申请/专利权人：中国中医科学院中药研究所

申请日：2023-12-07

公开（公告）日：2024-01-12

公开（公告）号：CN117384983A

主分类号：C12P17/16

分类号：C12P17/16;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.01.30#实质审查的生效;2024.01.12#公开

摘要：本发明公开了一种GSK‑3α抑制剂的制备方法。一种GSK‑3α抑制剂的制备方法，步骤如下：步骤一、关键合成酶的合成和表达载体的构建；步骤二、关键合成酶的表达；步骤三、酶促反应体系的搭建；步骤四、产物的分离，完成后即得到GSK‑3α抑制剂。本发明具有以下有益效果：1、以廉价且生物亲和性良好的L‑色氨酸和2,3‑二氯‑L‑苯丙氨酸为底物，规避了现有方法中毒性化学品作为底物的参与，提高原子利用率、减小化学污染和可能引入的毒副作用；2、提升了GSK‑3α抑制剂SB‑216763的产率。

主权项：1.一种GSK-3α抑制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：步骤一、关键合成酶的合成和表达载体的构建（11）对放线菌Lentzeaalbida的血红素依赖性氧化酶进行结构改造得到关键合成酶LA1263，所述关键合成酶LA1263的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；（12）利用Gibson拼接克隆技术，将关键合成酶LA1263的基因片段克隆到载体pMCSG10中得到表达载体pMCSG10-LA1263，将基因片段PmLAAD克隆到载体pET28a+中得到表达载体pET28a+-PmLAAD，将基因片段MarC克隆到载体pET26b中得到表达载体pET26b-MarC，其中：基因片段PmLAAD的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；基因片段MarC的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；（13）将构建好的表达载体pET28a+-PmLAAD、表达载体pMCSG10-LA1263、表达载体pET26b-MarC分别转化到感受态细胞BL21DE3中得到菌种溶液，分别于-80℃保存；步骤二、关键合成酶的表达（21）制备PmLAAD蛋白粗制裂解液；（22）制备LA1263蛋白粗制裂解液；（23）制备MarC蛋白粗制裂解液；步骤三、酶促反应体系的搭建（31）向反应容器中依次加入下列物质: ;（32）混匀后，震荡反应6-8h，震荡反应全程保持反应容器为敞口状态；（33）分别向反应容器中加入600mLMarC蛋白粗制裂解液、2.1gα-酮戊二酸、1.32g抗坏血酸、适量的硫酸亚铁，使得硫酸亚铁在菌液中的浓度为0.1mM，混匀后，继续震荡反应2h得到反应液；步骤四、产物的分离将步骤三得到的反应液进行后处理，完成后即得到GSK-3α抑制剂。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国中医科学院中药研究所 一种GSK-3α抑制剂的制备方法

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