申请/专利权人：北京中卫医正科技有限公司;北京中卫医正肿瘤医学研究有限公司

申请日：2021-10-12

公开（公告）日：2024-02-27

公开（公告）号：CN113846059B

主分类号：C12N5/0783

分类号：C12N5/0783

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.27#授权;2022.01.14#实质审查的生效;2021.12.28#公开

摘要：本发明提供了3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，包括如下步骤：步骤一：第1天，将外周血单个核细胞置于含有IL‑2、淋巴母细胞激活因子、自体血清的培养基中进行培养；步骤二：第3天，加入含有IL‑2、3D肿瘤全抗原、自体血清的培养基中进行诱导激活培养；步骤三：第5天，加入含有IL‑2、T细胞双信号激活因子、自体血清的培养基中进行活化增殖培养；步骤四：第7‑15天，每2天定量加入含有IL‑2、OKT‑3、灭活胎牛血清的培养基进行细胞毒性T细胞扩增培养。本发明经过15天的扩增培养可获得扩增60‑120倍的CTL细胞，且相比于未诱导的外周血PBMC具有更强的肿瘤杀伤作用。

主权项：1.3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，包括如下步骤：步骤一：第1天，将外周血单个核细胞置于含有IL-2、淋巴母细胞激活因子和自体血清的培养基中进行培养，所述的淋巴母细胞激活因子为植物凝集素，其浓度为0.1μgml-5μgml；CTL细胞在Day1时，细胞呈单个悬浮分布；Day2时，经IL-2和淋巴母细胞激活因子激活后，出现小的细胞团，表明淋巴母细胞已激活；步骤二：第3天，加入含有IL-2、3D肿瘤全抗原和自体血清的培养基中进行诱导激活培养，所述的3D肿瘤全抗原为负载肿瘤全裂解物抗原的PLGA、明胶和海藻酸钠微球，其直径为0.1μm-10μm，浓度为0.1mlL-0.3mlL；CTL细胞开始呈现克隆样生长；步骤三：第5天，加入含有IL-2、T细胞双信号激活因子和自体血清的培养基中进行活化增殖培养；CTL细胞在IL-2和T细胞双信号激活因子的存在下呈现克隆样增殖，所述的T细胞双信号激活因子为OKT-3、IL-12和IFNγ的组合，其中OKT-3的浓度为5ngml-50ngml，IL-12的浓度为5ngml-50ngml，IFNγ的浓度为5ngml-50ngml；步骤四：第7-15天，每2天定量加入含有IL-2、OKT-3和灭活胎牛血清的培养基进行细胞毒性T细胞扩增培养，OKT-3的浓度为5ngml-50ngml；CTL细胞在IL-2和OKT-3的存在下呈现快速扩增；各步骤中所述的培养基均为X-Vivo15培养基。

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