申请/专利权人：深圳华瑞模式生物科技有限公司

申请日：2023-12-26

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN117467704B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;A01K67/027;C12N15/12

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2024.02.20#实质审查的生效;2024.01.30#公开

摘要：本发明涉及构建APOD条件敲入小鼠模型的方法，属于动物模型构建技术领域。为解决现有研究APOD的小鼠模型不能用于准确的研究APOD在某一组织的功能的问题，本发明提供了构建APOD条件敲入小鼠模型的方法，通过CRISPRCas9技术在小鼠的Rosa26基因位点定点敲入CAG‑LSL‑Apod‑Wpre‑pA表达框。本发明实现了高效率基因敲入，构建了能够稳定表达APOD基因的小鼠模型。将其用于研究APOD在某一组织中的功能时，可以准确调控APOD的表达，提高了APOD功能研究结果的可靠性。

主权项：1.构建APOD条件敲入小鼠模型的方法，其特征在于，通过CRISPRCas9技术在小鼠的Rosa26基因位点定点敲入CAG-LSL-Apod-Wpre-pA表达框；具体包括如下步骤：步骤一、通过体外转录的方式构建小鼠Rosa26基因位点的Cas9mRNA和gRNA，所述gRNA的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；步骤二、通过In-Fusioncloning的方法构建同源重组载体，所述同源重组载体包括5’同源臂、CAG-LSL-Apod-Wpre-pA和3’同源臂；所述5’同源臂的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，所述CAG-LSL-Apod-Wpre-pA的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示，所述3’同源臂的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；步骤三、将步骤一所得Cas9mRNA、gRNA和步骤二所得同源重组载体共同注射到C57BL6J小鼠受精卵中，获得F0代小鼠；步骤四、对F0代小鼠进行基因型鉴定，将阳性F0代小鼠与野生型C57BL6J小鼠交配得到F1代小鼠，对F1代小鼠进行基因型鉴定，阳性F1代小鼠即为所述小鼠模型。

全文数据：

权利要求：

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