申请/专利权人：沈阳农业大学

申请日：2024-01-25

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN117821497A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C07K14/415;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/74;A01H4/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.23#实质审查的生效;2024.04.05#公开

摘要：本发明涉及植物遗传转化技术领域，特别是涉及一种西伯利亚杏遗传转化方法的建立。本发明以西伯利亚杏茎段为外植体，通过对茎段增殖培养基的优化，建立了高效的再生体系，MS培养基添加吲哚‑3‑丁酸有利于腋芽的诱导和伸长。MS培养基添加6‑BA、TDZ和NAA最适合茎段的增殖。在再生体系的基础上，建立了高效的西伯利亚杏茎段遗传转化体系，并分别用两种不同的植物表达载体进行验证。将茎段用根癌农杆菌感染液OD600＝0.6侵染后共培养2d后，3～4个月成功获得西伯利亚杏转基因植株。西伯利亚杏遗传转化体系的建立，对于优良基因功能的鉴定，分子机制的研究及培育综合品质良好的西伯利亚杏种质具有重要意义。

主权项：1.一种西伯利亚杏遗传转化方法的建立，其特征在于，包括以下步骤：1将一年生西伯利亚杏的无菌茎段置于腋芽诱导培养基上进行腋芽诱导培养，得到腋芽；所述腋芽诱导培养基包括：MS培养基+0.2～0.4mgL吲哚-3-丁酸；2将所述步骤1得到的腋芽处理成带有1个芽点的茎段，置于不定芽诱导培养基上进行不定芽诱导培养，得到不定芽；所述不定芽诱导培养基包括：MS+0.1mgL萘乙酸+0.8mgL6-苄氨基腺嘌呤+0.2mgL噻苯隆；3将所述步骤2得到的不定芽的单芽置于生根培养基上进行生根培养，得到再生植株；4将所述步骤3得到的再生植株在生根培养基中培养3周后，将茎段在增殖分化培养基中进行预培养3d，得到预培养茎段；5将所述步骤4得到的预培养茎段浸没在根癌农杆菌悬浮液中20min，得到侵染茎段；所述根癌农杆菌悬浮液的OD600值为0.6；所述根癌农杆菌悬浮液中根癌农杆菌含有pRI101-GFP质粒和pCAMBIA-1301-GUS质粒；6将所述步骤5得到的侵染茎段置于增殖分化培养基上进行共培养2d，得到共培养物；7将所述步骤6得到的共培养物置于含有300mgL头孢霉素Cef和20mgL卡那霉素的增殖分化培养基上培养，实现西伯利亚杏遗传转化。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 沈阳农业大学 一种西伯利亚杏遗传转化方法的建立

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