申请/专利权人：山西大学

申请日：2023-12-21

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117737127A

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/62;A01K67/0275;A01K67/0276

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明属于动物模型构建和临床基因功能检测分析技术领域，具体涉及一种检测KIF7遗传变异潜在致病性的方法。本发明在kif7突变遗传背景的斑马鱼基因组中插入en2a‑eGFPDNA片段，使突变体转基因斑马鱼的中间快肌纤维可以特异性高表达en2a‑eGFP融合蛋白；通过分别注射hKIF7和mu‑hKIF7的mRNA，量化分析中快肌纤维细胞数量，统计hKIF7和各遗传变异体的回复效率值，按不同类型致病阈值判定临床不明意义突变的致病性。本发明能对KIF7意义不明的遗传变异体进行快速准确的评价，有助于初极纤毛相关信号通路的机制研究，为相关疾病的诊断治疗提供了更多的科学依据。

主权项：1.一种检测KIF7遗传变异潜在致病性的方法，其特征在于，具体步骤如下：1获得斑马鱼驱动蛋白kif7基因序列，如SEQIDNO.1所示；针对其第一个外显子设计基因打靶引导RNA，构建并筛选获得斑马鱼kif7基因敲除纯合突变体；2通过Gibson组装的方法构建minitol2-en2a-eGFP转基因表达载体，其序列如SEQIDNO.6所示；建立基因组中携带en2a-eGFP的稳定转基因品系Tgen2a:eGFP；3Tg品系与步骤1获得的kif7基因敲除纯合突变体经两次杂交，筛选获得Tgen2a:eGFP；kif7--实验材料；4应用Gibson组装的方法建立人KIF7融合eGFP的表达载体pCS2+-hKIF7-GFP；根据数据库资源筛选hKIF7已知致病突变和临床意义不明确的错义突变，利用定点突变的方法构建突变hKIF7融合eGFP的表达载体pCS2+-mu-hKIF7-GFP；5将步骤4中获得的hKIF7和mu-hKIF7表达载体，经体外转录获得其mRNA，将这些mRNA分别导入步骤3所获得的Tgen2a:eGFP；kif7--斑马鱼品系，根据量化MFF数量反映回复效率，判定临床意义不明KIF7错义突变的致病性。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山西大学 一种检测KIF7遗传变异潜在致病性的方法

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