申请/专利权人：武汉爱博泰克生物科技有限公司

申请日：2020-11-30

公开（公告）日：2021-03-16

公开（公告）号：CN112501170A

主分类号：C12N15/113(20100101)

分类号：C12N15/113(20100101);C12N15/85(20060101);C12N15/66(20060101);C12N5/10(20060101);C12R1/91(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2022.11.18#发明专利申请公布后的驳回;2021.04.02#实质审查的生效;2021.03.16#公开

摘要：本发明涉及一种构建MLH1基因敲除细胞系的方法，涉及基因工程技术领域。所述方法是采用CRISPRCas9系统来制备MLH1基因敲除细胞系，首先针对MLH1基因设计两个sgRNA序列，利用分子克隆技术构建重组质粒；然后将重组质粒转染至HeLa细胞，通过PCR验证sgRNA的活性后，进行嘌呤霉素药物筛选和单克隆化处理，然后提取单克隆细胞株基因组DNA以及总蛋白，进行MLH1基因水平测序鉴定以及蛋白水平表达检测，获得MLH1基因敲除HeLa细胞系。本发明构建的MLH1基因敲除HeLa细胞系是一种基因稳定遗传的细胞系。本发明提供的方法可用于MLH1基因的定向敲除致使其功能失活，具有简便、高效、快速、低成本等特点，对于MLH1基因功能和相关通路的研究具有重要意义。

主权项：1.一种敲除MLH1基因的sgRNA，包括如SEQIDNO：1所示的sgRNA1以及如SEQIDNO：2所示的sgRNA2。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 武汉爱博泰克生物科技有限公司 一种构建MLH1基因敲除细胞系的方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD