申请/专利权人：阜阳师范大学

申请日：2023-08-17

公开（公告）日：2023-12-08

公开（公告）号：CN117187352A

主分类号：C12Q1/6844

分类号：C12Q1/6844;C12Q1/6886

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.12.26#实质审查的生效;2023.12.08#公开

摘要：本发明公开了一种PMLRARA融合基因的检测方法，开发了一种高度特异性的核酸检测平台，能够在等温条件下定量PML‑RARA三种主要亚型中的长型。该平台整合了CRISPRCas12a核酸酶方法和滚环扩增RCA技术的优势。值得注意的是，RCA辅助的CRISPRCas12a反式切割系统通过利用了分子间G四链体结构的空间限制效应。这种创新设计有效地提高了CRISPRCas12a的局部浓度，从而加快了其对荧光报告核酸的切割效率，使PMLRARA融合基因表达的荧光光谱检测成为可能。

主权项：1.一种PMLRARA融合基因的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1crRNA的制备通过体外转录合成crRNA；2将4μL双蒸馏水ddH2O、2μL的2μM锁式探针PP、2μL的2μMbcr1、1μL浓度为5UμL的T4DNA连接酶和1μL10×T4连接缓冲液在15-17℃下孵育25-35分钟，进行结环反应，形成环型探针PP；3将2μM引物2μL、浓度为5UμL的Klenow片段聚合酶1μL、10×NEBuffer2反应缓冲液2μL、浓度为10UμL的Nt.BbvCI1μL、10×CutSmart2μL、25mM的dNTPs2μL混合均匀，配制成10μL的混合物，再将10μL的环型探针PP作为DNA模板加入到混合物中，进行RCA扩增，将得到的20μL的扩增混合物混36-38℃孵育1-1.5小时，在64-66℃下10-12分钟使酶灭活；3将8μL1μMCas12a、8μL1μMcrRNA、5μL10×reactionBuffer、1μLRNaseInhibitor40UμL的混合物在24-26℃下孵育10-12分钟，然后将22μL的混合物与2μL的10μMssDNA-FQ和6μL的ddH2O混合，37-38℃孵育1.8-2.2小时,得处理后Cas12a反应体系的样品备用；4最后，将步骤3所得50μL处理后得样品加入150μL的ddH2O中，转移到微量比色皿中进行荧光检测和记录。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 阜阳师范大学 一种PML/RARA融合基因的检测方法

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