申请/专利权人：浙江大学长三角智慧绿洲创新中心

申请日：2023-11-27

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117871859A

主分类号：G01N33/68

分类号：G01N33/68;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/34;G01N30/72

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明公开了一种表征鲜牛乳脂肪球膜蛋白位点特异性N‑糖基化的方法，所述方法包括：采集鲜牛乳；通过多次超声处理以及超高速离心从鲜牛乳中提取乳脂肪球膜蛋白；对乳脂肪球膜蛋白进行消化，得到胰蛋白酶肽颗粒；将胰蛋白酶肽颗粒溶于体积浓度为65‑80％的乙腈溶液中，通过亲水相互作用色谱墨盒富集N‑糖肽，并对N‑糖肽进行梯度洗脱；对N‑糖肽采用液相色谱串联质谱进行分析，得到质谱数据；对质谱数据进行检索对比，完成N‑糖肽的定性分析；在萃取离子色谱模式下对过滤后的N‑糖肽进行定量分析；本方法能够构建牛乳脂肪球膜蛋白位点特异性N‑糖基化指纹图谱，样本用量少，方法重复性好、分析灵敏度高，有助于进一步探究乳脂肪球膜糖蛋白生物功能。

主权项：1.一种表征鲜牛乳脂肪球膜蛋白位点特异性N-糖基化的方法，其特征在于，所述方法包括：采集鲜牛乳；通过多次超声处理以及超高速离心从鲜牛乳中提取乳脂肪球膜蛋白；对乳脂肪球膜蛋白进行消化，得到胰蛋白酶肽颗粒；将胰蛋白酶肽颗粒溶于体积浓度为65-80％的乙腈溶液中，通过亲水相互作用色谱墨盒富集N-糖肽，并对N-糖肽进行梯度洗脱；其中，梯度洗脱程序为：梯度加入70％ACN0.5％TFA、65％ACN0.5％TFA和60％TFA0.5％TFA对N-糖肽进行洗脱；对N-糖肽采用液相色谱串联质谱进行分析，得到质谱数据；其中，流动相A为0.1-0.3％甲酸溶液，流动相B由65-80％乙腈溶液和0.1-0.2％甲酸溶液组成；液相洗脱程序如下：4％10％流动相B，0min5min；10％22％流动相B，5min65min；22％40％流动相B，65min100min；40％95％流动相B，100min105min；95％流动相B，105114.5min；95％4％流动相B保持0.5min随后使用95％流动相A重平衡5min；对质谱数据进行检索对比，完成N-糖肽的定性分析；在萃取离子色谱模式下对过滤后的N-糖肽进行定量分析；对牛乳脂肪球膜N-糖蛋白进行GO分析，确定富集到的生物过程、细胞成分以及分子功能。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学长三角智慧绿洲创新中心 一种表征鲜牛乳脂肪球膜蛋白位点特异性N-糖基化的方法

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