申请/专利权人：浙江理工大学

申请日：2022-03-07

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN114705739B

主分类号：G01N27/327

分类号：G01N27/327;G01N27/48;G01N33/68

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2022.07.22#实质审查的生效;2022.07.05#公开

摘要：本发明涉及电容传感，本发明公开了一种基于RGO‑Ag‑ZnO‑PPy的丝素蛋白检测用电容型免疫传感器。本发明首先进行丝素蛋白的提取和CdSeQDs的合成，并使CdSeQDs‑PDA上负载Ab2，进行RGO‑Ag‑ZnO‑PPy复合膜的制备，然后通过逐层自组装工艺，制备得到丝素蛋白检测用电容型免疫传感器。本发明电容式生物传感器可以由生物识别表面和目标分析物之间的亲和相互作用而调节电容的变化，从而产生高灵敏度和选择性。

主权项：1.一种基于RGO-Ag-ZnO-PPy的丝素蛋白检测用电容型免疫传感器，其特征在于制备方法包括以下步骤：步骤1：丝素蛋白的提取：将蚕茧先在Na2CO3水溶液中煮沸，再冲洗去除丝胶蛋白；将所得的丝素蛋白纤维在干燥后溶解于氯化钙混合溶液中；经透析、离心、冷冻干燥和研磨后，得到丝素蛋白；步骤2：化学气相沉积ZnO纳米线：将ZnO粉和碳粉混合物放置在石英管中心反应区，在反应区前方放置涂有Au催化剂的硅片；加热反应，反应期间通以氩气和氧气的混合气作为载气；反应完成后，将ZnO纳米线分离，添加至异丙醇中，超声分散；步骤3：氧化石墨烯的制备：将石墨纳米片加入到铬酸洗液中超声分散；然后40-50℃下机械搅拌，倒入水，抽滤；洗涤，烘烤，冷至室温后，配制成氧化石墨烯浆料；步骤4：RGO的制备：将上述氧化石墨烯浆料和氢碘酸的均匀混合物加热反应；洗涤后冷藏备用；步骤5：功能层RGO-Ag-ZnO膜电极组装：将聚偏二氟乙烯多孔滤膜平铺；在膜表面依次涂覆步骤4所得RGO、Ag纳米线的异丙醇溶液、步骤2所得ZnO纳米线分散液；真空干燥；将所得RGO-Ag-ZnO膜剥离；干燥，裁切，获得功能层RGO-Ag-ZnO膜电极；步骤6：ITO导电玻璃集流器预处理：取ITO导电玻璃电极，超声清洗，干燥，将步骤5所得功能层RGO-Ag-ZnO膜电极粘于ITO导电玻璃电极的表面；步骤7：电化学沉积聚吡咯：配制吡咯单体和KCl的混合溶液作为电解液；使用电化学工作站CHI660E，以铂丝电极为对电极、银氯化银电极为参比电极，用恒电流法在步骤6所得电极上电化学沉积聚吡咯，制得RGO-Ag-ZnO-PPy复合材料；步骤8：核壳结构CdSeQDs-PDA@Ab2的制备：取巯基乙酸和水混合均匀，再加入氯化镉水溶液并搅拌均匀，调节pH为9.5-10.5，然后通入氮气以除去溶液中的氧气，接着继续加入NaHSe溶液并搅拌均匀，然后将所得反应前驱液在氮气保护下加热反应，最后将所得亮黄色CdSeQDs溶液冷却至室温，离心清洗，加入聚多巴多胺，于30-35℃下充分结合，冲洗，加入到含兔抗鼠抗丝素蛋白抗体Ab2的BSA溶液中，孵育，冲洗，得到CdSeQDs-PDA@Ab2，保存备用；步骤9：活化ITO-RGO-Ag-ZnO-PPy膜电极：采用滴涂法在干燥后的步骤7所得RGO-Ag-ZnO-PPy复合材料表面滴加MPA水溶液，孵育形成饱和MPA单层，用PBS缓冲液洗净，将所得修饰有MPA的电极浸泡在MES缓冲液中孵育，将MPA的末端羧基转化为活性NHS酯，用PBS缓冲液洗净，得到活化的ITO-RGO-Ag-ZnO-PPy膜电极；步骤10：逐层自组装电容型免疫传感器：向活化的ITO-RGO-Ag-ZnO-PPy膜电极表面滴加步骤1所得丝素蛋白的CB液，使其端氨基与活化后的羧基结合，用PBS缓冲液彻底清洗去除未结合的抗原后，再用BSA溶液将电极封闭，以封闭电极表面可能存在的非特异性结合位点，取出后用PBS缓冲液洗净，继续滴加鼠抗丝素蛋白抗体Ab1溶液，置于25-35℃下50-70min，用PBS缓冲液洗净未固定的鼠抗丝素蛋白抗体Ab1，最后滴加步骤8所得CdSeQDs-PDA@Ab2，置于25-35℃中50-70min，用PBS缓冲液洗净未固定的CdSeQDs-PDA@Ab2，即得到丝素蛋白检测用电容型免疫传感器。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江理工大学 一种基于RGO-Ag-ZnO-PPy的丝素蛋白检测用电容型免疫传感器

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