申请/专利权人：北京优吉科技有限公司

申请日：2020-05-18

公开（公告）日：2020-09-15

公开（公告）号：CN111662969A

主分类号：C12Q1/6869(20180101)

分类号：C12Q1/6869(20180101);C12Q1/6806(20180101);C40B50/06(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的视为撤回

法律状态：2023.01.13#发明专利申请公布后的视为撤回;2020.10.13#实质审查的生效;2020.09.15#公开

摘要：本发明涉及生物医药技术领域，且公开了一种基因转录区多变区测序方法，包括以下步骤：步骤S1：样品检测；步骤S2：文库构建；步骤S3：mRNA的纯化；步骤S4：cDNA合成；步骤S5：末端修复和接头连接；步骤S6：目标转录本处理；步骤S7：配制反应体系；步骤S8：PCR反应及产物回收：配制PCR反应体系，并设置反应程序，对连接产物进行扩增；步骤S9：文库检测：使用检测文库的插入片段范围，同时对文库进行浓度的定量；步骤S10：精准测序。本发明设计的基因转录区多变区测序方法通过新一代高通量测序，大幅度缩减测序数据量，能够全面快速地获得某一物种特定组织或器官在特定状态下的目标转录本序列的频率信息，适用不同建库试剂盒。

主权项：1.一种基因转录区多变区测序方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1：样品检测：检测totalRNA的浓度、RIN值、28S18S和片段大小；步骤S2：文库构建；步骤S3：mRNA的纯化：取一定量totalRNA样品，适温变性打开totalRNA的二级结构，并进行纯化，得到mRNA；步骤S4：cDNA合成：向步骤S3中所述的mRNA中加入提前配制的一链合成反应体系，在PCR仪上按相应程序合成一链cDNA，配制二链合成反应体系，适温反应一定时间，合成二链cDNA；步骤S5：末端修复和接头连接：配制反应体系，适温反应一定时间，修复双链cDNA末端，配制接头连接反应体系，适温反应一定时间，使接头与cDNA连接；步骤S6：目标转录本处理：在步骤S5中所述得到的带有测序文库接头的序列进行扩增；扩增时使用设计的引物A和3’端测序文库接头进行。步骤S7：配制反应体系，适温反应一定时间，配制接头连接反应体系，适温反应一定时间，使5’端测序文库接头与S7中的扩增产物链接；步骤S8：PCR反应及产物回收：配制PCR反应体系，并设置反应程序，对连接产物进行扩增；步骤S9：文库检测：使用检测文库的插入片段范围，同时对文库进行浓度的定量；步骤S10：精准测序：富集好转录本多变区的大量序列，进行精准测序。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京优吉科技有限公司 一种基因转录区多变区测序方法

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