性诱导，指示三特异性结合蛋白5的体内有效T细胞活化。对人源化CD34+NSG小鼠n＝3静脉注射100mcgkg的三特异性抗体三角形，双特异性抗体正方形或单特异性抗体圆形。在抗体注射后0注射前、1、24和72小时，通过在各个时间点由Luminex’sxMAP多重复合技术确定CD69的平均百分比增加，血浆中CD62L和或炎性细胞因子的浓度的百分比降低来测量CD4+或CD8+T细胞的活化。各种三特异性抗体的T细胞活化结果如图24-26C所示。在施用结合蛋白5、抗CD3CD28_IgG4双特异性抗体和抗CD28IgG4抗体对照后，在人CD34+造血干细胞移植的NSG小鼠hu-CD34模型中研究全身性体内T细胞活化图24。将100μgkg的结合蛋白5和对照抗体以3只小鼠组施用。在施用后1小时，24小时和72小时收集血样。从血液分离小鼠血清和人T细胞，将其保存用于T细胞活化分析和用于血清细胞因子水平的测量。图24和图25显示，在抗体输注后1小时人CD4和CD8T细胞被活化，其在72小时处恢复到基线。图26A-26C显示在输注后1小时观察到的相同小鼠中血清IFN-γ，TNF-α和IL-2释放的升高，并在24小时后恢复至基线。这些结果证明结合蛋白5和抗CD3CD28IgG4双特异性抗体在给定动物模型中有效激活T细胞，使其适合于体内功效研究。实施例5：针对细胞因子的三特异性和双特异性三价结合蛋白的表征如下实施例描述了表征靶向人细胞因子的新型三特异性和双特异性三价结合蛋白的稳定性，结合特性和活性的实验。设计了三特异性结合蛋白例如其结合三种不同的靶蛋白；结合蛋白9-15，以及双特异性三价结合蛋白例如在单价结合一个抗原上二价结合一个抗原；结合蛋白16-19表C。除了结构蛋白11，其中在CODV-LC和Fab-臂-LC两者上都使用κ恒定域，所有其他结合蛋白9-10和12-19都以CODV-LC上的κ恒定域和Fab-臂-LC上的λ恒定域来产生。使用IgG1序列作为Fc骨架。当CODV-HC携带杵-RF突变S354C，T366W；H435R和Y436F，Fab-臂-HC含有臼突变Y349C，T366S，L368A，Y407V。表C：针对抗IL-4IL-13TNFα的三特异性三价结合蛋白的总结三特异性和双特异性三价结合蛋白如上文所述生产并纯化图27。表D：结合蛋白16-19的SEC纯化为了评估三特异性结合蛋白的稳定性，通过DSF评价其熔点并与亲本抗体的热稳定性进行比较表E。表E：通过DSF和来自各种三特异性结合蛋白的制备型大小排阻色谱的百分比单体的热稳定性总结nd＝未确定为了评估三特异性形式中每个单一抗体结合域的结合亲和力，如前所述进行每个单一抗原的SPR分析。结果是针对亲本抗体的亲和力的基准表F，G和H。表F：各种三特异性结合蛋白的IL-4的表面等离子体共振结果总结表G：各种三特异性结合蛋白的IL-13的表面等离子体共振结果总结表H：各种三特异性结合蛋白的TNFα的表面等离子体共振结果总结为了评估三特异性结合蛋白的中和活性，使用不同的HEKBlue套组Invivogen进行细胞测定。细胞因子在96孔板中在室温用不同浓度的抗细胞因子抗体预温育30分钟。对照包括仅细胞因子或仅抗体的使用。将50，000个HEKBlue细胞HEKBlueTNFaIL1β细胞InvivoGen，目录＃hkb-tnfil1；HEKBlueSTAT-6细胞InvivoGen，目录＃Hkb.stat6添加至细胞因子抗体混合物，并在5％CO2的培养箱中于37℃温育23小时。将QuantiBlue试剂添加至各个培养孔，并在37℃处温育2小时。在620nm处测量OD，并使用BioStatSpeed2.0计算IC50。各种三特异性抗体的HEKBlue报告细胞测定结果示于表I和表M。然后，针对单一亲本抗体计算结合蛋白9-15和基准的IC50值表I。表I：各种三特异性结合蛋白的HEKBlue报告测定总结IC50数据通过差示扫描荧光测定法测量双特异性三价结合蛋白的热稳定性DSF；表J。表J：各种三价结合蛋白的通过DSF的热稳定性的总结测量了针对人IL-4表K和IL-13表K和L的各个双特异性三价结合蛋白所结合的靶蛋白的结合亲和力和数目。表K：各种三价结合蛋白的IL-4的表面等离子体共振结果总结表L：各种三价结合蛋白的IL-13的表面等离子体共振结果总结最终，计算了结合蛋白16-19的IC50值表M。表M：各种三价结合蛋白的HEKBlue报告测定IC50数据总结实施例6：三特异性结合蛋白形式优化许多现有的异二聚体结合蛋白形式例如双特异性抗体及其各种变体的问题在于，仅纯化所需的异二聚体物质而不包括任一同二聚体物质是困难的。因此，有效纯化所需的异二聚体结合蛋白的方法是非常有意义的，例如用于工业规模生产。如本文所述，本发明的结合蛋白可包括几个可选特征，包括但不限于杵和臼突变例如促进适当的异二聚体形成和突变以改进纯化。此外，这些结合蛋白包括两条轻链，导致四种潜在的构型：两条κ轻链，两条λ轻链，具有双重可变域的臂“CODV臂”上的κ轻链和传统抗体臂“Fab臂”上的λ轻链，以及CODV臂上的λ轻链和Fab臂上的κ轻链。因此，进行实验以鉴定允许有效纯化所需结合蛋白的方法。还测试了结合蛋白变体的纯化效率。图28A示出了本发明的示例性结合蛋白的图，其表明了导致独特构型的变体。这些实验测试了布置placement的效果：κ和λ轻链例如两个κ，两个λ，CODV臂上的κ和Fab臂上的λ，以及CODV臂上的λ和Fab臂上的κ，杵和臼突变例如CODV臂上的杵突变和Fab臂上的臼突变，CODV臂上的臼突变和Fab臂上的杵突变和H435RY436F突变“RF突变”，例如CODV或Fab臂上的RF突变，或没有RF突变。共测试了18种不同的变体，如图28B所示。对于这些实验，CODV臂具有特异性针对TNFa即分别为SEQIDNO：168和169的VH和VL序列和IL4即分别为SEQIDNO：170和171的VH和VL序列的抗原结合位点，而Fab臂具有特异性针对IL13的抗原结点位点即分别为SEQIDNO：172和173的VH和VL序列。S354C和T366W用于杵突变，而Y349C，T366S，L368A和Y407V用于臼突变。测试了各种处理步骤监测CODV和Fab臂的正确配对例如与CODV或Fab同二聚体相反的能力，以及正确的重链-轻链配对例如与Fab臂轻链和CODV臂重链之间的配对相反，或与Fab臂重链和CODV臂轻链之间的配对相反。发现分析型大小排阻色谱SEC在区分正确的重链和轻链配对方面无效；发现具有与CODV重链错配的Fab臂轻链的结合蛋白和具有两个Fab臂的同二聚体结合蛋白与所需的三特异性结合蛋白共同洗脱。然而，发现分析疏水相互作用色谱HIC从具有与CODV重链错配的Fab臂轻链的结合蛋白和具有两个Fab臂的同二聚体结合蛋白中解析出resolve所需的三特异性结合蛋白图29。图28B所示的18个结合蛋白构型通过蛋白A亲和色谱纯化，然后是KappaSelectGEHealthcare纯化。通过HIC色谱法监测物质种类。一个结合蛋白构型得以高效纯化，而不包括错配种类：CODV臂的λ轻链，Fab臂的κ轻链，CODV臂上的杵突变，Fab臂上的臼突变和Fab臂上的RF突变。HIC色谱图30A，SDS-PAGE图30B和完整质量分析证明，纯化出了对应于所需三特异性结合蛋白的单一种类。这些结果鉴定了一个结合蛋白构型，其允许更有效地从错配的种类纯化所需的结合蛋白种类。此外，蛋白A的纯化过程之后是KappaSelect纯化步骤，显示其提供有效地从错配的种类分离所需结合蛋白。虽然本发明包括各种实施方案，但是应当理解，本领域技术人员会想到变化和修改。因此，所附权利要求书旨在覆盖落入本发明范围内的所有等同变化。此外，本文使用的部章节分标题仅出于组织目的，而不应被理解为限制所描述的主题。除非明确指出相反，否则本文所述的每个实施方案可以与任何其它实施方案或多个实施方案组合。具体地，表明为优选的或有利的任何特征或实施方案可以与表明为优选或有利的任何其它特征或多个特征或实施方案或多个实施方案组合，除非清楚的相反指示。本申请中引用的所有参考文献通过提述明确并入本文。序列表1：结合蛋白1-21的重链和轻链序列SEQIDNO及所述结合蛋白所针对的靶抗原表2：特异性针对Her2、CD3、CD28、CD19和或CD20的结合蛋白的重链和轻链序列。CDR序列以粗体和斜体显示。表3：特异性针对IL-4、IL-13和或TNFa的结合蛋白的重链和轻链序列序列表YANG,Zhi-yongNABEL,GaryJ.WU,LanSEUNG,EdwardWEI,RonnieBENINGA,JochenRAO,ErcoleLEUSCHNER,WulfDirkBEIL,ChristianLANGE,ChristianCORVEY,Carsten三特异性和或三价结合蛋白183952027140尚未指定与此同时US62322,0362016-04-13US62331,1912016-05-03US62412,1872016-10-24EP17305298.62017-03-17179用于Windows的FastSEQ4.0版1447PRT人工序列合成构建体1GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheAsnIleLysAspThr202530TyrIleHisTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045AlaArgIleTyrProThrAsnGlyTyrThrArgTyrAlaAspSerVal505560LysGlyArgPheThrIleSerAlaAspThrSerLysAsnThrAlaTyr65707580LeuGlnMetAsnSerLeuArgAlaGluAspThrAlaValTyrTyrCys859095SerArgTrpGlyGlyAspGlyPheTyrAlaMetAspTyrTrpGlyGln100105110GlyThrLeuValThrValSerSerAlaSerThrLysGlyProSerVal115120125PheProLeuAlaProCysSerArgSerThrSerGluSerThrAlaAla130135140LeuGlyCysLeuValLysAspTyrPheProGluProValThrValSer145150155160TrpAsnSerGlyAlaLeuThrSerGlyValHisThrPheProAlaVal165170175LeuGlnSerSerGlyLeuTyrSerLeuSerSerValValThrValPro180185190SerSerSerLeuGlyThrLysThrTyrThrCysAsnValAspHisLys195200205ProSerAsnThrLysValAspLysArgValGluSerLysTyrGlyPro210215220ProCysProProCysProAlaProGluPheLeuGlyGlyProSerVal225230235240PheLeuPheProProLysProLysAspThrLeuMetIleSerArgThr245250255ProGluValThrCysValValValAspValSerGlnGluAspProGlu260265270ValGlnPheAsnTrpTyrValAspGlyValGluValHisAsnAlaLys275280285ThrLysProArgGluGluGlnPheAsnSerThrTyrArgValValSer290295300ValLeuThrValLeuHisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGluTyrLys305310315320CysLysValSerAsnLysGlyLeuProSerSerIleGluLysThrIle325330335SerLysAlaLysGlyGlnProArgGluProGlnValTyrThrLeuPro340345350ProCysGlnGluGluMetThrLysAsnGlnValSerLeuTrpCysLeu355360365ValLysGlyPheTyrProSerAspIleAlaValGluTrpGluSerAsn370375380GlyGlnProGluAsnAsnTyrLysThrThrProProValLeuAspSer385390395400AspGlySerPhePheLeuTyrSerLysLeuThrValAspLysSerArg405410415TrpGlnGluGlyAsnValPheSerCysSerValMetHisGluAlaLeu420425430HisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeuSerLeuSerLeuGlyLys4354404452214PRT人工序列合成构建体2AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerGlnAspValAsnThrAla202530ValAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrSerAlaSerPheLeuTyrSerGlyValProSerArgPheSerGly505560SerArgSerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysGlnGlnHisTyrThrThrProPro859095ThrPheGlyGlnGlyThrLysValGluIleLysArgThrValAlaAla100105110ProSerValPheIlePheProProSerAspGluGlnLeuLysSerGly115120125ThrAlaSerValValCysLeuLeuAsnAsnPheTyrProArgGluAla130135140LysValGlnTrpLysValAspAsnAlaLeuGlnSerGlyAsnSerGln145150155160GluSerValThrGluGlnAspSerLysAspSerThrTyrSerLeuSer165170175SerThrLeuThrLeuSerLysAlaAspTyrGluLysHisLysValTyr180185190AlaCysGluValThrHisGlnGlyLeuSerSerProValThrLysSer195200205PheAsnArgGlyGluCys2103571PRT人工序列合成构建体3GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValValLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrSerTyr202530TyrIleHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpIle354045GlySerIleTyrProGlyAsnValAsnThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgAlaThrLeuThrValAspThrSerIleSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerArgLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrTyrCys859095ThrArgSerHisTyrGlyLeuAspTrpAsnPheAspValTrpGlyLys100105110GlyThrThrValThrValSerSerSerGlnValGlnLeuValGluSer115120125GlyGlyGlyValValGlnProGlyArgSerLeuArgLeuSerCysAla130135140AlaSerGlyPheThrPheThrLysAlaTrpMetHisTrpValArgGln145150155160AlaProGlyLysGlnLeuGluTrpValAlaGlnIleLysAspLysSer165170175AsnSerTyrAlaThrTyrTyrAlaAspSerValLysGlyArgPheThr180185190IleSerArgAspAspSerLysAsnThrLeuTyrLeuGlnMetAsnSer195200205LeuArgAlaGluAspThrAlaValTyrTyrCysArgGlyValTyrTyr210215220AlaLeuSerProPheAspTyrTrpGlyGlnGlyThrLeuValThrVal225230235240SerSerArgThrAlaSerThrLysGlyProSerValPheProLeuAla245250255ProCysSerArgSerThrSerGluSerThrAlaAlaLeuGlyCysLeu260265270ValLysAspTyrPheProGluProValThrValSerTrpAsnSerGly275280285AlaLeuThrSerGlyValHisThrPheProAlaValLeuGlnSerSer290295300GlyLeuTyrSerLeuSerSerValValThrValProSerSerSerLeu305310315320GlyThrLysThrTyrThrCysAsnValAspHisLysProSerAsnThr325330335LysValAspLysArgValGluSerLysTyrGlyProProCysProPro340345350CysProAlaProGluPheLeuGlyGlyProSerValPheLeuPhePro355360365ProLysProLysAspThrLeuMetIleSerArgThrProGluValThr370375380CysValValValAspValSerGlnGluAspProGluValGlnPheAsn385390395400TrpTyrValAspGlyValGluValHisAsnAlaLysThrLysProArg405410415GluGluGlnPheAsnSerThrTyrArgValValSerValLeuThrVal420425430LeuHisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGluTyrLysCysLysValSer435440445AsnLysGlyLeuProSerSerIleGluLysThrIleSerLysAlaLys450455460GlyGlnProArgGluProGlnValCysThrLeuProProSerGlnGlu465470475480GluMetThrLysAsnGlnValSerLeuSerCysAlaValLysGlyPhe485490495TyrProSerAspIleAlaValGluTrpGluSerAsnGlyGlnProGlu500505510AsnAsnTyrLysThrThrProProValLeuAspSerAspGlySerPhe515520525PheLeuValSerLysLeuThrValAspLysSerArgTrpGlnGluGly530535540AsnValPheSerCysSerValMetHisGluAlaLeuHisAsnHisTyr545550555560ThrGlnLysSerLeuSerLeuSerLeuGlyLys5655704338PRT人工序列合成构建体4AspIleValMetThrGlnThrProLeuSerLeuSerValThrProGly151015GlnProAlaSerIleSerCysLysSerSerGlnSerLeuValHisAsn202530AsnAlaAsnThrTyrLeuSerTrpTyrLeuGlnLysProGlyGlnSer354045ProGlnSerLeuIleTyrLysValSerAsnArgPheSerGlyValPro505560AspArgPheSerGlySerGlySerGlyThrAspPheThrLeuLysIle65707580SerArgValGluAlaGluAspValGlyValTyrTyrCysGlyGlnGly859095ThrGlnTyrProPheThrPheGlySerGlyThrLysValGluIleLys100105110GlyGlnProLysAlaAlaProAspIleGlnMetThrGlnSerProSer115120125SerLeuSerAlaSerValGlyAs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权利要求：1.一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。2.一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，所述3个抗原结合位点特异性结合一个或多个靶蛋白，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对。3.权利要求1的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。4.权利要求1或权利要求2的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4的至少一个独立地长度为0个氨基酸。5.权利要求1或权利要求2的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4各自独立地长度为至少1个氨基酸。6.权利要求1或权利要求2的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4各自独立地包含选自由下列组成的组的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO:104，GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105，S，RT，TKGPSSEQIDNO:106，GQPKAAPSEQIDNO:175，和GGSGSSGSGGSEQIDNO:148。7.权利要求1或权利要求2的结合蛋白，其中aL1包含序列GQPKAAPSEQIDNO:175，L2包含序列TKGPSSEQIDNO:106，L3包含序列S，且L4包含序列RT；bL1包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO:104，L2包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO:104，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；cL1包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO:148，L2包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO:148，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；或dL1包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105，L2长度为0个氨基酸，L3包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105，且L4长度为0个氨基酸。8.权利要求1或权利要求2的结合蛋白，其中所述结合蛋白是三特异性的且能够特异性结合3个不同的抗原靶标。9.权利要求1-8任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白特异性结合3个靶蛋白，所述靶蛋白对应于T细胞上的2个靶蛋白以及1个肿瘤靶蛋白。10.权利要求9的结合蛋白，其中T细胞上的所述靶蛋白之一是CD3。11.权利要求9或权利要求10的结合蛋白，其中T细胞上的所述靶蛋白之一是CD28。12.权利要求9-11的任一项的结合蛋白，其中所述肿瘤靶蛋白是CD38。13.权利要求1-8任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白特异性结合3个靶蛋白，所述靶蛋白对应于T细胞上的2个靶蛋白以及1个选自下组的靶蛋白：A2AR、APRIL、ATPD酶ATPDase、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1ectonucleosidetriphosphatediphosphohydrolase1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1NTPDase-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。14.权利要求1或权利要求2的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够抑制一个或多个靶蛋白的功能。15.权利要求14的结合蛋白，其中所述一个或多个靶蛋白选自由下列组成的组：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。16.一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO:151、153、155、157、159、161、163、165和167任一项所示的可变域序列；或bVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含如SEQIDNO:43-59、123-125、138-140和149任一项所示的氨基酸序列；且其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO:150、152、154、156、158、160、162、164和166的任一项所示的可变域序列；或bVH1、VH2和VH3各自独立地包含可变域的重链互补决定区，其包含如SEQIDNO:25-42、120-122和126-128任一项所示的氨基酸序列。17.一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO:151、153、155、157、159、161、163、165和167任一项所示的可变域序列；或bVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含如SEQIDNO:43-59、123-125、138-140和149任一项所示的氨基酸序列；且其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO:150、152、154、156、158、160、162、164和166的任一项所示的可变域序列；或bVH1、VH2和VH3各自独立地包含可变域的重链互补决定区，其包含如SEQIDNO:25-42、120-122和126-128任一项所示的氨基酸序列。18.权利要求16的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。19.权利要求16或权利要求17的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4的至少一个独立地长度为0个氨基酸。20.权利要求16或权利要求17的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4各自独立地长度为至少1个氨基酸。21.权利要求16或权利要求17的结合蛋白，其中L1、L2、L3、或L4各自独立地包含选自由下列组成的组的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO:104，GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105，S，RT，TKGPSSEQIDNO:106，GQPKAAPSEQIDNO:175，和GGSGSSGSGGSEQIDNO:148。22.权利要求16或权利要求17的结合蛋白，其中aL1包含序列GQPKAAPSEQIDNO:175，L2包含序列TKGPSSEQIDNO:106，L3包含序列S，且L4包含序列RT；bL1包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO:104，L2包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO:104，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；cL1包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO:148，L2包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO:148，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；或dL1包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105，L2长度为0个氨基酸，L3包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105，且L4长度为0个氨基酸。23.权利要求16或权利要求17的结合蛋白，其中：aVH1包含：包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:27的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:45的氨基酸序列的CDR-L3；bVH1包含：包含SEQIDNO:31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:26的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:27的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:43的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:45的氨基酸序列的CDR-L3；cVH1包含：包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:37的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:38的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:39的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:55的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:56的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:57的氨基酸序列的CDR-L3；dVH1包含：含SEQIDNO:31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:37的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:38的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:39的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:55的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:56的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:57的氨基酸序列的CDR-L3；eVH1包含：包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:40的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:41的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:42的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:58的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:59的氨基酸序列的CDR-L3；fVH1包含：含SEQIDNO:31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:40的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:41的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:42的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:58的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:44的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:59的氨基酸序列的CDR-L3；gVH1包含：包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:126的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:127的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:128的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:138的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:139的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:140的氨基酸序列的CDR-L3；hVH1包含：含SEQIDNO:31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:126的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:127的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:128的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:138的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:139的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:140的氨基酸序列的CDR-L3；iVH1包含：包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:46的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:48的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:120的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:121的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:122的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:123的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:124的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:125的氨基酸序列的CDR-L3；或jVH1包含：含SEQIDNO:31的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:49的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:50的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:51的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:36的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:52的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:53的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:54的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:120的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:121的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:122的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:123的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:124的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:125的氨基酸序列的CDR-L3。24.一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO:169、171和173任一项所示的可变域序列；或bVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:141-147、178和179；其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO:168、170和172的任一项所示的可变域序列；或bVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:129-137。25.一种结合蛋白，其包含形成3个抗原结合位点的4条多肽链，其中第一多肽链包含如下式表示的结构：VL2-L1-VL1-L2-CL[I]且第二多肽链包含如下式表示的结构：VH1-L3-VH2-L4-CH1-铰链-CH2-CH3[II]且第三多肽链包含如下式表示的结构：VH3-CH1-铰链-CH2-CH3[III]且第四多肽链包含如下式表示的结构：VL3-CL[IV]其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变域；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变域；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变域；VH1是第一免疫球蛋白重链可变域；VH2是第二免疫球蛋白重链可变域；VH3是第三免疫球蛋白重链可变域；CL是免疫球蛋白轻链恒定域；CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定域；CH2是免疫球蛋白CH2重链恒定域；CH3是免疫球蛋白CH3重链恒定域；铰链是连接CH1和CH2域的免疫球蛋白铰链区；且L1、L2、L3和L4是氨基酸接头；且其中所述式I的多肽和式II的多肽形成交叉轻链-重链对；其中：aVL1、VL2和VL3各自独立地包含如SEQIDNO:169、171和173任一项所示的可变域序列；或bVL1、VL2和VL3各自独立地包含轻链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:141-147、178和179；其中：aVH1、VH2和VH3各自独立地包含如SEQIDNO:168、170和172的任一项所示的可变域序列；或bVH1、VH2和VH3各自独立地包含重链互补决定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:129-137。26.权利要求24的结合蛋白，其中第二多肽链还包含连接至CH1的Fc区，所述Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域。27.权利要求24或权利要求25的结合蛋白，其中L1、L2、L3和L4的至少一个独立地长度为0个氨基酸。28.权利要求24或权利要求25的结合蛋白，其中L1、L2、L3和L4各自独立地长度为至少1个氨基酸。29.权利要求24或权利要求25的结合蛋白，其中L1、L2、L3和L4各自独立地包含选自由下列组成的组的序列：GGGGSGGGGSSEQIDNO:104、GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105、S、RT、TKGPSSEQIDNO:106、GQPKAAPSEQIDNO:175和GGSGSSGSGGSEQIDNO:148。30.权利要求24或权利要求25的结合蛋白，其中aL1包含序列GQPKAAPSEQIDNO:175，L2包含序列TKGPSSEQIDNO:106，L3包含序列S，且L4包含序列RT；bL1包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO:104，L2包含序列GGGGSGGGGSSEQIDNO:104，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；cL1包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO:148，L2包含序列GGSGSSGSGGSEQIDNO:148，L3长度为0个氨基酸，且L4长度为0个氨基酸；或dL1包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105，L2长度为0个氨基酸，L3包含序列GGGGSGGGGSGGGGSSEQIDNO:105，且L4长度为0个氨基酸。31.权利要求24或权利要求25的结合蛋白，其中：aVH1包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:131的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:142的氨基酸序列的CDR-L3；bVH1包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:47的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:131的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:142的氨基酸序列的CDR-L3；cVH1包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:131的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:142的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；dVH1包含：包含SEQIDNO:129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:131的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:142的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；eVH1包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:131的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:142的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；fVH1包含：包含SEQIDNO:129的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:130的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:131的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:141的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:178的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:142的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；gVH1包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；hVH1包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；iVH1包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；或jVH1包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；VL1包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3；VH2包含：包含SEQIDNO:135的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:136的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:137的氨基酸序列的CDR-H3；VL2包含：包含SEQIDNO:145的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:146的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:147的氨基酸序列的CDR-L3；VH3包含：包含SEQIDNO:132的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQIDNO:133的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQIDNO:134的氨基酸序列的CDR-H3；且VL3包含：包含SEQIDNO:143的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQIDNO:179的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQIDNO:144的氨基酸序列的CDR-L3。32.权利要求1、16和24任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第一Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V。33.权利要求1、16和24任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第一Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V；且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，其中所述第二Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W。34.权利要求1、16、24、32和33任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域，且其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区包含与人IgG1或IgG4的位置428和434对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为M428L和N434S。35.权利要求2、17和25任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；且其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V。36.权利要求2、17和25任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置349、366、368和407对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A和Y407V；且其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1或IgG4的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W。37.权利要求2、17、25、35和36任一项的结合蛋白，其中所述第二和第三多肽链二者的CH3域均包含与人IgG1或IgG4的位置428和434对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为M428L和N434S。38.权利要求1、16、24和32-34任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区为人IgG1或IgG4Fc区；且其中所述第一和第二Fc区中仅有一个包含与人IgG1或IgG4的位置435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为H435R和Y436F。39.权利要求2、17、25和35-37任一项的结合蛋白，其中所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG1或IgG4CH3域，且其中所述CH3域中仅一个包含与人IgG1或IgG4的位置435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为H435R和Y436F。40.权利要求1、16、24、32-34和38任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区是人IgG4Fc区；且其中第一和第二Fc区各自包含与人IgG4的位置228和409对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S228P和R409K。41.权利要求2、17、25、35-37和39任一项的结合蛋白，其中所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG4CH3域，且其中所述CH3域各自包含与人IgG4的位置228和409对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S228P和R409K。42.权利要求1、16、24、32-34、38和40任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区是人IgG4Fc区；且其中所述第一和第二Fc区各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为F234A和L235A。43.权利要求2、17、25、35-37、39和41任一项的结合蛋白，其中所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG4CH3域，且其中所述CH3域各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为F234A和L235A。44.权利要求1、16、24、32-34、38和40任一项的结合蛋白，其中所述第二多肽链还包含连接至CH1的第一Fc区，所述第一Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第三多肽链还包含连接至CH1的第二Fc区，所述第二Fc区包含免疫球蛋白铰链区和CH2及CH3免疫球蛋白重链恒定域；其中所述第一和第二Fc区是人IgG1Fc区；且其中所述第一和第二Fc区各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为L234A和L235A。45.权利要求2、17、25、35-37、39和41任一项的结合蛋白，其中所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG1CH3域，且其中所述CH3域各自包含与人IgG4的位置234和235对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为L234A和L235A。46.权利要求2、17、35-37、39、41、43和45任一项的结合蛋白，其中VH1和VL1形成特异性结合的人CD3的第一抗原结合位点，其中VH2和VL2形成特异性结合人CD28的第二抗原结合位点，且其中VH3和VL3形成特异性结合人肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。47.权利要求2、17、35-37、39、41、43和45任一项的结合蛋白，其中VH1和VL1形成特异性结合人CD28的第一抗原结合位点，其中VH2和VL2形成特异性结合人CD3的第二抗原结合位点，且其中VH3和VL3形成特异性结合人肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点。48.权利要求46或权利要求47的结合蛋白，其中所述第三抗原结合位点特异性结合选自下组的人肿瘤靶蛋白：CD19、CD20、CD38、Her2和LAMP1。49.权利要求46-48任一项的结合蛋白，其中所述特异性结合CD3的抗原结合位点包含：a包含SEQIDNO:152的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO:153的氨基酸序列的轻链可变域；或b包含SEQIDNO:154的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO:155的氨基酸序列的轻链可变域。50.权利要求46-49任一项的结合蛋白，其中所述特异性结合CD28的抗原结合位点包含：a包含SEQIDNO:160的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO:161的氨基酸序列的轻链可变域；或b包含SEQIDNO:162的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO:163的氨基酸序列的轻链可变域。51.权利要求46-50任一项的结合蛋白，其中所述特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点包含：a包含SEQIDNO:156的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO:157的氨基酸序列的轻链可变域；b包含SEQIDNO:158的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO:159的氨基酸序列的轻链可变域；c包含SEQIDNO:164的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO:165的氨基酸序列的轻链可变域；d包含SEQIDNO:150的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO:151的氨基酸序列的轻链可变域；或e包含SEQIDNO:166的氨基酸序列的重链可变域和包含SEQIDNO:167的氨基酸序列的轻链可变域。52.权利要求2、17、35-37、39、41、43和45任一项的结合蛋白，其中：aVH1和VL1形成特异性结合人TNFa的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL13的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL4的第三抗原结合位点；bVH1和VL1形成特异性结合人TNFa的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL4的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL13的第三抗原结合位点；cVH1和VL1形成特异性结合人IL4的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人TNFa的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL13的第三抗原结合位点；dVH1和VL1形成特异性结合人IL4的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL13的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人TNFa的第三抗原结合位点；eVH1和VL1形成特异性结合人IL13的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人IL4的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人TNFa的第三抗原结合位点；或fVH1和VL1形成特异性结合人IL13的第一抗原结合位点，VH2和VL2形成特异性结合人TNFa的第二抗原结合位点，且VH3和VL3形成特异性结合人IL4的第三抗原结合位点。53.权利要求52的结合蛋白，其中所述特异性结合人TNFa的抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含SEQIDNO:168的氨基酸序列，所述轻链可变域包含SEQIDNO:169的氨基酸序列。54.权利要求52或权利要求53的结合蛋白，其中所述特异性结合人IL4的抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含SEQIDNO:170的氨基酸序列，所述轻链可变域包含SEQIDNO:171的氨基酸序列。55.权利要求52-54任一项的结合蛋白，其中所述特异性结合人IL13的抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包含SEQIDNO:172的氨基酸序列，所述轻链可变域包含SEQIDNO:173的氨基酸序列。56.权利要求1-55任一项的结合蛋白，其中：a所述第一多肽链的CL域是人κCL域，且所述第四多肽链的CL域是人λCL域；或b所述第一多肽链的CL域是人λCL域，且所述第四多肽链的CL域是人κCL域。57.权利要求2、17、25、35-37、39、41和43-55任一项的结合蛋白，其中所述第一多肽链包含λCL域；其中所述第二多肽链的CH3域包含与人IgG1的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1的位置349、366、368、407、435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引,其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；且其中第四多肽链包含κCL域。58.一种结合蛋白，其包含第一多肽链、第二多肽链、第三多肽链和第四多肽链，其中：a所述第一多肽链包含SEQIDNO:4的氨基酸序列或与SEQIDNO:4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:3的氨基酸序列或与SEQIDNO:3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:1的氨基酸序列或与SEQIDNO:1的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:2的氨基酸序列或与SEQIDNO:2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；b所述第一多肽链包含SEQIDNO:10的氨基酸序列或与SEQIDNO:10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:9的氨基酸序列或与SEQIDNO:9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:1的氨基酸序列或与SEQIDNO:1的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:2的氨基酸序列或与SEQIDNO:2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；c所述第一多肽链包含SEQIDNO:4的氨基酸序列或与SEQIDNO:4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:3的氨基酸序列或与SEQIDNO:3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:13的氨基酸序列或与SEQIDNO:13的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:14的氨基酸序列或与SEQIDNO:14的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；d所述第一多肽链包含SEQIDNO:10的氨基酸序列或与SEQIDNO:10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:9的氨基酸序列或与SEQIDNO:9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:13的氨基酸序列或与SEQIDNO:13的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:14的氨基酸序列或与SEQIDNO:14的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；e所述第一多肽链包含SEQIDNO:4的氨基酸序列或与SEQIDNO:4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:3的氨基酸序列或与SEQIDNO:3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:17的氨基酸序列或与SEQIDNO:17的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:18的氨基酸序列或与SEQIDNO:18的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；f所述第一多肽链包含SEQIDNO:10的氨基酸序列或与SEQIDNO:10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:9的氨基酸序列或与SEQIDNO:9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:17的氨基酸序列或与SEQIDNO:17的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:18的氨基酸序列或与SEQIDNO:18的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；g所述第一多肽链包含SEQIDNO:4的氨基酸序列或与SEQIDNO:4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:3的氨基酸序列或与SEQIDNO:3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:21的氨基酸序列或与SEQIDNO:21的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:22的氨基酸序列或与SEQIDNO:22的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；h所述第一多肽链包含SEQIDNO:10的氨基酸序列或与SEQIDNO:10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:9的氨基酸序列或与SEQIDNO:9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:21的氨基酸序列或与SEQIDNO:21的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:22的氨基酸序列或与SEQIDNO:22的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；i所述第一多肽链包含SEQIDNO:63的氨基酸序列或与SEQIDNO:63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:62的氨基酸序列或与SEQIDNO:62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:60的氨基酸序列或与SEQIDNO:60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:61的氨基酸序列或与SEQIDNO:61的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；j所述第一多肽链包含SEQIDNO:69的氨基酸序列或与SEQIDNO:69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:68的氨基酸序列或与SEQIDNO:68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:60的氨基酸序列或与SEQIDNO:60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:61的氨基酸序列或与SEQIDNO:61的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；k所述第一多肽链包含SEQIDNO:69的氨基酸序列或与SEQIDNO:69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:68的氨基酸序列或与SEQIDNO:68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:60的氨基酸序列或与SEQIDNO:60的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:71的氨基酸序列或与SEQIDNO:71的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；l所述第一多肽链包含SEQIDNO:76的氨基酸序列或与SEQIDNO:76的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:75的氨基酸序列或与SEQIDNO:75的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:73的氨基酸序列或与SEQIDNO:73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:74的氨基酸序列或与SEQIDNO:74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；m所述第一多肽链包含SEQIDNO:82的氨基酸序列或与SEQIDNO:82的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:81的氨基酸序列或与SEQIDNO:81的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:73的氨基酸序列或与SEQIDNO:73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:74的氨基酸序列或与SEQIDNO:74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；n所述第一多肽链包含SEQIDNO:88的氨基酸序列或与SEQIDNO:88的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:87的氨基酸序列或与SEQIDNO:87的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:85的氨基酸序列或与SEQIDNO:85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:86的氨基酸序列或与SEQIDNO:86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；o所述第一多肽链包含SEQIDNO:94的氨基酸序列或与SEQIDNO:94的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:93的氨基酸序列或与SEQIDNO:93的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:85的氨基酸序列或与SEQIDNO:85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:86的氨基酸序列或与SEQIDNO:86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；p所述第一多肽链包含SEQIDNO:69的氨基酸序列或与SEQIDNO:69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:68的氨基酸序列或与SEQIDNO:68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:73的氨基酸序列或与SEQIDNO:73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:74的氨基酸序列或与SEQIDNO:74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；q所述第一多肽链包含SEQIDNO:69的氨基酸序列或与SEQIDNO:69的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:68的氨基酸序列或与SEQIDNO:68的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:85的氨基酸序列或与SEQIDNO:85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:86的氨基酸序列或与SEQIDNO:86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；r所述第一多肽链包含SEQIDNO:63的氨基酸序列或与SEQIDNO:63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:62的氨基酸序列或与SEQIDNO:62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:73的氨基酸序列或与SEQIDNO:73的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:74的氨基酸序列或与SEQIDNO:74的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；s所述第一多肽链包含SEQIDNO:63的氨基酸序列或与SEQIDNO:63的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:62的氨基酸序列或与SEQIDNO:62的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:85的氨基酸序列或与SEQIDNO:85的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:86的氨基酸序列或与SEQIDNO:86的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；t所述第一多肽链包含SEQIDNO:4的氨基酸序列或与SEQIDNO:4的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:3的氨基酸序列或与SEQIDNO:3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:114的氨基酸序列或与SEQIDNO:114的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:115的氨基酸序列或与SEQIDNO:115的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；或u所述第一多肽链包含SEQIDNO:10的氨基酸序列或与SEQIDNO:10的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第二多肽链包含SEQIDNO:9的氨基酸序列或与SEQIDNO:9的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；所述第三多肽链包含SEQIDNO:114的氨基酸序列或与SEQIDNO:114的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；且所述第四多肽链包含SEQIDNO:115的氨基酸序列或与SEQIDNO:115的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。59.一种分离的核酸分子，其包含编码权利要求1-58任一项的结合蛋白的核苷酸序列。60.一种表达载体，其包含权利要求59的核酸分子。61.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求59的核酸分子。62.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求60的表达载体。63.权利要求61或权利要求62的分离的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞或昆虫细胞。64.一种药物组合物，其包含权利要求1-58任一项的结合蛋白及药学上可接受的载剂。65.一种在患者中预防和或治疗癌症的方法，包括对所述患者施用治疗有效量的权利要求1-23和32-58任一项的至少一个结合蛋白或权利要求64的药物组合物。66.权利要求65的方法，其中所述结合蛋白包含一个特异性结合T细胞表面蛋白的抗原结合位点和另一个特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点。67.权利要求66的方法，其中所述结合蛋白包含特异性结合CD3的第一抗原结合位点，特异性结合CD28的第二抗原结合位点，和特异性结合选自下组的肿瘤靶蛋白第三抗原结合位点：CD19、CD20、CD38、Her2和LAMP1。68.权利要求65-67任一项的方法，其中所述至少一个结合蛋白与化疗剂共同施用。69.一种在患者中预防和或治疗炎性疾病或病症的方法，包括对所述患者施用治疗有效量的权利要求1-15、24-45和52-58任一项的至少一个结合蛋白或权利要求64的药物组合物。70.权利要求69的方法，其中所述结合蛋白包含3个抗原结合位点，其各自特异性结合选自下组的细胞因子靶蛋白：IL-4、IL-13和TNFa。71.权利要求69或权利要求70的方法，其中所述至少一个结合蛋白与抗炎剂共同施用。72.权利要求65-71任一项的方法，其中所述患者是人。73.权利要求65或权利要求69的方法，其中所述结合蛋白能够抑制一个或多个选自下组的靶蛋白的功能：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。74.权利要求1-23和32-58任一项的结合蛋白或权利要求64的组合物，其用于在患者中预防和或治疗癌症的用途。75.用于权利要求74的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白包含一个特异性结合T细胞表面蛋白的抗原结合位点和另一个特异性结合肿瘤靶蛋白的抗原结合位点。76.用于权利要求75的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白包含特异性结合CD3的第一抗原结合位点，特异性结合CD28的第二抗原结合位点，和特异性结合选自下组的肿瘤靶蛋白的第三抗原结合位点：CD19、CD20、CD38、Her2和LAMP1。77.用于权利要求74-76的任一项的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白与化疗剂共同施用。78.权利要求1-15、24-45和52-58任一项的结合蛋白或权利要求64的药物组合物，其用于在患者中预防和或治疗炎性疾病或病症的用途。79.用于权利要求78的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白包含3个抗原结合位点，其各自特异性结合选自下组的细胞因子靶蛋白：IL-4、IL-13和TNFa。80.用于权利要求78或权利要求79的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白与抗炎剂共同施用。81.用于权利要求74-80任一项的用途的结合蛋白或组合物，其中所述患者是人。82.用于权利要求74或权利要求78的用途的结合蛋白或组合物，其中所述结合蛋白能够抑制一个或多个选自下组的靶蛋白的功能：A2AR、APRIL、ATPD酶、BAFF、BAFFR、BCMA、BlyS、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、B7H5、B7H6、B7H7、B7RP1、B7-4、C3、C5、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL15、CCL17、CCL19、CCL20、CCL21、CCL24、CCL25、CCL26、CCR3、CCR4、CD3、CD19、CD20、CD23、CD24、CD27、CD28、CD38、CD39、CD40、CD70、CD80、CD86、CD122、CD137、CD137L、CD152、CD154、CD160、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CDH1、壳多糖酶、CLEC9、CLEC91、CRTH2、CSF-1、CSF-2、CSF-3、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCR3、DNGR-1、外核苷三磷酸盐二磷酸水解酶1、EGFR、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、Gi24、GITR、GITRL、GM-CSF、Her2、HHLA2、HMGB1、HVEM、ICOSLG、IDO、IFNα、IgE、IGF1R、IL2Rβ、IL1、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL4、IL4Ra、IL5、IL5R、IL6、IL7、IL7Ra、IL8、IL9、IL9R、IL10、rhIL10、IL12、IL13、IL13Ra1、IL13Ra2、IL15、IL17、IL17Rb、IL18、IL22、IL23、IL25、IL27、IL33、IL35、ITGB4、ITK、KIR、LAG3、LAMP1、瘦素、LPFS2、II类MHC、NCR3LG1、NKG2D、NTPD酶-1、OX40、OX40L、PD-1H、血小板受体、PROM1、S152、SISP1、SLC、SPG64、ST2、STEAP2、Syk激酶、TACI、TDO、T14、TIGIT、TIM3、TLR、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、TMEF1、TNFa、TNFRSF7、Tp55、TREM1、TSLP、TSLPR、TWEAK、VEGF、VISTA、Vstm3、WUCAM和XCR1。83.一种纯化通过宿主细胞产生的结合蛋白的方法，包括：a在宿主细胞中产生权利要求2、17、25、35-37、41、43、45和46-55任一项的结合蛋白，其中第二多肽链的CH3域和所述第三多肽链的CH3域中仅有一个包含与人IgG1或IgG4的位置435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引，其中所述氨基酸取代是H435R和Y436F；b使a中产生的结合蛋白与蛋白A接触；和c在适于从包含0或2个CH3域的结合蛋白分离出所述结合蛋白的条件下从蛋白A洗脱所述结合蛋白，所述CH3域包含其为H435R和Y436F的氨基酸取代。84.权利要求83的方法，其中所述第一多肽链的CL域是人κCL域，且所述第四多肽链的CL域是人λCL域；或所述第一多肽链的CL域是人λCL域，且所述第四多肽链的CL域是人κCL域，且所述方法进一步包括：d使c中洗脱的结合蛋白与κ轻链亲和介质接触；和e在适于从仅包含λCL域的结合蛋白分离出所述结合蛋白的条件下从所述κ轻链亲和介质洗脱结合蛋白。85.权利要求84的方法，其在e之后还包括：f使e中洗脱的结合蛋白与λ轻链亲和介质接触；和g在适于从仅包含κCL域的结合蛋白分离出所述结合蛋白的条件下从所述λ轻链亲和介质洗脱结合蛋白。86.权利要求83的方法，其中所述第一多肽链的CL域是人κCL域，且所述第四多肽链的CL域是人λCL域；或所述第一多肽链的CL域是人λCL域，且所述第四多肽链的CL域是人κCL域，且所述方法进一步包括：d使c中洗脱的结合蛋白与λ轻链亲和介质接触；和e在适于从仅包含κCL域的结合蛋白分离出所述结合蛋白的条件下从所述λ轻链亲和介质洗脱结合蛋白。87.权利要求86的方法，在e之后进一步包括：f使e中洗脱的结合蛋白与κ轻链亲和介质接触；和g在适于从仅包含λCL域的结合蛋白分离出所述结合蛋白的条件下从所述κ轻链亲和介质洗脱结合蛋白。88.权利要求83-87任一项的方法，其中所述第一多肽链包含λCL域；其中所述第二多肽链的CH3域包含与人IgG1的位置354和366对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引,其中所述氨基酸取代为S354C和T366W；其中所述第三多肽链的CH3域包含与人IgG1的位置349、366、368、407、435和436对应的位置处的氨基酸取代，其根据EU索引,其中所述氨基酸取代为Y349C、T366S、L368A、Y407V、H435R和Y436F；且其中第四多肽链包含κCL域。89.权利要求83-88任一项的方法，其中在c和e的一项或多项中使用疏水作用色谱HIC来检测所述结合蛋白。90.权利要求83-89任一项的方法，其中所述第二和第三多肽链的CH3域是人IgG1或IgG4CH3域。

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