申请/专利权人：北京安百胜生物科技有限公司;江苏瑞科生物技术股份有限公司

申请日：2013-04-26

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN110484554B

主分类号：C12N15/81

分类号：C12N15/81;C12N1/19;C12N15/37;C07K14/025;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/78

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2021.07.09#著录事项变更;2019.12.17#实质审查的生效;2019.11.22#公开

摘要：本发明涉及用汉逊酵母表达系统产生HPV52L1蛋白的方法。具体地，本发明公开了产生表达HPV52L1蛋白的重组汉逊酵母细胞的方法以及由所述方法产生的重组汉逊酵母细胞。本发明还公开了利用所述重组汉逊酵母细胞产生HPV52L1蛋白的方法以及所产生的HPV52L1蛋白在制备预防性疫苗中的用途。

主权项：1.一种产生HPV52L1蛋白的方法，包括以下步骤：i产生表达人乳头瘤病毒52型L1HPV52L1蛋白的重组汉逊酵母细胞；ii在适于所述HPV52L1蛋白表达的条件下培养所述重组汉逊酵母细胞；和iii从培养物中回收并纯化所述HPV52L1蛋白，其中步骤i包含以下步骤：a通过将包含编码HPV52L1蛋白的核苷酸序列的外源多核苷酸插入序列示于SEQIDNO:9的载体来构建表达构建体；b用步骤a中获得的表达构建体转化汉逊酵母细胞；和c对步骤b中获得的汉逊酵母细胞首先进行Zeocin抗性筛选，然后进行G418抗性筛选，获得含有拷贝数大于60的所述外源多核苷酸的重组汉逊酵母细胞；其中步骤b中的所述汉逊酵母细胞是ATCC26012汉逊酵母细胞，其中Zeocin的浓度是0.5mgml，G418的浓度是16mgml；其中步骤iii中首先用层析介质POROSXS进行初步纯化，随后利用层析介质Macro-Prep陶瓷羟基磷灰石进一步纯化，其中所述编码HPV52L1蛋白的核苷酸序列示于SEQIDNO:2。

全文数据：

权利要求：

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