申请/专利权人:南京健友生化制药股份有限公司
申请日:2023-12-29
公开(公告)日:2024-04-02
公开(公告)号:CN117802088A
主分类号:C12N15/10
分类号:C12N15/10;C12N15/63
优先权:
专利状态码:在审-实质审查的生效
法律状态:2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开
摘要:本发明公开了一种提高自复制RNA体外转录产物的产量和质量的方法,其包括如下步骤:(1)IVT反应模板的准备:采用线性化模板作为IVT反应模板;(2)IVT反应:在反应容器中分别加入稀释用水、体外转录缓冲液、核苷三磷酸、镁盐、RNA抑制剂、无机焦磷酸酶、T7RNA聚合酶和线性化模板,混匀后,进行孵育;(3)DNA模板消化:IVT反应完后,加入脱氧核糖核酸酶I,震荡混合后,进行孵育以消化DNA模板;(4)IVT样品纯化:采用氯化锂或者超滤离心管对IVT反应后的样品进行纯化。本发明的方法合成的saRNA产量高、完整度好,特别适合于碱基数大于8000nt的自复制RNA的体外转录反应过程。
主权项:1.一种提高自复制RNA体外转录产物的产量和质量的方法,其特征在于包括如下步骤:1IVT反应模板的准备:采用线性化质粒作为IVT反应模板;2IVT反应:在反应容器中分别加入稀释用水、体外转录缓冲液、核苷三磷酸、镁盐、RNA抑制剂、无机焦磷酸酶、T7RNA聚合酶和线性化模板,混匀后,进行孵育;3DNA模板消化:IVT反应完后,加入脱氧核糖核酸酶I,震荡混合后,进行孵育以消化DNA模板;4IVT样品纯化:采用氯化锂或者超滤离心管对IVT反应后的样品进行纯化。
全文数据:
权利要求:
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