申请/专利权人：山东银丰生命科学研究院;银丰生物工程集团有限公司;银丰医疗器械(山东)有限公司

申请日：2023-12-27

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117866893A

主分类号：C12N5/0783

分类号：C12N5/0783

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明公开了一种NK细胞的体外扩增方法：使用活化培养基重悬单个核细胞，加入到CD16和NKp46抗体包被的细胞培养板中，培养21天以上，第1～4天使用活化培养基进行培养，第5天起使用扩增培养基进行补液培养；所述活化培养基是在NK细胞扩增无血清培养基的基础上添加自体血浆、IL2、IL15、IL18、IL21和IL27得到的；所述扩增培养基是在NK细胞扩增无血清培养基的基础上添加自体血浆和IL2得到的。本发明利用CD16和NKp46抗体结合包被细胞培养板，同时添加IL2、IL15等五种细胞因子协同刺激NK细胞，诱导NK细胞的分化与成熟，获得的NK细胞纯度高，杀伤性能高，具有很高的临床应用价值。

主权项：1.一种NK细胞的体外扩增方法，其特征在于：使用活化培养基重悬单个核细胞，调节细胞密度为1.0×106～2.0×106个mL，加入到CD16和NKp46抗体包被的细胞培养板中，置于二氧化碳培养箱中培养21天以上，其中，第1～4天使用活化培养基进行培养，第5天起使用扩增培养基进行补液培养，之后每2天补液一次，补液的同时调节NK细胞密度为1.0×106～1.2×106个mL；所述活化培养基，是在NK细胞扩增无血清培养基的基础上添加自体血浆、IL2、IL15、IL18、IL21和IL27得到的，其中，自体血浆的添加量为8％～12％，IL2、IL15、IL18、IL21和IL27的终浓度分别为45～55UmL、45～55ngmL、90～110ngmL、4～6ngmL和4～6ngmL；所述扩增培养基，是在NK细胞扩增无血清培养基的基础上添加自体血浆和IL2得到的，其中，自体血浆的添加量为8％～12％，IL2的终浓度为45～55UmL。

全文数据：

权利要求：

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