申请/专利权人：苏州赛分科技股份有限公司

申请日：2022-08-09

公开（公告）日：2023-05-26

公开（公告）号：CN115058414B

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.05.26#授权;2022.10.04#实质审查的生效;2022.09.16#公开

摘要：本发明属于生物大分子分离纯化领域，涉及一种纯化质粒DNA的方法，该方法包括以下步骤：在碱裂解菌体后加入CaCl2溶液去除样品中80%‑90%的RNA得到产物1；将所获取的产物1通过核壳结构复合模式层析介质进行纯化得到产物2；所获取的产物2通过疏水层析柱进行纯化即得。本发明提供了一种批处理量大，成本低，周期短，生产风险低，工艺摸索简单，对产品开发人员专业能力要求低的纯化质粒DNA的方法。

主权项：1.一种纯化质粒DNA的方法，其特征在于，所述纯化质粒DNA的方法包括以下步骤：1）在碱裂解菌体后加入CaCl2溶液去除样品中80%-90%的RNA得到产物1；2）将步骤1）所获取的产物1通过核壳结构复合模式层析介质进行纯化得到产物2；3）将步骤2）所获取的产物2通过疏水层析柱进行纯化即得；步骤1）中所述CaCl2溶液的终浓度为0.5M，步骤2）中所述核壳结构复合模式层析介质为MonomixCore1000层析填料，步骤2）中所述产物1按照1~3mgml载量上样MonomixCore1000层析填料柱；步骤2）的具体方法为，先采用缓冲液A1进行平衡，然后加入产物1，再次用缓冲液A1平衡，收集流穿和后平衡得到产物2，然后加入缓冲液A2再生层析柱；所述缓冲液A1为50mmolLTris，10mmolLEDTA，pH7.2，所述缓冲液A2为1molLNaOH溶液；步骤3）所述疏水层析柱为MonomixMC30-HIC-Butyl填料柱，步骤3）所述产物2按照1~3mgml载量上样MonomixMC30-HIC-Butyl填料柱，步骤3）的具体方法为：先采用缓冲液A进行平衡，然后加入产物2，再次用缓冲液A平衡，平衡后，使用0%-100%缓冲液A线性洗脱，按照信号收集不同洗脱组分检测分析得到产物，CIP清洗再生层析柱，缓冲液A为50mmolLTris，10mmolLEDTA，3molLNH42SO4，pH7.2；缓冲液B为50mmolLTris，10mmolLEDTA，pH7.2。

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权利要求：

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