申请/专利权人：江苏省淡水水产研究所

申请日：2020-11-11

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN112342215B

主分类号：C12N15/113

分类号：C12N15/113;C12N15/85;C12N15/89;C12N15/55;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2021.03.02#实质审查的生效;2021.02.09#公开

摘要：本发明公开了一种靶向敲除斑点叉尾鮰mstna基因的sgRNA序列及其筛选方法，通过设计CRISPR序列，制备包含目标基因的PCR扩增产物并将其与载体连接，再通过体外转录方法制备sgRNA，将所述sgRNA、所述包含目的基因的质粒和Cas9蛋白显微注射斑马鱼受精卵，以斑马鱼受精卵作为反应器筛选靶向敲除斑点叉尾鮰mstna基因的sgRNA序列。本发明首次以斑马鱼受精卵作为反应器筛选出编辑斑点叉尾鮰mstna基因的sgRNA序列，特异性强且敲除效率高，敲除流程简单快捷，为后续解析斑点叉尾鮰mstna基因功能提供动物材料。

主权项：1.用于靶向敲除斑点叉尾鮰mstna基因的核苷酸，其特征在于：包括，如序列SEQIDNO.4或SEQIDNO.8所示的CRISPR序列；如序列SEQIDNO.24或SEQIDNO.28中所示的sgRNA；扩增引物对如序列SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示；用体外转录方法制备如SEQIDNO.24所示的sgRNA时，使用的正向引物序列如SEQIDNO.15所示，反向引物序列如SEQIDNO.20所示；或制备如SEQIDNO.28所示的sgRNA时，使用的正向引物序列如SEQIDNO.19所示，反向引物序列如SEQIDNO.20所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏省淡水水产研究所 一种靶向敲除斑点叉尾鮰mstna基因的sgRNA序列及其筛选方法

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