申请/专利权人：福建省农业科学院农业工程技术研究所

申请日：2021-06-18

公开（公告）日：2021-11-19

公开（公告）号：CN113667628A

主分类号：C12N5/04(20060101)

分类号：C12N5/04(20060101);C12P17/06(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.04.25#授权;2021.12.07#实质审查的生效;2021.11.19#公开

摘要：本发明提供一种高产花青素刺葡萄悬浮细胞系建立的方法，依次通过材料与预处理、悬浮培养促发、细胞悬浮培养的建立、悬浮细胞继代增殖、悬浮细胞延时培养与花青素生产及悬浮细胞系保持等步骤来获取刺葡萄悬浮细胞系；其将在固体培养基中进行对数细胞同步增殖培养的刺葡萄愈伤组织接种到液体培养基中，于摇床振荡培养，将获得的种子细胞进一步培养，建立细胞高度分散、生长状态一致、紫红色均匀的刺葡萄悬浮培养细胞系，在此基础上进行增殖和长期继代保持。本发明可以在短时间内建立细胞高度分散、生长状态一致、紫红色均匀的刺葡萄悬浮培养细胞系，该细胞系有很强的花青素合成能力，具有高产花青素且高增殖效率、能长期继代保持的特点。

主权项：1.一种高产花青素刺葡萄悬浮细胞系建立的方法，其特征在于：包括如下步骤：1材料与预处理：以长期继代保持的紫红色刺葡萄愈伤组织细胞系为材料，挑选紫红色均匀的、生长状态一致的刺葡萄愈伤组织，于同一种固体培养基中进行对数细胞同步增殖培养3代，使刺葡萄愈伤组织生长状态达到同步化，愈伤组织团松散、紫红色均匀、绝大部分细胞呈圆形；2悬浮培养促发：将在固体培养基上进行对数细胞同步增殖培养的第4代刺葡萄愈伤组织培养至18天，于超净工作台中，取新鲜、松散易碎的红色愈伤组织，放入装有液体培养基的三角瓶中，用镊子轻轻夹散愈伤组织团，于25℃，光照强度2000～3000Lux，光照时间12h天的条件下，摇床转速120rpm，振荡培养；3细胞悬浮培养的建立：取经悬浮促发获得的分散性较好的刺葡萄悬浮细胞，按悬浮细胞液体积：新鲜的液体培养基体积＝1:8的比例，接种到新的MS液体培养基中培养10天后，进行继代培养，获得刺葡萄细胞悬浮液种子细胞；4悬浮细胞继代增殖：将获得的刺葡萄细胞悬浮液种子细胞，每隔10天按步骤3操作方式继代增殖；5悬浮细胞延时培养与花青素生产：将增殖培养后的刺葡萄悬浮细胞进行延时培养，即将增殖后的细胞继续培养至20天，达到悬浮细胞生长的稳定期，此时细胞中花青素含量也达到稳定期；6悬浮细胞系长期保持：采用对数中期细胞隔代交替继代培养，按步骤3操作方式，选择对数生长期中期即培养10天的刺葡萄悬浮细胞进行继代，并在1号液体培养基和2号液体培养基中采取隔代交替继代培养，即可长期继代保持刺葡萄悬浮细胞系；所述1号液体培养基为MS基本培养基附加1.0mgL2,4-D、30gL蔗糖的培养基，pH调整至6.0；所述2号液体培养基为MS基本培养基附加1.0mgL2,4-D、100mgL肌醇、30gL蔗糖的培养基，pH调整至6.0。

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权利要求：

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