申请/专利权人：逢时(青岛)海洋科技有限公司

申请日：2023-12-21

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN117448408B

主分类号：C12P21/06

分类号：C12P21/06;C07K1/34;C07K1/18

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.29#授权;2024.02.13#实质审查的生效;2024.01.26#公开

摘要：本申请公开了一种抑制血小板凝集的磷虾多肽及其制备方法，属于海洋生物活性物质提取技术领域。所述制备方法包括以下步骤：S1、先将脱脂南极磷虾粉加入纯化水搅拌均匀，然后加入蛋白酶进行一次酶解，之后灭酶，得到酶解液；S2、将上述酶解液离心取上清液，然后进行过滤、超滤，得到滤出液，之后将滤出液进行浓缩，得到浓缩液；S3、将上述浓缩液作为DEAE上样液进行离子交换层析，得到洗脱溶液，然后进行超滤脱盐、冷冻干燥，得到冻干品；S4、将上述冻干品加入羧肽酶进行二次酶解，然后超滤除酶、超滤除氟脱盐、冷冻干燥，得到磷虾多肽。本发明制得的磷虾多肽可有效抑制血小板的凝集。

主权项：1.一种抑制血小板凝集的磷虾多肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：S1、先将脱脂南极磷虾粉加入纯化水搅拌均匀，然后加入蛋白酶进行一次酶解，之后灭酶，得到酶解液；S2、将上述酶解液离心取上清液，然后进行过滤、超滤，得到滤出液，之后将滤出液进行浓缩，得到浓缩液；S3、将上述浓缩液作为DEAE上样液进行离子交换层析，得到洗脱溶液，然后进行超滤脱盐、冷冻干燥，得到冻干品；S4、将上述冻干品加入羧肽酶进行二次酶解，然后超滤除酶、超滤除氟脱盐、冷冻干燥，得到磷虾多肽；所述步骤S1中一次酶解的过程为：先用摩尔浓度为1molL的氢氧化钠调节pH至7.1-8.5，然后在温度为40℃、搅拌转速600-1000rpm的条件下酶解2-3h，所述蛋白酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和Alcalase蛋白酶；灭酶的过程为：用摩尔浓度为1molL盐酸调节pH至3.5-4.5，升温至90-100℃后搅拌25-35min实现灭酶；所述步骤S2中离心的过程为：待所述酶解液的温度降至40℃以下后，用摩尔浓度为1molL氢氧化钠调节pH至10-10.5，然后在4000rpm的条件下离心10min，取上清液；所述步骤S2中过滤前用摩尔浓度为1molL盐酸调节pH至7.0-7.5，然后经滤布过滤得到过滤液；所述过滤液采用20-50kd的超滤膜超滤，超滤过程中不断添加摩尔浓度为0.05molL的Tris-盐酸溶液、pH7.2超滤缓冲液至所述滤出液280纳米吸光度低于0.05时结束超滤，收集滤出液；所述滤出液经1-5kd的超滤膜浓缩，收集超滤浓缩液，调节所述超滤浓缩液的电导率低于20ms；所述步骤S3中离子交换层析的层析介质为DEAESephadexA-50，平衡缓冲液为摩尔浓度为0.05molL的Tris-盐酸溶液；洗涤缓冲液为摩尔浓度为0.05molL的Tris-盐酸溶液和摩尔浓度为0.1molL的氯化钠溶液；洗脱缓冲液为摩尔浓度为0.05molL的Tris-盐酸溶液和摩尔浓度为0.3molL的氯化钠溶液；所述步骤S4中二次酶解前加入摩尔浓度为0.05molL的碳酸铵溶液，调节pH为8.0-8.5，然后加入0.2-0.5g羧肽酶A，在35-40℃的水浴锅中二次酶解20-40min，之后用15-40kd的超滤膜超滤，分多次加入摩尔浓度为0.5molL的氯化钠溶液，收集滤出溶液，再用1-5kd的超滤膜浓缩，浓缩过程中不断添加纯化水脱盐，最后冷冻干燥制得磷虾多肽。

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