申请/专利权人：洛阳市中心医院(郑州大学附属洛阳中心医院)

申请日：2020-12-31

公开（公告）日：2024-02-20

公开（公告）号：CN113151358B

主分类号：C12N15/867

分类号：C12N15/867;C12N15/12;C12N5/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.20#授权;2021.08.10#实质审查的生效;2021.07.23#公开

摘要：本发明涉及生物医学领域，公开了ZNF382稳定转染的弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株构建方法，包括慢病毒包装和病毒浓缩和慢病毒感染DLBCL细胞；还公开了构建的细胞株的应用。本发明构建的细胞株有助于拓宽对DLBCL发病机制的认识，为去甲基化药物在临床上应用于DLBCL和临床治疗DLBCL的研究提供了更稳定可靠的实验材料。

主权项：1.一种稳定转染ZNF382的弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：慢病毒包装和病毒浓缩培养获得待转染293T细胞25ml备用；将含有ZNF382基因序列的ZNF382慢病毒过表达质粒和辅助质粒混合后，与150μL转染试剂混合，室温放置12min后共转染293T细胞；转染6-8h后换液，分别于24h、48h、72h收集含有病毒的培养基上清，将3次收集的含有病毒的培养基上清混合后，4℃、2000rrnin离心10min，获取上清，用聚乙二醇浓缩法沉淀病毒；ZNF382基因序列指ZNF382的CDS序列，序列如下：GCTAGCATGTCTCAGGGATCAGTGTCATTCAAGGATGTGACTGTGGACTTCACCCAGGAGGAGTGGCAGCAACTAGACCCTGCTCAGAAGGCGCTTTACAGGGATGTGATGTTGGAAAACTATTGCCACTTCGTATCTGTGGGGTTTCACATGGCTAAGCCTGATATGATCCGCAAGTTGGAACAAGGAGAAGAGCTATGGACACAGAGAATTTTTCCAAGTTACAGCTACCTAGAAGAAGATGGGAAAACTGAAGATGTCTTAGTGAAGTTCAAAGAATACCAAGACAGGCATTCTAGACCCCTCATATTCATCAACCACAAAAAACTAATTAAGGAGAGAAGTAATATTTATGGTAAAACATTTACTCTAGGCAAGAACCGTATTTCAAAAACAATACTATGTGAATATAAACCTGATGGAAAAGTTTTGAAAAATATTTCAGAACTAGTCATTAGAAATATAAGCCCCATAAAAGAGAAGTTTGGTGACAGTACTGGATGGGAGAAATCACTCCTCAATACCAAGCATGAGAAAATTCATCCTGCAGTGAATCTCCATAAACAAACAGAAAGAGTTCTCAGTGGTAAACAGGAGCTTATTCAGCATCAGAAGGTTCAAGCTCCAGAGCAACCATTTGACCATAATGAATGTGAAAAATCCTTCCTGATGAAAGGAATGCTATTTACACATACTAGAGCTCACAGAGGAGAAAGAACCTTTGAATACAATAAAGATGGAATTGCCTTCATAGAAAAGTCAAGCCTCAGTGTCCATCCAAGTAATCTTATGGAAAAGAAGCCCTCTGCCTACAACAAATATGGGAAATTCCTCTGCAGAAAGCCTGTTTTTATTATGCCTCAGAGACCTCAAACAGAAGAGAAACCCTTTCACTGTCCTTACTGTGGGAATAACTTTAGAAGGAAGTCATACCTCATTGAACATCAGCGAATTCACACAGGTGAAAAACCTTATGTTTGCAATCAATGTGGAAAGGCCTTCCGTCAGAAGACAGCCCTCACCCTTCATGAGAAAACACATATAGAGGGGAAACCCTTTATTTGTATCGATTGTGGGAAGTCCTTCCGCCAGAAGGCCACCCTCACTAGACATCACAAAACACATACGGGGGAGAAAGCCTATGAATGTCCTCAGTGTGGAAGTGCCTTTAGGAAGAAGTCATACCTCATTGATCACCAGAGAACTCACACAGGAGAGAAACCGTATCAGTGTAATGAGTGTGGGAAGGCATTTATCCAGAAGACAACCCTCACTGTTCATCAGAGAACTCACACAGGAGAGAAACCCTATATTTGCAATGAATGTGGGAAGTCCTTCTGCCAAAAGACAACCCTCACTCTCCACCAGAGAATTCACACGGGGGAAAAACCCTATATTTGTAATGAATGTGGGAAGTCCTTCCGCCAGAAGGCAATCCTCACTGTTCATCACAGAATACATACAGGAGAAAAATCCAATGGGTGTCCTCAGTGTGGGAAAGCCTTCAGTAGGAAATCAAACCTCATTCGCCATCAGAAAACTCACACAGGCGAGAAACCATATGAATGTAAACAGTGTGGGAAGTTCTTCAGTTGTAAGTCAAACCTCATTGTCCATCAGAAAACTCACAAGGTAGAAACCACGGGAATTCAGTAAGGATCC；S2：慢病毒感染DLBCL细胞检测步骤S1中的ZNF382过表达组慢病毒滴度，调整ZNF382过表达组的病毒滴度为5×108TUml；在DLBCL细胞株处于对数生长期时，加入MOI值为100的浓缩病毒液，并使ploybrene终浓度为8μgml；感染12h后，将培养基更换为新鲜培养基；感染48h后，更换为含1μgml嘌呤霉素条件的培养基进行筛选，最终获得阳性感染细胞，即得ZNF382稳定转染的弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株；所述DLBCL细胞株为OCI-LY10或U2932细胞系细胞。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 洛阳市中心医院(郑州大学附属洛阳中心医院) ZNF382稳定转染的弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株构建方法及应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD