申请/专利权人：中山大学

申请日：2023-12-05

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN117363659B

主分类号：C12N15/89

分类号：C12N15/89;C12N5/076;G01N1/30;G01N33/569;G01N33/58;C12Q1/6888;C12N15/11;A01K67/0271

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.29#授权;2024.01.26#实质审查的生效;2024.01.09#公开

摘要：本发明公开了一种中华乌塘鳢生殖细胞异种移植及其嵌合体精准鉴定的方法，建立了中华乌塘鳢生殖细胞活体荧光标记、受体云斑尖塘鳢仔鱼生殖细胞移植的技术方法，填补了现有技术的空白；再者该鉴定方法能高灵敏度地鉴定出受体鱼性腺中是否存在定植的中华乌塘鳢生殖细胞。本发明还公开一种鉴定上述嵌合体的引物，其具有种属特异性，能精准鉴定中华乌塘鳢精巢生殖细胞嵌合体。

主权项：1.一种中华乌塘鳢生殖细胞异种移植方法，其特征是，包括以下步骤：（1）选取生殖嵴尚未闭合的云斑尖塘鳢仔鱼作为受体，利用免疫荧光法确定受体的生殖嵴位置；所述免疫荧光法为：将云斑尖塘鳢受体用4%多聚甲醛固定，经过磷酸缓冲液清洗3次；然后用体积分数为5%的TritonX-100透化处理5min，磷酸缓冲液清洗3次；加入2%羊血清室温封闭1h，加入vasa抗体孵育过夜；用0.2%Tween20清洗3次，荧光蛋白标记二抗室温孵育1h，PBS清洗3次；最后利用荧光显微镜成像观察生殖细胞，从而确定云斑尖塘鳢受体生殖嵴所处位置；（2）获取作为供体的中华乌塘鳢的精巢生殖细胞；然后利用荧光染料处理所述精巢生殖细胞，得到荧光蛋白标记的精巢生殖细胞；（3）将荧光蛋白标记的精巢生殖细胞显微注射到受体的生殖嵴，即将荧光蛋白标记的精巢生殖细胞移植到云斑尖塘鳢仔鱼中，形成中华乌塘鳢精巢生殖细胞的嵌合体。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中山大学 一种中华乌塘鳢生殖细胞异种移植及其嵌合体精准鉴定的方法

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