申请/专利权人：青岛海尔生物科技有限公司

申请日：2023-11-27

公开（公告）日：2024-02-27

公开（公告）号：CN117604039A

主分类号：C12N15/867

分类号：C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00;C12N5/10;C12N15/12;C07K7/06

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.15#实质审查的生效;2024.02.27#公开

摘要：本发明提供了一种靶向KRASG12位点突变抗原的CTL的制备方法，属于生物医药技术领域；一种负载KRASG12位点突变抗原肽刺激细胞的制备方法，主要为制备稳定表达跨膜型CXCL10的T2细胞，并添加β2微球蛋白，KRASG12位点突变抗原肽制得；利用负载KRASG12位点突变抗原肽刺激细胞，制备靶向KRASG12位点突变抗原的HLA‑A*02:01限制性CTL，本发明制备CTL的抗原特异性占比在95％以上，整体扩增效率在300倍以上。

主权项：1.一种负载KRASG12位点突变抗原肽刺激细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：①将跨膜型CXCL10基因插入相应载体构建pLV[Exp]-Hygro-EF1A-CXCL10质粒，采用慢病毒包装试剂盒包装成慢病毒，即表达跨膜型CXCL10慢病毒；所述跨膜型CXCL10基因的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；②将表达跨膜型CXCL10慢病毒转染T2细胞，筛选获得稳定表达跨膜型CXCL10的T2细胞；③将稳定表达跨膜型CXCL10T2细胞进行辐照，细胞辐照量80-120Gy，辐照密度为2.5-3.5×106mL；④取辐照后稳定表达跨膜型CXCL10T2细胞，按照细胞密度0.8-1.2×106mL接种于RPMI-1640培养基，并添加β2微球蛋白3-8μgmL，KRASG12位点突变抗原肽8-12μM，进行培养，获得负载KRASG12位点突变抗原肽刺激细胞；所述KRASG12位点突变抗原肽为：KRASG12S突变抗原肽，氨基酸序列为KLVVVGASGVSEQIDNO.7；KRASG12V突变抗原肽，氨基酸序列为KLVVVGAVGVSEQIDNO.8；KRASG12R突变抗原肽，氨基酸序列为KLVVVGARGVSEQIDNO.9；KRASG12D突变抗原肽，氨基酸序列为KLVVVGADGVSEQIDNO.10；KRASG12C突变抗原肽，氨基酸序列为KLVVVGACGVSEQIDNO.11；或KRASG12A突变抗原肽，氨基酸序列为KLVVVGAAGVSEQIDNO.12。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 青岛海尔生物科技有限公司 一种靶向KRAS G12位点突变抗原的CTL的制备方法

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