申请/专利权人：中国科学院植物研究所

申请日：2023-11-01

公开（公告）日：2024-02-02

公开（公告）号：CN117487833A

主分类号：C12N15/70

分类号：C12N15/70;C12N15/81;C12N15/85;C12N15/62;C12N1/21;C12N1/19;C12R1/19;C12R1/125;C12R1/865

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.02.23#实质审查的生效;2024.02.02#公开

摘要：一种基于蔗糖致死基因SacB高效筛选蔗糖异构酶突变体的方法，本发明基于蔗糖致死基因SacB在基因反向筛选标记中的应用构建了高效蔗糖异构酶的筛选体系。该方法主要包括：1底盘宿主在SIase和SacB融合表达双质粒各表达时致死的蔗糖临界浓度的确认；2利用易错PCR对SIase进行建库，获得一系列SIases*，将其组装到质粒上；3致死浓度下对含有SIases*质粒的菌株进行生死筛选；4存活的菌株进行提质粒测序及重新转化，摇瓶发酵确定其产量。本发明利用蔗糖异构酶SIase和蔗糖致死基因SacB共表达来进行筛选的方法，成功筛选出高效转化蔗糖的蔗糖异构酶基因。

主权项：1.一种基于蔗糖致死基因SacB高效筛选蔗糖异构酶突变体的方法，其步骤包括：构建蔗糖异构酶SIase和蔗糖致死基因SacB在同一质粒上或双质粒系统上共表达，转化到细胞中，复苏繁殖增加细胞的数量和活性后，用诱导剂诱导让蔗糖异构酶基因表达一段时间，然后取适当稀释浓度涂布在含蔗糖致死浓度的抗性平板上对含蔗糖异构酶质粒的底盘宿主进行生死筛选。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院植物研究所 一种基于蔗糖致死基因（SacB）高效筛选蔗糖异构酶突变体的方法

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