申请/专利权人：新疆新姿源生物制药有限责任公司;新疆医科大学

申请日：2020-06-04

公开（公告）日：2022-08-12

公开（公告）号：CN111458442B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.08.12#授权;2020.08.21#实质审查的生效;2020.07.28#公开

摘要：本发明涉及化学检测技术领域，提供了一种孕马尿中结合雌激素含量的方法。孕马尿中的碳酸盐遇到无机酸会形成中性盐、水和二氧化碳气体，从而提高柱效，进而能够解决孕马尿HPLC测定结合雌激素含量时所遇到的，每次测定不到30个样品，柱压升高，柱效降低等诸多问题，保证了样品含量测定准确性，为生产提供可靠的数据。且利用碱性物质调节pH值为7.0～8.0，这是因为：a、碱性条件下，结合雌激素的存在状态相对稳定；b、孕马尿本身的pH值约为7.5～8.5，调节至偏碱性7.0～8.0更接近孕马尿原有条件；c、偏碱性时检测结果的真实性与重现性均具有优势。

主权项：1.一种孕马尿中结合雌激素含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：将孕马尿与无机酸混合进行前处理，然后用碱性物质调节pH至7.0～8.0，得到供试品溶液；将所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，以保留时间定性，以标准方程计算得到结合雌激素的含量，所述标准方程是以结合雌激素的浓度为自变量、峰面积为因变量的方程；所述结合雌激素包括雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠和17α-双氢马烯雌酮硫酸钠中的一种或多种；所述高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：C18柱；色谱柱规格：250mm×4.6mm，5μm；流动相：包括A相和B相，其中A相为磷酸二氢钠水溶液、乙腈和甲醇的混合溶液，所述A相中磷酸二氢钠水溶液的浓度为20mmolL，pH值为3.5；所述A相中磷酸二氢钠水溶液、乙腈和甲醇的体积比为17:2:1；B相为磷酸氢二钠水溶液和乙腈的混合溶液，所述B相中磷酸氢二钠水溶液的浓度为10mmolL，pH值为3.5；所述B相中磷酸氢二钠水溶液和乙腈的体积比为3:7；流动相洗脱程序为：0～18min，A相体积分数由70％逐渐降低为67％；18～23min，A相体积分数由67％逐渐降低为20％；23～28min，A相体积分数由20％逐渐升高为70％；28～35min，A相体积分数稳定在70％；流速：1.0mLmin；柱温：40℃；检测波长：205nm；进样量：20μL；不同结合雌激素在同一色谱条件下的不同保留时间处出峰；所述标准方程的测定包括以下步骤：分别配制17α-双氢马烯雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠和雌酮硫酸钠的二级标准品待测溶液；所述二级标准品待测溶液的溶剂均为甲醇-水的混合液，所述混合液中甲醇与水的体积比为1:1，所述混合液的pH值为9.0；分别将所述二级标准品待测溶液进行高效液相色谱检测，分别得到二级标准品的色谱图；对所述二级标准品待测溶液进行高效液相色谱检测的色谱条件与对所述供试品溶液进行高效液相色谱检测的色谱条件相同；根据所述二级标准品的色谱图，分别以17α-双氢马烯雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠和雌酮硫酸钠的浓度为自变量、峰面积为因变量，得到标准方程。

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百度查询： 新疆新姿源生物制药有限责任公司;新疆医科大学 一种孕马尿中结合雌激素含量的测定方法

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